实验4 微生物对表面活性剂的降解
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a 无菌操作分别取泥样1g或水样1mL于厌氧管中（厌氧管已灭菌）；
b 加液体培养基至满，拧上螺口帽，造成厌氧环境； c 在温度为30℃，光强为3000～5000lux下培养箱中培养1－2周。
14
示意图
Second. 半固体培养基（加满）
First. 1 g 土壤或1 ml污水
光照富集培 养2 周
15
培养基：蛋白胨0.5g ；NH4NO3 0.5g ;KH2PO4 0.1g; K2HPO40.1g;
NaCl 0.5g；蒸馏水100ml；pH 6.7~7.2; 灭菌备用。（每组4瓶）
合成洗涤剂：4种浓度的培养液（含LAS：40、120、180、240 mg/L）
。培养液分装于500ml三角瓶，每瓶注100ml，不同LAS浓度标记清楚， 灭菌备用。
11
5. 实验报告
1 . 绘出对LAS的曲线。
2. 计算微生物对LAS的降解速率并阐述在降解过程中 应注意的事项。
3. 分析不同的浓度LAS对微生物的降解速率的影响。
12
Байду номын сангаас
光合细菌的富集培养
熊金波
13
光合细菌的富集培养
1.采样：选取有机污染严重的水塘或有机质丰富的园地做为 采样地点。
2.样品的富集：
5
3.实验材料和方法
亚甲基蓝溶液： 100mg 亚甲基蓝溶于100ml蒸馏水。取 30ml于1000ml 容量瓶中，加6.8ml纯H2SO4 和50g NaH2PO4.2H2O, 定容至1000ml。 LAS标准溶液： 称取LAS 0.5 （99.5％LAS标准品）溶于 500ml 蒸馏水，浓度为1mg/ml。取此液10ml稀释至1000ml， 则LAS浓度为0.01mg/ml = 10mg/L。 洗涤液 ： 取6.8ml分析纯浓H2SO4及50gNaH2PO4.2H2O溶 于蒸馏水并稀释至1000ml
7
4.实验方法 LAS测定
绘制标准曲线： 取0ml、2ml、5ml、10ml、15ml、20ml LAS 标准液（
0.01mg/ml）稀释至100ml制成不同浓度标准液。标准液100ml装于250ml分 液漏斗中，用H2SO4调节pH值至微酸性，加亚甲基蓝液25ml。
1.向上述分液漏斗中加氯仿10ml，猛烈振荡30s，静置分层，将氯仿层排 入另一个250ml分液漏斗，如此提取二次。(萃取剩余LAS） 2.洗涤：在上述提取液中加入50ml洗涤液，剧烈振荡30s，静置分层，将 分液漏斗中的氯仿层缓缓放下至一个50ml容量瓶中。 3.再次提取：加氯仿6ml于步骤②的水液中，振荡分层后将氯仿层并入上 述步骤②容量瓶中。如此提取二次，然后用氯仿稀释至50ml刻度处。 4.测定LAS：用纯氯仿做空白对照，波长为652nm，测定各标准液的光密 度值（OD）。以光密度值做纵坐标，LAS的毫克数（LAS原标准溶液浓 度0.1mg/mlⅹ所取该液的毫升数）做横坐标，绘制标准曲线，并通过图解 法求出标准曲线的斜率K。
8
标准曲线示意图
1.8 1.6 1.4 1.2 OD值 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 5 10 15 20 25 LAS浓度 （mg/ml)
9
y = 0.08x - 0.005 R²= 0.998
培养液测定
取离心后的培养液上清1~10ml，于250ml分液漏斗中，用蒸 馏水稀释至100ml。
3
LAS 的生物降解过程
ω氧化使烷基链末端的甲基被氧化为羧基; β氧化使羧基被氧化并从末端分解脱落两个碳原子
微生物解能力受菌株类型、表面活性剂浓度及其 他理化因素影响
4
3.实验材料和方法
菌种：气单胞菌D-4（Aeromonas sp . D –4）
考察不同起浓度LAS对微生物降解率的影响
同绘制标准曲线步骤，测得样品的氯仿提取液的光密度值。
按下式计算样品中LAS浓度
10
LAS降解度计算
D为降解度，％；C0为振荡培养开始时的起始LAS浓度，mg/L；Ct
为振荡培养若干小时后的残留LAS浓度，mg/L。
修正：如果未接菌液的空白对照经培养后，LAS也有所减少，其
差值为C’(mg/L)，则
6
4.实验方法
接种：气单胞菌D-4斜面菌种1支，10ml无菌水洗下 菌苔，充分摇匀打散，制成浓菌液。 每瓶培养液中接入菌液1ml，每种LAS浓度接1瓶，另 设1瓶不接种作负对照。
培养: 32℃，振荡200r/min培养48h。离心除去菌体 （8000 r/min离10min），上清液留作测定LAS用。
微生物对表面活性剂的降解
熊金波
1
1.实验目的
了解微生物对有机物的降解； 掌握微生物对有机物降解效率的测定。
2
2. 实验原理
表面活性剂：具有固定的亲水亲油基团，在溶液的 表面能定向排列，使表面张力显著下降的物质。 表面活性剂是合成洗涤剂的主要有效成分，多是直 链型烷基苯磺酸盐类（LAS）。 水体： 导致水生细胞膜透性增加，胞内物质外渗， 最终引起细胞解体。产生泡沫，阻碍水体和大气间 的气体交换，引起水质恶化。
b 加液体培养基至满，拧上螺口帽，造成厌氧环境； c 在温度为30℃，光强为3000～5000lux下培养箱中培养1－2周。
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示意图
Second. 半固体培养基（加满）
First. 1 g 土壤或1 ml污水
光照富集培 养2 周
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培养基：蛋白胨0.5g ；NH4NO3 0.5g ;KH2PO4 0.1g; K2HPO40.1g;
NaCl 0.5g；蒸馏水100ml；pH 6.7~7.2; 灭菌备用。（每组4瓶）
合成洗涤剂：4种浓度的培养液（含LAS：40、120、180、240 mg/L）
。培养液分装于500ml三角瓶，每瓶注100ml，不同LAS浓度标记清楚， 灭菌备用。
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5. 实验报告
1 . 绘出对LAS的曲线。
2. 计算微生物对LAS的降解速率并阐述在降解过程中 应注意的事项。
3. 分析不同的浓度LAS对微生物的降解速率的影响。
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Байду номын сангаас
光合细菌的富集培养
熊金波
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光合细菌的富集培养
1.采样：选取有机污染严重的水塘或有机质丰富的园地做为 采样地点。
2.样品的富集：
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3.实验材料和方法
亚甲基蓝溶液： 100mg 亚甲基蓝溶于100ml蒸馏水。取 30ml于1000ml 容量瓶中，加6.8ml纯H2SO4 和50g NaH2PO4.2H2O, 定容至1000ml。 LAS标准溶液： 称取LAS 0.5 （99.5％LAS标准品）溶于 500ml 蒸馏水，浓度为1mg/ml。取此液10ml稀释至1000ml， 则LAS浓度为0.01mg/ml = 10mg/L。 洗涤液 ： 取6.8ml分析纯浓H2SO4及50gNaH2PO4.2H2O溶 于蒸馏水并稀释至1000ml
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4.实验方法 LAS测定
绘制标准曲线： 取0ml、2ml、5ml、10ml、15ml、20ml LAS 标准液（
0.01mg/ml）稀释至100ml制成不同浓度标准液。标准液100ml装于250ml分 液漏斗中，用H2SO4调节pH值至微酸性，加亚甲基蓝液25ml。
1.向上述分液漏斗中加氯仿10ml，猛烈振荡30s，静置分层，将氯仿层排 入另一个250ml分液漏斗，如此提取二次。(萃取剩余LAS） 2.洗涤：在上述提取液中加入50ml洗涤液，剧烈振荡30s，静置分层，将 分液漏斗中的氯仿层缓缓放下至一个50ml容量瓶中。 3.再次提取：加氯仿6ml于步骤②的水液中，振荡分层后将氯仿层并入上 述步骤②容量瓶中。如此提取二次，然后用氯仿稀释至50ml刻度处。 4.测定LAS：用纯氯仿做空白对照，波长为652nm，测定各标准液的光密 度值（OD）。以光密度值做纵坐标，LAS的毫克数（LAS原标准溶液浓 度0.1mg/mlⅹ所取该液的毫升数）做横坐标，绘制标准曲线，并通过图解 法求出标准曲线的斜率K。
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标准曲线示意图
1.8 1.6 1.4 1.2 OD值 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 5 10 15 20 25 LAS浓度 （mg/ml)
9
y = 0.08x - 0.005 R²= 0.998
培养液测定
取离心后的培养液上清1~10ml，于250ml分液漏斗中，用蒸 馏水稀释至100ml。
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LAS 的生物降解过程
ω氧化使烷基链末端的甲基被氧化为羧基; β氧化使羧基被氧化并从末端分解脱落两个碳原子
微生物解能力受菌株类型、表面活性剂浓度及其 他理化因素影响
4
3.实验材料和方法
菌种：气单胞菌D-4（Aeromonas sp . D –4）
考察不同起浓度LAS对微生物降解率的影响
同绘制标准曲线步骤，测得样品的氯仿提取液的光密度值。
按下式计算样品中LAS浓度
10
LAS降解度计算
D为降解度，％；C0为振荡培养开始时的起始LAS浓度，mg/L；Ct
为振荡培养若干小时后的残留LAS浓度，mg/L。
修正：如果未接菌液的空白对照经培养后，LAS也有所减少，其
差值为C’(mg/L)，则
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4.实验方法
接种：气单胞菌D-4斜面菌种1支，10ml无菌水洗下 菌苔，充分摇匀打散，制成浓菌液。 每瓶培养液中接入菌液1ml，每种LAS浓度接1瓶，另 设1瓶不接种作负对照。
培养: 32℃，振荡200r/min培养48h。离心除去菌体 （8000 r/min离10min），上清液留作测定LAS用。
微生物对表面活性剂的降解
熊金波
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1.实验目的
了解微生物对有机物的降解； 掌握微生物对有机物降解效率的测定。
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2. 实验原理
表面活性剂：具有固定的亲水亲油基团，在溶液的 表面能定向排列，使表面张力显著下降的物质。 表面活性剂是合成洗涤剂的主要有效成分，多是直 链型烷基苯磺酸盐类（LAS）。 水体： 导致水生细胞膜透性增加，胞内物质外渗， 最终引起细胞解体。产生泡沫，阻碍水体和大气间 的气体交换，引起水质恶化。