口蹄疫疫苗中佐剂专利技术综述

科学技术创新2019.18

口蹄疫疫苗中佐剂专利技术综述

张聪吴丹阳（等同第一作者）

（国家知识产权局专利局专利审查协作天津中心化学发明审查部，天津300300）

1概述口蹄疫是偶蹄兽的一种急性、热性、高度接触传染性疾病。以在口腔黏膜、蹄部及乳房上发生水疱和烂斑为其临床特征。俗称“口疮”、“蹄黄”、“脱靴症”。对于猪牛羊等家畜极具威胁。佐剂指先于抗原或同时与抗原注入体内，可增强机体对抗原的免疫应答程度或改变免疫应答类型的物质。佐剂的作用机制为：（1）改变抗原物理性状，延缓抗原降解，延长抗原在体内潴留时间；（2）刺激抗原提呈细胞，增强其对抗原的加工和提呈；（3）刺激淋巴细胞增殖和分化，增强和扩大免疫应答。2口蹄疫疫苗中佐剂专利技术综述2.1铝盐佐剂铝盐佐剂是研究最早且应用较为广泛的一种佐剂。抗原可吸附于铝盐颗粒上而使其稳定性提高，在局部达到缓慢释放抗原的效果，并且在其注入部位可强烈吸引树突状细胞（DC ）和郎格罕细胞（LC ）等识别与内吞，从而可增强体液免疫应答。德国拜耳公司早在1962年首次将佐剂应用于口蹄疫疫苗的制备（GB6039591B ），其将获取的口蹄疫病毒提取物与灭菌冷却的氢氧化铝等量混合后灭活，从而制备得到能够达到更为有效免疫效果的口蹄疫疫苗混合物。德国贝林沃克公司于1963年也提出了有关铝盐佐剂的专利申请（DE1155881B ），其将猪、牛、羊等牲畜的口蹄疫病毒经多次传代培养后获取减毒病毒，再将其与氢氧化铝混合后进行灭活所制备的混合物比单纯的减毒病毒具有更稳定的免疫性。多年来随着对铝盐佐剂的不断研发与应用，其缺陷也越发明显，由于铝盐佐剂不耐低温因此会因其不能冻干而无法有效保存；在皮肤局部注射的区域可能会因刺激而产生肿胀、肉芽肿等；不能诱导T 细胞反应而不能抵抗病毒的感染。2.2油乳佐剂鉴于铝盐佐剂的不足之处，为了进一步提高疫苗的稳定性和免疫效力，继铝盐佐剂之后油乳佐剂收到了广泛的研究。油乳佐剂分为油包水型（W/O ）乳剂与水包油型（O/W ）乳剂。油包水型（W/O ）乳剂，一般是指将通过表面活性剂将水溶液均匀分散在油相中制成乳液。由于油相良好的包裹封闭作用，其可使溶解于水相中的佐剂缓慢释放而形成持续不断的刺激，从而可有效提高免疫持久性与抗体效价的幅度。美国默沙东公司于1964年提出了题为一种可用作免疫佐剂的乳剂（CY397A ）的专利申请，其以植物油作为油相，甘露醇单油酸酯作为乳化剂，将铝剂选择为单硬脂酸铝，将铝盐与甘露醇单油酸酯加入油相混合均匀后分批加入水相通过机械乳化等方法将其制备成油包水型乳剂，经相关实验表明，将其作为免疫佐剂与免疫物质共同注射4周后，宿主仍具有较高的抗体滴度。美国氰胺公司于1968年（US04757131A ）便尝试将含有铝盐的油包水型乳剂应用于口蹄疫疫苗的制备中，所制备的含有铝盐佐剂的疫苗在适宜的条件下（4℃）能够至少稳定保存一年，其具有较低的粘度并且注射后能够持续释放抗原，因此更有利于快速注射。虽然油包水型乳剂提高抗体效价的幅度和免疫持久性方面远高于铝盐佐剂，但其并未解决铝盐佐剂会引起不良反应的缺陷，并且由于大量的油相成分长期潴留于组织中不能代谢，易引起过敏反应以及无菌化脓，因此对于油相成分的组成与用量渐渐成为油包水型乳剂的改进方向。水包油型（O/W ）乳剂，一般是指将通过表面活性剂的乳化作

用而将油相均匀分散在水相中所制成的乳液。由于油相的用量较少且被水相有效包覆，故水包油型乳剂具有良好的生物安全性。由美国默沙东制药公司和法国赛诺菲集团合资的梅里亚动物保健有限公司（US61241171P ）制备了一种含有皂苷、氢氧化铝的水包油型乳剂，该乳剂在5℃条件下可储存3年，具有良好的稳定性；并且将其作为佐剂与口蹄疫病毒共同使用，对于肌肉注射的局部皮肤无不良影响（红肿等）；受试动物能够对含有佐剂的口蹄疫病毒抗原更快速的进行免疫应答，且具有更高的平均抗体滴度。基于乳剂本身可能就具有佐剂活性，因此对于佐剂的研究方向开始转向关注一些本身具有一定免疫佐剂效应的物质。2.3细胞因子免疫佐剂细胞因子一般是指由活细胞分泌的具有生物活性的多肽或蛋白产物，能够调节固有免疫和适应性免疫应答，从而影响抗原的激活呈递和识别等过程，具有明显的免疫佐剂效应，可增强抗原特异性免疫反应。干扰素（IFN ）和白细胞介素（IL ）是最为常用的细胞因子免疫佐剂。白细胞介素-1，2,3,4,6,CSF 等均是研究的较为广泛的免疫

佐剂，与传统疫苗铝佐剂相比，白细胞介素一次少量接种即可在宿主体内长时间低量表达而达到良好的免疫性。近年来对于白细胞介素的研发也是不断进展，（US20170182154A1）在抗原之前施用IL-17时，疫苗通过增加CD8+T 细胞应答，可以在受试

者中增加对抗原的免疫应答，可在受试者中引发更强烈的免疫应答。虽然很早就有关于干扰素作为免疫佐剂的研究，但是由于良好的肿瘤免疫治疗作用，干扰素的佐剂效应主要应用于抗肿瘤方面，因而有关干扰素作为佐剂与口蹄疫疫苗联合使用的研发开展较晚，美国普拉姆岛动物疾病中心（US20090269372A1）发现了发现I 型干扰素（IFN-α/β）可以抑制细胞培养中的口蹄疫病毒（FMDV ）复制，发现II 型pIFN （pIFN-γ）在细胞培养中也具有抗FMDV 的抗病毒活性，并且pIFN-γ与pIFN-α组合后具有协同抗病毒作用，有效的达到免疫作用。中国农业科学院兰州兽医研究所对于干扰素、白细胞介素等作为佐剂应用于口蹄疫疫苗方面研究较为摘要：本文针对口蹄疫疫苗中佐剂相关的国内外专利文献进行检索、收集、统计及分析，基于佐剂的类型分析了口蹄疫疫苗

中佐剂专利技术。

关键词:佐剂；疫苗；口蹄疫；专利中图分类号：S851.3,T-18文献标识码：A 文章编号：2096-4390（2019）18-0188-02（转下页）

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2019.18科学技术创新深入（CN1772297A，CN1772298A ），其以物细胞表达质粒pcDNA3.1和猪γ-干扰素基因(pIFN-γ)的重组质粒pcDNA-pIFN-γ作为佐剂，可使低应答或无应答以及应答不全的疫苗产生有效的免疫反应，能显著增强免疫效果，类似的其以动物细胞表达质粒pcDNA3.1和猪白介素6基因(pIL-6)构成的重组质粒pcDNA-pIL-6作为佐剂，达到相似的增强免疫的效果。细胞因子已成为佐剂的研究重点，但细胞因子昂贵，种属特异，稳定性差，有一定毒性及潜在的自身免疫性，如果这些问题能被克服，可成为一些预防和具有治疗性的疫苗的重要成分。

2.4中药类佐剂

大多数中药具有抑菌与抗病毒的作用，在中药佐剂的研发上，中国处于较为前沿的地位。基于成本等实际因素考虑，天然植物多糖类佐剂与皂苷类佐剂是最早应用于口蹄疫灭活疫苗的中药佐剂。北京农学院与保定冀中药业有限公司于2009年联合提出了（CN101554476A ）以黄芪多糖，人参皂苷Rb1，白术内酯、甘草次酸作为口蹄疫疫苗免疫增强剂的专利申请，其增强免疫的机理在于保护微血管内皮细胞免受口蹄疫疫苗的伤害，在此基础上发挥微血管内皮细胞识别、呈递抗原、调动其它免疫细胞的功能，故在理论上还能消除现有口蹄疫疫苗的毒副作用；此外该申请中添加了具有诱导微血管内皮细胞产生干扰素的中药成分，而内源性的干扰素具有诱导感染细胞产生抗病毒蛋白的功能，故在理论上还具有清除细胞内感染病毒的功能。同年，北京农学院与北京康牧众诚动物药品有限公司联合提出了作用相似的（CN101554476A ）以黄芪多糖、硫酸软骨素、

人参皂苷Rb1、丹参素作为口蹄疫疫苗免疫增强剂的专利申请。

2.5其他佐剂2000年以后，随着我国科学技术的不断发展与进步，我国在佐剂领域的研究逐渐趋于前沿化，同时随着高分子材料学与纳米医学的不断发展进步，由高分子材料所构建的纳米载体能够有效携载免疫增强剂而制备出纳米佐剂，具有良好的靶向性、稳定性、可控释放性。一般认为纳米佐剂可以诱导共刺激分子的正向调节以及刺激产生细胞因子，包裹或吸附的抗原颗粒正是巨噬细胞（MC ）和树突状细胞（DC ）的首选吞噬目标，为实现机体有效的免疫反应完成了重要的一步，特别是细胞免疫。中国专利申请（CN102274498A ）将制备得到的纳米乳剂作为佐剂用于口蹄疫病毒疫苗中，其相较普通佐剂的口蹄疫病毒疫苗具有给药量小、稳定性好、生物利用度高的优点，用于预防口蹄疫病毒感染。

3展望

合理使用佐剂，不仅可以节约抗原的使用量，而且能迅速刺激免疫系统，增强免疫应答，于疫苗而言，佐剂的选择显得尤为重要。尽管有很多新型佐剂不断出现，但是安全性与有效性仍会是未来关注的方向，对于口蹄疫疫苗佐剂而言，基于口蹄疫疾病各发病阶段以及患病生物的生理特点而设计安全性更高，具有良好的靶向性、稳定性、可控释放性、高效免疫性的疫苗及佐剂，可能是未来研发的热点方向。

作者简介：张聪（1990-），男，研究实习员，贵州人，硕士研究生，主要从事发明专利实质审查工作。第二作者,吴丹阳对本文贡献等同第一作者。

水利水电工程机电技术问题分析

黎冠辉

（肇庆市高要区新桥镇人民政府，广东肇庆526116）

近年来，随着科技水平的不断提高，工业生产设备也对现代化和自动化提出了相应的要求，现阶段多数设备已经实现了机电化生产，尤其在水利水电工程中，设备机电化更是得到了广泛的普及。由于水利水电工程机电化设备在建设生产中发挥着重要作用，其质量对整个工程都有极大的影响，因此相关技术管理人员必须重视对机电设备的质量管理，并在实际操作中对产生的问题进行及时的处理和解决，保证机电设备的工作效率。

1当前水利水电工程机电技术标准体系存在的问题1.1缺乏整体协调配合机制。由于水利水电工程机电设备通常由多个零部件组成，且零部件的设计、生产、加工都由不同的行业和厂家完成，因此对零部件的整体综合性要求很高。当前，水利水电工程行业的整体规划、设计、建造和管理都是由水利部门专门完成的，但是机电设备中的大多数机械产品质量和安全却涉及到多个行业和部门。如何更好的协调各个行业及部门，使它们拥有统一的规范和标准，还有待研究。换句话说，当前我国水利水电工程机

电设备生产还缺乏整体协调配合机制，因此时常发生制造同一种产品但因为制造部门不同而产生了不同标准的情况，一方面使设备生产制造的成本大大增加，造成一定的浪费，另一方面给安装和运行带来了一定的安全隐患，不利于水利水电事业的稳定发展。

1.2技术标准通用性和实用性较弱。首先，机电业涉及的部门众多，每个部门都有一套自己的管理方法和生产标准，即便是生产、使用型号完全相同的设备，在具体进行方案选择时，也会存在一定的差异。另外，某些技术标准是根据某些机电设备量身定做的，只适用于一套设备，标准的通用性极差。第三，现阶段机电生产的配套性较差，近年来，我国机电行业飞速发展，一些行业在机电制造的推动下，获得了与国际先进水平厂商的合作机会，一些设计理念、设计技术、制造水平和设计标准都逐渐与国际看齐。但由于市场发展缺乏稳定过渡阶段，导致市场资源的配套性较差，许多零摘要：随着社会经济的发展，近年来我国水利水电工程取得了大幅度的进步，机电设备已成为水利工程建设中的重要组成

部分，对水利水电事业的发展起着不可或缺的作用，因此在未来的发展中我们必须高度重视水利水电工程机电设备的技术和质量。基于此，本文从水利水电机电安装的角度出发，对相关技术进行了分析和探讨，提出了水利水电工程机电设备安装过程中存在的问题和改造措施，最后总结了水利水电工程机电设备运行管理的建议。

关键词：水利水电：机电技术：问题中图分类号：TV734文献标识码：A 文章编号：2096-4390（2019）18-0189-02（转下页）189--