三七检验方法确认方案

三七检验方法确认方案编号： SMP·AV-YF-003
亳州市永刚饮片厂有限公司
确认方案审批表
目录
1 概述 (4)
3 适用范围 (4)
4 确认小组人员及职责 (4)
5 验证相关文件依据 (4)
6 验证时间安排 (4)
7 验证前确认 (5)
8 验证内容 (5)
9验证过程中的偏差及处理措施 (7)
10再确认周期 (7)
11.确认结果评定与结论 (7)
1 概述
三七检验质量标准收载在《中国药典》2015版一部P11, 根据GMP（2010版）第二百二十三条规定，对收入药典和其它法定标准的分析方法，应通过检验方法确认来证明该方法在本实验室条件下的适用性。

故制定本检验方法确认方案，由化验室按制定的方法进行试验，根据试验结果判断检验方法在本公司是否适用。

2 目的
确认该产品的检验方法在本公司检验室的适用性，保证检验结果的可靠性。

3 适用范围
本方案适用于本公司三七的鉴别、检查、含量测定。

4 确认小组人员及职责
4.1 确认小组
4.2 验证小组职责
组长：负责验证管理的日常工作和验证的协调，验证方案和报告的批准。

组员：QC，化验室。

起草验证方案和验证报告，并参与实施验证。

组员：QC主管，化验室。

审核验证方案和报告，协调与本次验证相关的化验室工作。

组员：QA主管，质量保证部。

负责审核验证方案和验证报告，如果验证中出现偏差，应对偏差进行调查。

5 验证相关文件依据
6 验证时间安排
计划于年月日 - 年月日对三七进行检验方法的确认。

7 验证前确认
为了保证验证的顺利实施，需要对相关的条件进行确认，使产品的生产全过程符合GMP的要求。

7.1人员确认所有参与验证的人员经过本方案的培训。

7.2检验仪器的确认所用仪器经过校验，并在校验期内
7.3对照品确认对照品从中国药品生物制品检定研究院购买。

8 验证内容
由两名检验人员，分别按以下的检验方法采用不同检验仪器（如有）分别测定同一批次三七供试品（批号为：2016031101），对两人的检验结果进行比较确认，比较结果应符合各项目的可接受标准。

8.1 鉴别
8.1.1操作方法：取本品粉末0.5g，加水5滴，搅匀，再加以水饱和的正丁醇5ml，密塞，振摇10分钟，放置2小时，离心，取上清液，加3倍量以正丁醇饱和的水，摇匀，放置使分层（必要时离心），取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg 的混合溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸溶液（1→10），在105℃加热至斑点显色淸晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，显相同的荧光斑点。

8.1.2可接受标准：两个试验人员，采用不同检验仪器(如有)分别测定同一批次的供试品，两人的测试均应符合规定的结果。

8.2检查二氧化硫
8.2.1操作方法：取药材或饮片细粉约10g（如二氧化硫残留量较高，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g），精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300～400ml。

打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端E口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。

锥形瓶内加入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以下）。

使用前，在吸收液中加入3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml），并用0.01mol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。

开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/mim；打开分液漏斗C的活塞，使盐酸溶液（6mol/L）10ml流入蒸馏瓶，立即加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。

吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定液（0.01mol/L）滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。

8.2.2接受标准：两个试验人员分别测定同一批次的供试品，两人测试结果的相对偏差应≤5.0%。

8.3检查浸出物
8.3.1操作方法：取供试品约2～4g，精密称定，置100～250ml的锥形瓶中，精密加水50～100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。

放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。

除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（％）。

8.3.2接受标准：两个试验人员分别测定同一批次的供试品，两人测试结果的相对偏差应≤5.0%。

8.4含量
8.4.1操作方法：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm。

理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000。

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）
0～121981
12～6019→3681→64
对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb10.4mg、三七皂苷R10.1mg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）0.6g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

8.4.2 接受标准：两个试验人员分别测定同一批次的供试品，两人测试结果的相对偏差应≤2.0%。

9 验证过程中的偏差及处理措施（可附页）：
10 再确认周期
分析方法或用于配制对照品的溶液发生变更时，应进行再验证。

11.确认结果评定与结论
评价人：日期：。