常用培养基的制备消毒与灭菌

4、注意事项：
1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为 “0”时方可打开。
• 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内 冷空气的排除是否完全极为重要，因为空 气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以， 当水蒸气中含有空气时，在同一压力下， 含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。 灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温 度的关系见表2
查氏合成培养基
• 查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌 的培养基,其配方如下：
• NaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g, MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗 糖 30g,琼脂15～20g, H2O 1000ml,pH自然
麦芽汁培养基
• 用来培养酵母菌,干麦芽粉加4倍水,在 50-60℃保温糖化3-4小时，用碘液试验 检查至糖化完全为止,调整糖液浓度,煮沸 后，过滤，调pH为6.0。
牛肉膏蛋白胨培养基
• 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛 和最普通的细菌基础培养基。其配方如 下：
• 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼 脂15～20g，水1000mL，pH7.0～ 7.2(后调)
高氏1号培养基
• 高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌 的合成培养基。其配方如下：
• 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.5g， MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂15～20g，水1000mL， pH7.4～7.6。
消毒与灭菌效果的检查：
消毒与灭菌效果好坏，直接关系到菌种成品 率的高低。因此，除了要严格把好消毒、灭菌关 外，同时还要严格执行检验制度，两者缺一不可。
培养基灭菌效果检验： １、试管母种培养基经灭菌后，从高压灭菌锅中 不同部位随机抽取５支，放置28±2℃恒温箱中 培养5-7天,如无霉菌、细菌、酵母等杂菌出现， 则认为灭菌彻底。
方法：生态模拟；查阅文献; 精心设计; 试验比较 步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、
加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查
称量
熔化
调pH值
分装与加塞
包扎(1)
包扎(2)
灭菌
无菌检查
培养基种类:
碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水 一、按成份的不同划分
天然培养基、合成培养基、半合成培养基
缺点：穿透力不大。距照射物<1.2m为宜。 应用：无菌室，医院。 注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用。
化学药品灭菌：
原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。
杀菌剂如重金属离子； 抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。
注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种
类以及微 生物所处的环境有关。
常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸
法。 设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。 优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。
注意事项：1、压力适当； 2、无菌条件下进行； 3、防止渗透现象。
辐射灭菌：
原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，
以265-Fra Baidu bibliotek66杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸 收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时 间的乘积成正比。
常压蒸汽灭菌：
对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛 乳培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采 用间歇灭菌方法。
煮沸灭菌法： 适用注射器和解剖器皿，时间10－15min，
超高温杀菌
135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。
优点 ：保持食品价值和营养成分。
过滤除菌：
原理：介质在有压力时阻隔微生物。 适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此
２、原种及栽培种培养基经灭菌后，从灭菌锅中上、中、 下三层进行取样，每层对角线随机取样５瓶（袋），放 置28-30℃恒温培养箱中培养5-7天，检查是否有霉菌 菌落生成。如检查是否有细菌没有杀死，必须使用细菌 培养基进行检测。上述抽取的样品，分别在无菌下取出 少量培养基接入细菌培养基，然后在37℃培养24小时， 检查结果没有细菌菌落产生，说明灭菌彻底。如某一位 置试样出现杂菌，可能是锅内有“死角”，也可能是灭 菌锅结构不合理，或没有按操作要求堆积， 气撒料， 或一次性撒料过厚，或菌种瓶、袋过于拥挤，蒸汽流通 不均匀造成；如不分部位，大部分或几乎全部瓶、袋都 出现杂菌，说明灭菌温度或灭菌时间不够，如果是高压 灭菌锅出现这种现象，则说明是冷窑没有排除干净所致。
福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等
常用消毒剂种类
类别 酚类
醇类 氧化剂 重金属盐 氧化剂 表面活性 剂 染料
作用机制
常用种类
蛋白变性，细胞膜损 石炭酸 伤
蛋白变性
乙醇
氧化、蛋白沉淀
高锰酸甲
氧化、蛋白酶变性 红汞、硫柳汞
氧化、蛋白沉淀
过氧乙酸、碘酒
蛋白变性，细胞膜损 新洁而灭 伤
干扰氧化、抑制繁殖 龙胆紫
湿热法 ：
原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固， 因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿 热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干 热好。
高压蒸汽灭菌法：
1、设备：高压灭菌锅
2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有 所变化。
3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌， 也可用于玻璃器皿的灭菌。
干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌
1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子 等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。
2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热 灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加 热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞 含水量越大，凝固越快。
3、注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）温度控制在<180°； 3）物品不能太挤； 4）温度降至70°时才开箱门。
微生物学实验
常用培养基的制备、 灭菌与消毒
一. 目的要求 二. 培养基分类 三. 消毒与灭菌 四. 结果检查
实验目的：1.了解培养基的配制原理
2.掌握配制培养基的一般方法和步骤
培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生 代 谢产物的营养基质
原则：目的明确 ;营养协调;控制PH、渗透压等条
件;经济节约
种类 石炭酸 乙醇 高锰酸甲 红汞 硫柳汞 过氧乙酸 碘酒 新洁而灭 龙胆紫
各种消毒剂的应用
使用浓度 用途 3%~5% 地面、器具表面、皮肤消毒 3%~5% 皮肤、体温计消毒 3%~5% 皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒 3%~5% 皮肤、粘膜、小创伤消毒 3%~5% 皮肤消毒、手术部位消毒 3%~5% 塑料、玻璃器材消毒 3%~5% 皮肤消毒 3%~5% 手术洗手、浸泡手术器械 3%~5% 浅表创伤消毒
BCG-MSG培养基鉴定几种常见的丝状真菌
新鲜平皿培养基
搁置斜面
消毒与灭菌：
消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
方法：
物理的方法：加热、过滤、辐射 化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要
破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药 物及抗生素等。
加热法：
二、按培养基的物理状态划分 固体培养基、液体培养基、半固体培养基
三、按培养基用途划分 基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、选择 培养基
一级种培养基:
一级种又称母种，其培养基一般用试 管作为容器，所以又称试管斜面培养基， 这类培养基又常用于菌种分离提纯，扩大， 转管及菌种保存等。
二、三级种培养基:
二、三级种培养基通常采用天然营养 物质，如秸秆、棉籽壳、蔗渣等农作物废 物，加适量的无机盐类等制成固体培养基。