恶性血液病的细胞遗传学讲义

一、背景

染色体发展历史

染色体检查在恶性血液病中的应用价值

国内外发展动态

染色体分析发展历史

1960-1971：非显带时期

1971-1980：显带、高分辨

1980-至今：与分子生物学相结合时期，分子细胞遗传学（FISH）

意义

诊断与分型

疗效判断

验证移植成功与否或确定白血病的复发及其来源。

预后分析与指导治疗

查找新的致病基因，探讨发病机制

国内外发展动态

国外：广泛开展，白血病与淋巴瘤必查项目

国内：相对薄弱

原因

技术

劳动强度大

价格

患者经济

开展染色体检查要素

技术

合理的价格

规模化：降低成本，提高效率，缩短报告时间

二、人类细胞遗传学命名

根据1995版人类细胞遗传学国际命名体制，正常核型男：46，XY；

女：46，XX。

异常核型包括体质性和获得性：体质性异常；获得性异常

表1 核型命名常用的缩写符号

染色体倒位（inv）

指同一染色体上的两个断点之间的片段发生180º旋转，如发生于单一臂内称为臂内

倒位，发生于两臂称臂间倒位。

染色体重复（dup)

在一个染色体的某一位点上重复一段染色体片段。

插入（ins）

* 包括2个染色体之间的插入和一个染色体内的插入。2个染色体之间的插入为插入易位，接受插入片段的染色体总是列于前面，而提供易位片段的染色体列于次。

* 一个染色体内的染色体插入可分为正向插入与反向插入。

等臂染色体（iso)

指一条染色体含有完全相同的臂。

易位（t）：

至少2个染色体之间发生的遗传物质的互换。

平衡易位和不平衡易位

两条染色体之间的易位描述方式为按染色体由小到大的排列顺序

易位：3个染色体以上

罗伯逊易位（rob)

发生于D组或/和G组端着丝粒染色体易位，为两个长臂对接。

Rob(14;21)

缺失（del）

在某一个染色体上丢失部分遗传物质；分为中间缺失和末端缺失，如5q-

增加（add)

表示在某一染色体上获得来源不明的遗传物质，通常代表在染色体的末端增加。

15q+

区带的命名

区的定义是一个染色体上位于两个相邻的界标之间的区段。

带则是根据染色体上染色强度的强或弱与相邻形成反差而划分，每一条带可再分为亚带。

书写方式

书写方式：①染色体号数，②臂的符号，③区号，④带，⑤小数点，⑥亚带

如1p33.11 读作：1号染色体短臂3区3带1亚带1

克隆的定义

来自一个细胞的细胞群体称之为一个克隆，

通常指具有相同或近似的异常染色体组成的一群细胞。标准为：至少2个细胞具有相同的染色体增加或结构异常，或至少3个细胞有一致的染色体丢失。克隆性异常是恶性疾病的标志。

模式图

◆

核型描述

①众数：即一个中期分裂相实际的染色体数46, 47,55, 等

②性染色体：XX或XY

③按染色体的序号排列由小到大1-22，

④注明分析的中期数

如：49,x,-x,+1, -5, t(5;12)(q22;p13), -7,del(7)(q32), t(7;10)(p11;q13), +8, 9,+r,+mar[19] 克隆描述

①单一克隆：47，XY,+8[20]

②克隆演变所致相关克隆：干系列第一，然后按演化先后顺序由简单到复杂依次列出. 如：46，XY,t(8;21)(q22;q22)[10]/45,X,-Y,t(8;21)(q22;q22)[5]

克隆描述

③无关克隆：按其大小排列

④混合性核型[cp]：肿瘤内存在的核型异质性，然而不同的细胞却具有一些相同的细胞遗传学特征，但它不一定见于所有的细胞，而是各种克隆异常的集合。

举例

47，XY, +8

45, XY, -7

46, XY, -7, +8

48, XY, +8, +21

46, XY, -7, +21

47, XY, -7, +8, +21

45-48, XY, -7, +8, +21[CP6]

三、染色体检查方法学

染色体制备：取材、培养、收获

显带：Q，G，R，C

染色体分析：镜下、照相、电脑分析

接种

培养液：1640（含谷氨酰胺）

计数有核细胞：接种浓度：

无菌操作

培养

培养方法：常用不加PHA短期培养法（24，48h)，直接法，同步化法及加秋水仙胺过夜法

B细胞慢性淋巴细胞白血病（CLL）需以多克隆B细胞活化剂(PBA)的刺激。常用的有美洲商陆（Pokeweed mitogen，PWM），佛波酸酯（Tetradecaoyl-o-phorbol-13-acetate，TPA）及细胞松弛素B，脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）等

表2 不同培养方法的适用范围及缺陷

核型分析

镜下

照相

电脑

第二部分染色体异常与恶性血液病

一、染色体异常与淋巴细胞恶性肿瘤

ALL

ALL包括成人ALL和儿童ALL两大类。

80%的儿童发生在2-5岁之间。

成人在50岁左右呈峰值。

60-85%的ALL具有异常核型，以前B-ALL居多。在T-ALL中仅占39%。Williams应用骨髓直接法，

Yunis应用高分辨技术同样检测出如此高比率的异常核型。

（一）染色体数目异常

几乎半数以上的ALL伴有染色体数目的异常，

同时伴有结构异常者更为常见，占到此类病例的40-70%。

数目异常分类

①低超二倍体（47-50）

②高超二倍体（>50条）

③亚二倍体（<46条）

④假二倍体

⑤近三倍体

⑥近四倍体

⑦伴有单一染色体缺失或增加的核型异常。

儿童ALL染色体数量异常分布

成人ALL染色体数目异常分布

1、超二倍体：

核型特征：

通常累及的染色体为X,4，6, 10, 14, 17, 18，19，21; 97-98%病例有+21，且有多个拷贝。

半数具有超二倍体的成人ALL可同时伴有结构异常。Dup(1q),I(17q)常见，t(9;22)，