动物细胞融合ppt
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选修3 现代生物科技专题 2.2 细胞工程
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
通过长期的实验，科学家们 采用植物体细胞杂交技术获得了
“番茄—马铃薯”植株。
“番茄—马铃薯”（理想图）
植物体细胞杂交技术
过程
植物细胞A
去壁
纤维素酶、 方法？ 果胶酶等
原生质体A 原生质体B
去壁
杂种 融合的 细胞 原生质 脱 人 再 AB 体AB 分
课堂小结：
动物细胞 融合技术
过程：不同的动物细胞
诱导剂
杂交细胞
原理： 细胞膜的流动性. 应用：主要用于制备 单克隆抗体 。 制备：获取 B淋巴 细胞和骨髓瘤细胞
制备单克隆 抗体技术
杂交瘤细胞 融合、筛选 物细胞培养 提取单克隆抗体 应用：作为 生物导弹 ，用于治疗 疾病或运载药物。
动
练一练
1、单克隆抗体是指（ C ） A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体 D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体 2、“生物导弹”是指 （ D ）
意义 突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确 的是 D
A．诱导融合的方法完全相同
B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同
D．都能形成杂种细胞
2、下列关于动物细胞融合，叙述正确的是 D A．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细 胞遗传信息的双核或多核细胞称为杂交细胞 B．原理是细胞的全能性 C．打破生殖障碍，使远缘杂交成为现实 D．常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、离心等
,
和 翻译
两个重要步骤.
免疫 特异性 作用, 强
(3)D细胞中产生的抗体具有 与血清抗体相比其优越之处在于 灵敏度 高.
(4)若A为人细胞,B为鼠细胞,用同位素标记A细胞膜 上的蛋白质,B不标记,在C细胞时,检测结果发现整个 细胞一半有放射性另一半没有.在D细胞时,检测结果 发现整个细胞都有放射性,请解释原因 构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动 .
作业：
完成《创新设计》P30~34
练一练
A 、 B细胞为动物细胞,请据图回答问题:
A细胞
C 细 胞
D 细 胞
B细胞
(1)若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为淋巴细胞,那么D 杂交瘤 细胞,由D细胞连续分裂产生 细胞称为 克隆 大量细胞的过程，称为 。
wenku.baidu.com
球蛋白 (2)D细胞中产生的抗体其化学本质是 核糖体 合成该物质的场所是 ,它是由 基因 转录 控制合成的,合成过程包括
基因工程
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌 抗体的实验方案 A
制备单克隆抗体 1、该实验方案的目的是__________ 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？ B
骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞
因为没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生此种抗体的效应B细胞
3、A是从小鼠的脾脏中取得_______, B淋巴细胞 C 抗体 该细胞能够产生______ 细胞融合 4、图中B为________过程，常用 足够数量的细胞群 灭活病毒 _________作为诱导剂，该细胞继承 双亲细胞 的遗传特性，既能 ___________ 分泌抗体 又能___________ 无限增殖 。 体外培养 注射到 __________, 原代 培 5、C过程指细胞培养，该过程包括_____ 小鼠腹腔 10 代以 传代 培养两个阶段，其中_____ 养和_____ 内的细胞可以保持正常的二倍体核型。
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程
病毒颗粒
灭活的病毒颗粒黏附于 细胞表面 细胞核
细胞核
细胞膜被病毒颗粒穿通
细胞膜连接
细胞融合，形成单核杂交细胞
原理：细胞膜具有一定的流动性
有丝分裂
3、原理： 细胞膜的流动性 4、过程： 动物细胞A
诱导，融合 （膜融合、质融合、核融合） 有丝分裂
杂交细胞AB
动物细胞B
筛选 抗体阳性检测 克隆化培养(动物细胞培养技术) 体外培养 培养液 注射到小鼠腹腔 小鼠腹水
足够数量的、能产生特定抗体的杂交瘤细胞群
单克隆抗体
制备单克隆抗体过程中两次筛选 • 第一次筛选是将未融合的 B淋巴细胞、骨髓 瘤细胞以及 BB 融合、瘤瘤融合的细胞通过 选择培养基淘汰，筛选出杂交瘤细胞。 • 第二次筛选是将产生特定抗体的杂交瘤细 胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛 选出来。因为从体内取免疫过的 B淋巴细胞 时可以取出很多种，因此形成的杂交瘤细 胞也有很多种，所以需筛选出产生特定抗 体的杂交瘤细胞。
注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在 一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。
5、意义：
突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交
（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。
6、应用：
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新 品种培育等的重要手段。 特别是利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
动物细胞培养技术 动物 细胞 工程 常用 技术 动物细胞核移植技术 动物细胞融合技术 制备单克隆抗体技术
思考题
1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？
酶解法，如纤维素酶或果胶酶
2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？
无需，因为动物细胞无细胞壁 可用胰蛋白酶将细胞分散
3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？
继承了双亲细胞的遗传物质： 既能无限增殖，又能产生特异性抗体
2、制备过程：
抗原注入小鼠体内
分离
经过免疫的B淋巴细胞
细胞融合
骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
细胞培养
选择培养细胞
注入小鼠 体内培养 从腹水提取 培养基 体外培养 从培养液提取
单克隆抗体
抗原（羊的红细胞）注射到小鼠体内 获取经过免疫的B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 融合 (动物细胞融合技术) 灭活的病毒、 多种杂交细胞 PEG 选择性培养基 筛选 杂交瘤细胞
3、动物细胞融合的目的中最重要的是 A.克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新品种 D.生产杂种细胞
B
二、制备单克隆抗体技术
1.什么是抗体？
2.主要分布在哪里？ 3.由什么细胞产生
提问
？
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原 发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。
免疫小鼠
B淋巴细胞
细胞融合
骨髓瘤细胞
杂交细胞
筛选（选择培养基）
克隆、筛选（抗体检测）
体外培养 体内培养
单克隆抗体
优点：特异性强，灵敏度高，产量大
①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与
特异性结合
优点：准确、高效、简易、快速
治疗疾病：主要用于癌症治疗
②用于
运载药物：制成“生物导弹”
既不损伤细胞，又减少了用药剂量， 疗效高、毒副作用小的新型药物
物理法：离心、振动、电激 2、诱导方法 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞 膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚， 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布， 细胞膜打开，细胞发生融合。
举例： 仙台病毒 紫外线
丧失感染性
保留融合活性 （诱导细胞融合）
如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起，会 有几种融合方式？
+
B淋巴细胞 B淋巴细胞
+
骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞
+
B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
如下图所示细胞是经HAT培养基筛选出的能产 生单克隆抗体A的杂交瘤细胞，关于该细胞中标 出的三个基因的开闭状态，下列说法正确的是 B A．其中有一个是打开的， 即A抗体基因 B．其中有两个是打开的 C．其中有一个是打开的， 即ATP合成酶基因 D．其中三个都是打开的
比较项目
原理 细胞融合前 的处理
植物体细胞杂交
细胞膜的流动性、 细胞的全能性 去除细胞壁后诱导 原生质体融合
动物细胞融合
细胞膜的流动性 使细胞分散后 诱导细胞融合
诱导方法
结果 用途
物理（离心、振动、 物理、化学方法 电刺激）化学（PEG） 灭活的病毒 形成杂种细胞， 形成杂种植株 生产细胞产品 制备单克隆抗体、病 培育新品种 毒疫苗、干扰素等
4.生产单克隆抗体时，在培养基中加入某种试剂能筛 选出杂交瘤细胞，该试剂的作用是 A
A．能选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 B．能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C．能抑制淋巴细胞的DNA复制 D．能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成
• 5．在现代生物科技的应用中，需要进行检测与筛 选的是（双选）( BD) • A．对植物的离体组织进行培养，大规模培育优 植物组织培养技术 良品种 • B．将鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，制备单 克隆抗体 动物细胞融合技术 • C．利用人的皮肤细胞进行体外培养，解决自体 移植皮肤不足的问题 动物细胞培养技术 • D．将抗虫基因导入植物细胞，培育具有抗虫特 性的新植株
A.单克隆抗体
B.杂交瘤细胞
C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物
3.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ C ） ①淋巴细胞 ② B淋巴细胞自身融合细胞 ③小鼠骨髓瘤细胞 ④骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B．①③⑤ C.①②③④ D．②③
工 诱 导
筛选
植物细胞B
生 出 细 胞 壁
化
愈 伤 组 织
再 分 化
杂 种 植 株
物理法：离心、振动、电激等 化学法：聚乙二醇等试剂
如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小 奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？ 动物细胞也能融合吗？
动物细胞的全能性会 随着动物细胞分化程 度的提高而逐渐受到 抑制，分化潜能逐渐 变弱
离心、振动、电激等物理方法；聚乙二醇等化学方法
4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？
能 还可以利用灭活的病毒进行诱导
5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体 吗？
不能，只能形成杂种细胞
一、动物细胞融合技术
1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称为细胞杂交， 是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的 单核细胞，称为杂交细胞。 结果： “2个或多个动物细胞”→“1个杂交单核细胞””
4. 传统抗体的生产方法及缺陷？
每一个浆细胞只能分泌一种抗体
抗原
刺激
增殖分化 效应B 分泌 B淋巴细胞 抗体 细胞
（浆细胞） 产量低、纯度低 抗体特异性差
反复注射抗原
不能无限增殖
克隆单一的效应B细胞
米尔斯坦和科勒 1、设计方案： 一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖 杂交细胞
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
通过长期的实验，科学家们 采用植物体细胞杂交技术获得了
“番茄—马铃薯”植株。
“番茄—马铃薯”（理想图）
植物体细胞杂交技术
过程
植物细胞A
去壁
纤维素酶、 方法？ 果胶酶等
原生质体A 原生质体B
去壁
杂种 融合的 细胞 原生质 脱 人 再 AB 体AB 分
课堂小结：
动物细胞 融合技术
过程：不同的动物细胞
诱导剂
杂交细胞
原理： 细胞膜的流动性. 应用：主要用于制备 单克隆抗体 。 制备：获取 B淋巴 细胞和骨髓瘤细胞
制备单克隆 抗体技术
杂交瘤细胞 融合、筛选 物细胞培养 提取单克隆抗体 应用：作为 生物导弹 ，用于治疗 疾病或运载药物。
动
练一练
1、单克隆抗体是指（ C ） A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体 D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体 2、“生物导弹”是指 （ D ）
意义 突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确 的是 D
A．诱导融合的方法完全相同
B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同
D．都能形成杂种细胞
2、下列关于动物细胞融合，叙述正确的是 D A．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细 胞遗传信息的双核或多核细胞称为杂交细胞 B．原理是细胞的全能性 C．打破生殖障碍，使远缘杂交成为现实 D．常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、离心等
,
和 翻译
两个重要步骤.
免疫 特异性 作用, 强
(3)D细胞中产生的抗体具有 与血清抗体相比其优越之处在于 灵敏度 高.
(4)若A为人细胞,B为鼠细胞,用同位素标记A细胞膜 上的蛋白质,B不标记,在C细胞时,检测结果发现整个 细胞一半有放射性另一半没有.在D细胞时,检测结果 发现整个细胞都有放射性,请解释原因 构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动 .
作业：
完成《创新设计》P30~34
练一练
A 、 B细胞为动物细胞,请据图回答问题:
A细胞
C 细 胞
D 细 胞
B细胞
(1)若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为淋巴细胞,那么D 杂交瘤 细胞,由D细胞连续分裂产生 细胞称为 克隆 大量细胞的过程，称为 。
wenku.baidu.com
球蛋白 (2)D细胞中产生的抗体其化学本质是 核糖体 合成该物质的场所是 ,它是由 基因 转录 控制合成的,合成过程包括
基因工程
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌 抗体的实验方案 A
制备单克隆抗体 1、该实验方案的目的是__________ 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？ B
骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞
因为没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生此种抗体的效应B细胞
3、A是从小鼠的脾脏中取得_______, B淋巴细胞 C 抗体 该细胞能够产生______ 细胞融合 4、图中B为________过程，常用 足够数量的细胞群 灭活病毒 _________作为诱导剂，该细胞继承 双亲细胞 的遗传特性，既能 ___________ 分泌抗体 又能___________ 无限增殖 。 体外培养 注射到 __________, 原代 培 5、C过程指细胞培养，该过程包括_____ 小鼠腹腔 10 代以 传代 培养两个阶段，其中_____ 养和_____ 内的细胞可以保持正常的二倍体核型。
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程
病毒颗粒
灭活的病毒颗粒黏附于 细胞表面 细胞核
细胞核
细胞膜被病毒颗粒穿通
细胞膜连接
细胞融合，形成单核杂交细胞
原理：细胞膜具有一定的流动性
有丝分裂
3、原理： 细胞膜的流动性 4、过程： 动物细胞A
诱导，融合 （膜融合、质融合、核融合） 有丝分裂
杂交细胞AB
动物细胞B
筛选 抗体阳性检测 克隆化培养(动物细胞培养技术) 体外培养 培养液 注射到小鼠腹腔 小鼠腹水
足够数量的、能产生特定抗体的杂交瘤细胞群
单克隆抗体
制备单克隆抗体过程中两次筛选 • 第一次筛选是将未融合的 B淋巴细胞、骨髓 瘤细胞以及 BB 融合、瘤瘤融合的细胞通过 选择培养基淘汰，筛选出杂交瘤细胞。 • 第二次筛选是将产生特定抗体的杂交瘤细 胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛 选出来。因为从体内取免疫过的 B淋巴细胞 时可以取出很多种，因此形成的杂交瘤细 胞也有很多种，所以需筛选出产生特定抗 体的杂交瘤细胞。
注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在 一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。
5、意义：
突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交
（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。
6、应用：
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新 品种培育等的重要手段。 特别是利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
动物细胞培养技术 动物 细胞 工程 常用 技术 动物细胞核移植技术 动物细胞融合技术 制备单克隆抗体技术
思考题
1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？
酶解法，如纤维素酶或果胶酶
2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？
无需，因为动物细胞无细胞壁 可用胰蛋白酶将细胞分散
3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？
继承了双亲细胞的遗传物质： 既能无限增殖，又能产生特异性抗体
2、制备过程：
抗原注入小鼠体内
分离
经过免疫的B淋巴细胞
细胞融合
骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
细胞培养
选择培养细胞
注入小鼠 体内培养 从腹水提取 培养基 体外培养 从培养液提取
单克隆抗体
抗原（羊的红细胞）注射到小鼠体内 获取经过免疫的B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 融合 (动物细胞融合技术) 灭活的病毒、 多种杂交细胞 PEG 选择性培养基 筛选 杂交瘤细胞
3、动物细胞融合的目的中最重要的是 A.克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新品种 D.生产杂种细胞
B
二、制备单克隆抗体技术
1.什么是抗体？
2.主要分布在哪里？ 3.由什么细胞产生
提问
？
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原 发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。
免疫小鼠
B淋巴细胞
细胞融合
骨髓瘤细胞
杂交细胞
筛选（选择培养基）
克隆、筛选（抗体检测）
体外培养 体内培养
单克隆抗体
优点：特异性强，灵敏度高，产量大
①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与
特异性结合
优点：准确、高效、简易、快速
治疗疾病：主要用于癌症治疗
②用于
运载药物：制成“生物导弹”
既不损伤细胞，又减少了用药剂量， 疗效高、毒副作用小的新型药物
物理法：离心、振动、电激 2、诱导方法 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞 膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚， 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布， 细胞膜打开，细胞发生融合。
举例： 仙台病毒 紫外线
丧失感染性
保留融合活性 （诱导细胞融合）
如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起，会 有几种融合方式？
+
B淋巴细胞 B淋巴细胞
+
骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞
+
B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
如下图所示细胞是经HAT培养基筛选出的能产 生单克隆抗体A的杂交瘤细胞，关于该细胞中标 出的三个基因的开闭状态，下列说法正确的是 B A．其中有一个是打开的， 即A抗体基因 B．其中有两个是打开的 C．其中有一个是打开的， 即ATP合成酶基因 D．其中三个都是打开的
比较项目
原理 细胞融合前 的处理
植物体细胞杂交
细胞膜的流动性、 细胞的全能性 去除细胞壁后诱导 原生质体融合
动物细胞融合
细胞膜的流动性 使细胞分散后 诱导细胞融合
诱导方法
结果 用途
物理（离心、振动、 物理、化学方法 电刺激）化学（PEG） 灭活的病毒 形成杂种细胞， 形成杂种植株 生产细胞产品 制备单克隆抗体、病 培育新品种 毒疫苗、干扰素等
4.生产单克隆抗体时，在培养基中加入某种试剂能筛 选出杂交瘤细胞，该试剂的作用是 A
A．能选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 B．能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C．能抑制淋巴细胞的DNA复制 D．能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成
• 5．在现代生物科技的应用中，需要进行检测与筛 选的是（双选）( BD) • A．对植物的离体组织进行培养，大规模培育优 植物组织培养技术 良品种 • B．将鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，制备单 克隆抗体 动物细胞融合技术 • C．利用人的皮肤细胞进行体外培养，解决自体 移植皮肤不足的问题 动物细胞培养技术 • D．将抗虫基因导入植物细胞，培育具有抗虫特 性的新植株
A.单克隆抗体
B.杂交瘤细胞
C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物
3.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ C ） ①淋巴细胞 ② B淋巴细胞自身融合细胞 ③小鼠骨髓瘤细胞 ④骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B．①③⑤ C.①②③④ D．②③
工 诱 导
筛选
植物细胞B
生 出 细 胞 壁
化
愈 伤 组 织
再 分 化
杂 种 植 株
物理法：离心、振动、电激等 化学法：聚乙二醇等试剂
如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小 奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？ 动物细胞也能融合吗？
动物细胞的全能性会 随着动物细胞分化程 度的提高而逐渐受到 抑制，分化潜能逐渐 变弱
离心、振动、电激等物理方法；聚乙二醇等化学方法
4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？
能 还可以利用灭活的病毒进行诱导
5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体 吗？
不能，只能形成杂种细胞
一、动物细胞融合技术
1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称为细胞杂交， 是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的 单核细胞，称为杂交细胞。 结果： “2个或多个动物细胞”→“1个杂交单核细胞””
4. 传统抗体的生产方法及缺陷？
每一个浆细胞只能分泌一种抗体
抗原
刺激
增殖分化 效应B 分泌 B淋巴细胞 抗体 细胞
（浆细胞） 产量低、纯度低 抗体特异性差
反复注射抗原
不能无限增殖
克隆单一的效应B细胞
米尔斯坦和科勒 1、设计方案： 一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖 杂交细胞