2肝病与肝癌中EGFR、MMP2、MMP9表达及比较
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
表2 PHC中MMP2、MMP9与EGFR表达的比较
由表2可见，PHC中MMP2、MMP9与EGFR表达无显著差异 （x2=0.538，P>0.05）。
2.4CHD中EGFR、 MMP2、 MMP9三者表达的比较 2.4.1CHD中MMP2、MMP9表达的比较（表3）
由表3可见，CHD中MMP2、MMP9表达无显著差异(P>0.05)
2.3PHC中EGFR、MMP2、MMP9三者表达的比较 2.3.1 26例PHC中MMP2 、MMP9 表达阳性病例完全一致，即当 PHC病例MMP2阳性时，MMP9亦呈阳性，26例PHC中MMP2、MMP9阳 性21例，占80.77%；阴性5例，占19.23%。
2.3.2 PHC中MMP2、MMP9与EGFR表达的比较（表2）
正如本文观察到，慢性肝病中EGFR表达增 加时，MMP2、MMP9均表达减少，可能是因为肝 硬化形成中，肝细胞一方面增生形成假小叶， 另一方面，大量纤维化及TMP增多使MMP2、 MMP9合成减少所致。因此，临床对慢性肝病的 治疗应注意保护肝细胞不受损伤，减少肝细胞 增生，控制炎症，减少肝硬化程度，促进MMP2、 MMP9 的分泌。但是一旦肝癌形成，就要设法 抑制MMP2、MMP9的分泌，减少癌细胞的侵润与 转移。
基质金属蛋白酶是一类分解细胞外基质组分 的锌蛋白酶[3]。它们在有机体的生长发育中的细 胞外基质逆转与重塑以及疾病中的病理损害起着 极为重要的作用。MMP2是相对分子量为72000的明 胶酶A，MMP9是相对分子量为92000的明胶酶B，明 胶酶（Ⅳ型胶原酶）主要降解基底膜、Ⅳ型胶原 和明胶。明胶是形成间质中胶原的主要成分。在 体内由巨噬细胞、结缔组织细胞和肿瘤细胞合成 与分泌。
肝病与肝癌中EGFR、 MMP2、MMP9表达及比较
曹晓蕾 陈莉
原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)是危害人类健康的常 见肿瘤，尽管对其发生、发展、演化 过程进行了大量的研究，但其发生机 制尚未明了。对EGFR、MMP2、MMP9在 肝癌发生发展中的作用尚未见报道。 为此，本文采用免疫组化方法，检测 比较在慢性肝病与肝癌中EGFR、MMP2、 MMP9的表达，探讨其意义。
1.2方法：
⑵免疫组织化学（SP法）检测EGFR、MMP2、MMP9 在肝炎、肝硬化、肝癌组织中的表达。使用抗 体为EGFR(Santa cruz Biotechnology Inc),工 作 浓 度 1 ： 100; 鼠 抗 人 MMP9 单 克 隆 抗 体 （ 2M0335）, 工作浓度1:50; 鼠抗人MMP2 单克隆抗 体(2M-0330), 工作浓度1:50。EGFR染色过程中 使用胃蛋白酶消化，所有免疫组化切片经DAB染 色，苏木素轻微复染。以磷酸盐缓冲液(PBS)代 替第一抗体作为阴性对照。
大量研究表明基质金属蛋白酶-2（MMP2）、基 质金属蛋白酶9（MMP9） 与多种肿瘤的侵袭有关[4]， 但两者与PHC侵袭转移性的关系研究不多[5]。尤其 是如何用两者来判断PHC是否具有侵袭转移性报道 较少。本文发现，基质金属蛋白酶2(MMP2)在PHC、 CHD组织中均有表达，阳性率分别为 80.77%,76.19%,经x² 检验，MMP2在PHC、CHD组织中 表达无差异。在PHC中，癌组织，癌旁组织均有 MMP2的表达，因此，不能单纯以有无MMP2的表达来 判断PHC有无侵袭性。基质金属蛋白酶9(MMP9)在 PHC、CHD组织中阳性率分别为80.77%,52.38%,经x² 检验, MMP9 在PHC、CHD中表达有显著差异。MMP9 的高表达与PHC有一定相关性。
2.2 表1
EGFR 、MMP2、 MMP9在PHC和CHD中的比较（表1） EGFR、MMP2、MMP9在PHC和CHD中表达的比较
由表1可见， EGFR在PHC中表达的阳性率显著高于CHD中 （x2=9.24，P<0.01）；MMP9在PHC中表达的阳性率显著高 于CHD中（x2=4.31，P<0.05）；MMP2在PHC和CHD中表达的 阳性率无显著差异（x2=0.15，P>0.05）。
⑴HE染色切片病理观察，双盲法进行病理诊断。
1.3判断标准：
EGFR阳性定位于肝实质细胞胞浆中，呈棕黄色； MMP2、MMP9阳性定位于胞浆中，呈棕黄色，可见 于肝癌细胞、间质Ito细胞、再生肝细胞、新生 胆管细胞中。
1.4统计学处理：用x2检验，P值取小于0.05
作判断差异显著标准。
Fra Baidu bibliotek 2.结果
2.1 EGFR、MMP2、MMP9在CHD、PHC中的表达特征 EGFR 在 CHD 中 仅 有 较 弱 表 达 ， 阳 性 率 仅 为 28.57%(4/21) ；在PHC中呈异质性表达，阳性率为 73.08%(19/26)，并且呈较强表达。MMP2在CHD中呈较 强表达，阳性率为76.19%(16/21) ； MMP2在PHC中呈 较强表达，阳性率为80.77%(21/26) 。MMP9在CHD中 有较弱表达, 阳性率为52.38%(11/21) ， MMP9在PHC 中呈较强表达，阳性率为80.77%(21/26) 。
4.结论
4.1 EGFR在PHC中显著高于CHD,说明EGFR表达与PHC有一 定的相关。
4.2 MMP2、MMP9在PHC和CHD中表达比较无显著差异，在 PHC中具有一致表达，在CHD中表达亦无显著差异。
4.3 PHC 中 EGFR 表 达 与 MMP2 、 MMP9 表 达 无 显 著 差 异 （P>0.05） 4.4 CHD中EGFR表达与MMP2、MMP9表达有著差异（前者 P<0.01，后者P<0.05）说明肝病时的病理改变对MMP2、 MMP9表达有较显著影响，提示MMP2、MMP9在CHD和PHC中 可能有不同的作用机制，在CHD中MMP2、MMP9将能溶解胶 原间质，减少肝硬化的发生，而在PHC，更多的MMP2、 MMP9将能溶解癌间质，促进癌细胞的浸润与转移。
肝癌组织中，肿瘤细胞活跃生长，表达 较高的EGFR(73.08%)，同时也通过自分泌、 旁分泌作用使癌细胞和间质细胞分泌较多 的MMP2、MMP9，这与肿瘤进一步发展，降解 ECM而侵润转移有关。
众所周知，大部分肝癌均伴有明显的肝病背景，慢性肝 病中的显著特点是大量ECM沉积而合并肝炎肝硬化，肝细胞坏 死，炎细胞被吸引到局部，活化Kuffers细胞、单核细胞及血 小板释放多种增殖因子。TGF-α、EGF、TNF都使肝星状细胞 活化，增生转化为肌成纤维细胞，后者产生大量ECM。炎症阶 段是一个从基因活化到蛋白成分表达再到合成ECM在组织内沉 积的过程。肌成纤维细胞在增殖过程中必然分泌基质金属蛋 白酶，它可以使沉积的胶原降解。当胶原生成与降解失衡时， ECM过度沉积引起肝纤维化。随着纤维化加重，胶原酶合成减 少，基质金属蛋白酶抑制剂(TMP)增多，后者抑制MMP的活性， 阻止胶原降解，进一步加重纤维化。肌成纤维细胞增生过程 中还能合成各种生长因子，通过自分泌、旁分泌形式促进本 身增生，继续产生各种ECM成分，此时即使致病因子停止，肝 纤维化仍可继续发展，最终发展为肝癌。
2.4.2CHD中EGFR与MMP2、MMP9表达的比较（表4）
由表4可见，CHD中EGFR表达增高时，MMP2、MMP9表达减少， 而EGFR表达阴性中有较多MMP2、MMP9表达，差异显著 (P<0.05)
3.讨论 表皮生长因子受体（EGFR）是原癌基因C-erbB-1的表达 产物，分子量为170 KD，属于穿膜受体烙氨酸激酶家族的成 员，与细胞增殖、分化调节、肿瘤转化密切相关[1]。它在肿 瘤形成中的作用日渐受到重视。许多肿瘤组织都有较高水平 的EGFR的表达，并发现EGFR的表达与肿瘤的生物学行为有一 定的相关性。本文发现，EGFR在CHD组织中阳性表达率较低 （28.57%）,而在PHC中阳性表达率较高（73.08%）,经x² 检验， EGFR在PHC、CHD中的表达有显著差异，EGFR的高表达与PHC有 一定相关性。EGFR的高表达可能是其基因扩增和/或转录增加 所致，因此，有人设想将EGFR作为治疗的靶抗原，将抗EGFR 抗原的单克隆抗体与放疗或化疗剂连接制成“生物导弹”进 行抗肿瘤治疗[2]，若这一设想能够实现，再加上本文所发现 的EGFR在PHC中的高表达，就将为PHC的治疗提供一种新的思 路。
1.材料与方法
1.1材料：取南通医学院附属医院及周围市医 院肝病蜡块标本47例，其中肝癌标本26例、慢 性 肝 病 (chronic hepatic disease,CHD) 标 本 21例（包括肝炎、肝硬化）。连续切片4μm厚， 贴于APES处理的载玻片上。EGFR、MMP2 、MMP9 及免疫组化试剂盒购于北京中山生物试剂公司。
MMPS是ECM的降解酶，主要有三类：①间质胶原酶② 明胶酶③间充质溶解素。在大多数恶性肿瘤中，MMPS家族 的某些成员表达增高、活性增强，并与肿瘤病理分级相 关，具有肿瘤诊断、鉴别诊断和判断预后的临床价值。 肿瘤细胞在侵袭过程中需要基质金属蛋白酶对细胞外基 质进行酶解，肿瘤细胞在转移过程中要先后经过进出毛 细血管两个过程，在这两个过程中，肿瘤细胞必须穿过 内皮细胞基底膜，而这一过程又必须依赖MMPS对基底膜成 分的酶解。正因为如此，本文中MMP9在PHC中的高表达， 可能造成肿瘤细胞在侵袭、转移过程中突破各种屏障如 基底膜的能力大大增强，使肿瘤细胞易于发生转移。因 此，MMP9在PHC中的高表达可能预示着PHC复发、转移率的 提高，预后的不良。
由表2可见，PHC中MMP2、MMP9与EGFR表达无显著差异 （x2=0.538，P>0.05）。
2.4CHD中EGFR、 MMP2、 MMP9三者表达的比较 2.4.1CHD中MMP2、MMP9表达的比较（表3）
由表3可见，CHD中MMP2、MMP9表达无显著差异(P>0.05)
2.3PHC中EGFR、MMP2、MMP9三者表达的比较 2.3.1 26例PHC中MMP2 、MMP9 表达阳性病例完全一致，即当 PHC病例MMP2阳性时，MMP9亦呈阳性，26例PHC中MMP2、MMP9阳 性21例，占80.77%；阴性5例，占19.23%。
2.3.2 PHC中MMP2、MMP9与EGFR表达的比较（表2）
正如本文观察到，慢性肝病中EGFR表达增 加时，MMP2、MMP9均表达减少，可能是因为肝 硬化形成中，肝细胞一方面增生形成假小叶， 另一方面，大量纤维化及TMP增多使MMP2、 MMP9合成减少所致。因此，临床对慢性肝病的 治疗应注意保护肝细胞不受损伤，减少肝细胞 增生，控制炎症，减少肝硬化程度，促进MMP2、 MMP9 的分泌。但是一旦肝癌形成，就要设法 抑制MMP2、MMP9的分泌，减少癌细胞的侵润与 转移。
基质金属蛋白酶是一类分解细胞外基质组分 的锌蛋白酶[3]。它们在有机体的生长发育中的细 胞外基质逆转与重塑以及疾病中的病理损害起着 极为重要的作用。MMP2是相对分子量为72000的明 胶酶A，MMP9是相对分子量为92000的明胶酶B，明 胶酶（Ⅳ型胶原酶）主要降解基底膜、Ⅳ型胶原 和明胶。明胶是形成间质中胶原的主要成分。在 体内由巨噬细胞、结缔组织细胞和肿瘤细胞合成 与分泌。
肝病与肝癌中EGFR、 MMP2、MMP9表达及比较
曹晓蕾 陈莉
原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)是危害人类健康的常 见肿瘤，尽管对其发生、发展、演化 过程进行了大量的研究，但其发生机 制尚未明了。对EGFR、MMP2、MMP9在 肝癌发生发展中的作用尚未见报道。 为此，本文采用免疫组化方法，检测 比较在慢性肝病与肝癌中EGFR、MMP2、 MMP9的表达，探讨其意义。
1.2方法：
⑵免疫组织化学（SP法）检测EGFR、MMP2、MMP9 在肝炎、肝硬化、肝癌组织中的表达。使用抗 体为EGFR(Santa cruz Biotechnology Inc),工 作 浓 度 1 ： 100; 鼠 抗 人 MMP9 单 克 隆 抗 体 （ 2M0335）, 工作浓度1:50; 鼠抗人MMP2 单克隆抗 体(2M-0330), 工作浓度1:50。EGFR染色过程中 使用胃蛋白酶消化，所有免疫组化切片经DAB染 色，苏木素轻微复染。以磷酸盐缓冲液(PBS)代 替第一抗体作为阴性对照。
大量研究表明基质金属蛋白酶-2（MMP2）、基 质金属蛋白酶9（MMP9） 与多种肿瘤的侵袭有关[4]， 但两者与PHC侵袭转移性的关系研究不多[5]。尤其 是如何用两者来判断PHC是否具有侵袭转移性报道 较少。本文发现，基质金属蛋白酶2(MMP2)在PHC、 CHD组织中均有表达，阳性率分别为 80.77%,76.19%,经x² 检验，MMP2在PHC、CHD组织中 表达无差异。在PHC中，癌组织，癌旁组织均有 MMP2的表达，因此，不能单纯以有无MMP2的表达来 判断PHC有无侵袭性。基质金属蛋白酶9(MMP9)在 PHC、CHD组织中阳性率分别为80.77%,52.38%,经x² 检验, MMP9 在PHC、CHD中表达有显著差异。MMP9 的高表达与PHC有一定相关性。
2.2 表1
EGFR 、MMP2、 MMP9在PHC和CHD中的比较（表1） EGFR、MMP2、MMP9在PHC和CHD中表达的比较
由表1可见， EGFR在PHC中表达的阳性率显著高于CHD中 （x2=9.24，P<0.01）；MMP9在PHC中表达的阳性率显著高 于CHD中（x2=4.31，P<0.05）；MMP2在PHC和CHD中表达的 阳性率无显著差异（x2=0.15，P>0.05）。
⑴HE染色切片病理观察，双盲法进行病理诊断。
1.3判断标准：
EGFR阳性定位于肝实质细胞胞浆中，呈棕黄色； MMP2、MMP9阳性定位于胞浆中，呈棕黄色，可见 于肝癌细胞、间质Ito细胞、再生肝细胞、新生 胆管细胞中。
1.4统计学处理：用x2检验，P值取小于0.05
作判断差异显著标准。
Fra Baidu bibliotek 2.结果
2.1 EGFR、MMP2、MMP9在CHD、PHC中的表达特征 EGFR 在 CHD 中 仅 有 较 弱 表 达 ， 阳 性 率 仅 为 28.57%(4/21) ；在PHC中呈异质性表达，阳性率为 73.08%(19/26)，并且呈较强表达。MMP2在CHD中呈较 强表达，阳性率为76.19%(16/21) ； MMP2在PHC中呈 较强表达，阳性率为80.77%(21/26) 。MMP9在CHD中 有较弱表达, 阳性率为52.38%(11/21) ， MMP9在PHC 中呈较强表达，阳性率为80.77%(21/26) 。
4.结论
4.1 EGFR在PHC中显著高于CHD,说明EGFR表达与PHC有一 定的相关。
4.2 MMP2、MMP9在PHC和CHD中表达比较无显著差异，在 PHC中具有一致表达，在CHD中表达亦无显著差异。
4.3 PHC 中 EGFR 表 达 与 MMP2 、 MMP9 表 达 无 显 著 差 异 （P>0.05） 4.4 CHD中EGFR表达与MMP2、MMP9表达有著差异（前者 P<0.01，后者P<0.05）说明肝病时的病理改变对MMP2、 MMP9表达有较显著影响，提示MMP2、MMP9在CHD和PHC中 可能有不同的作用机制，在CHD中MMP2、MMP9将能溶解胶 原间质，减少肝硬化的发生，而在PHC，更多的MMP2、 MMP9将能溶解癌间质，促进癌细胞的浸润与转移。
肝癌组织中，肿瘤细胞活跃生长，表达 较高的EGFR(73.08%)，同时也通过自分泌、 旁分泌作用使癌细胞和间质细胞分泌较多 的MMP2、MMP9，这与肿瘤进一步发展，降解 ECM而侵润转移有关。
众所周知，大部分肝癌均伴有明显的肝病背景，慢性肝 病中的显著特点是大量ECM沉积而合并肝炎肝硬化，肝细胞坏 死，炎细胞被吸引到局部，活化Kuffers细胞、单核细胞及血 小板释放多种增殖因子。TGF-α、EGF、TNF都使肝星状细胞 活化，增生转化为肌成纤维细胞，后者产生大量ECM。炎症阶 段是一个从基因活化到蛋白成分表达再到合成ECM在组织内沉 积的过程。肌成纤维细胞在增殖过程中必然分泌基质金属蛋 白酶，它可以使沉积的胶原降解。当胶原生成与降解失衡时， ECM过度沉积引起肝纤维化。随着纤维化加重，胶原酶合成减 少，基质金属蛋白酶抑制剂(TMP)增多，后者抑制MMP的活性， 阻止胶原降解，进一步加重纤维化。肌成纤维细胞增生过程 中还能合成各种生长因子，通过自分泌、旁分泌形式促进本 身增生，继续产生各种ECM成分，此时即使致病因子停止，肝 纤维化仍可继续发展，最终发展为肝癌。
2.4.2CHD中EGFR与MMP2、MMP9表达的比较（表4）
由表4可见，CHD中EGFR表达增高时，MMP2、MMP9表达减少， 而EGFR表达阴性中有较多MMP2、MMP9表达，差异显著 (P<0.05)
3.讨论 表皮生长因子受体（EGFR）是原癌基因C-erbB-1的表达 产物，分子量为170 KD，属于穿膜受体烙氨酸激酶家族的成 员，与细胞增殖、分化调节、肿瘤转化密切相关[1]。它在肿 瘤形成中的作用日渐受到重视。许多肿瘤组织都有较高水平 的EGFR的表达，并发现EGFR的表达与肿瘤的生物学行为有一 定的相关性。本文发现，EGFR在CHD组织中阳性表达率较低 （28.57%）,而在PHC中阳性表达率较高（73.08%）,经x² 检验， EGFR在PHC、CHD中的表达有显著差异，EGFR的高表达与PHC有 一定相关性。EGFR的高表达可能是其基因扩增和/或转录增加 所致，因此，有人设想将EGFR作为治疗的靶抗原，将抗EGFR 抗原的单克隆抗体与放疗或化疗剂连接制成“生物导弹”进 行抗肿瘤治疗[2]，若这一设想能够实现，再加上本文所发现 的EGFR在PHC中的高表达，就将为PHC的治疗提供一种新的思 路。
1.材料与方法
1.1材料：取南通医学院附属医院及周围市医 院肝病蜡块标本47例，其中肝癌标本26例、慢 性 肝 病 (chronic hepatic disease,CHD) 标 本 21例（包括肝炎、肝硬化）。连续切片4μm厚， 贴于APES处理的载玻片上。EGFR、MMP2 、MMP9 及免疫组化试剂盒购于北京中山生物试剂公司。
MMPS是ECM的降解酶，主要有三类：①间质胶原酶② 明胶酶③间充质溶解素。在大多数恶性肿瘤中，MMPS家族 的某些成员表达增高、活性增强，并与肿瘤病理分级相 关，具有肿瘤诊断、鉴别诊断和判断预后的临床价值。 肿瘤细胞在侵袭过程中需要基质金属蛋白酶对细胞外基 质进行酶解，肿瘤细胞在转移过程中要先后经过进出毛 细血管两个过程，在这两个过程中，肿瘤细胞必须穿过 内皮细胞基底膜，而这一过程又必须依赖MMPS对基底膜成 分的酶解。正因为如此，本文中MMP9在PHC中的高表达， 可能造成肿瘤细胞在侵袭、转移过程中突破各种屏障如 基底膜的能力大大增强，使肿瘤细胞易于发生转移。因 此，MMP9在PHC中的高表达可能预示着PHC复发、转移率的 提高，预后的不良。