乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-L 比色法)

不同试剂盒检测系统血清乳酸脱氢酶结果的偏倚评估

不同试剂盒检测系统血清乳酸脱氢酶结果的偏倚评估目的通过对不同检测试剂盒检测血清乳酸脱氢酶测定进行方法比对和偏倚评估，为不同实验室检验结果的互认和实验室认可提供实验数据。

方法参考NCCLS 的EP9-A2文件，以OLYMPUS AU5421全自动生化分析仪、国内某一品牌试剂（试剂1）、贝克曼原装配套试剂（试剂2）、贝克曼原装复合校准品和伯乐定值质控品组成的检测系统，并用患者新鲜血清（正常、异常、高度异常）检测乳酸脱氢酶（LDH）进行比较分析，计算实验方法（Y）和比较方法（X ）之间的相对偏差（%SE），以美国临床实验室修正法规（CLIA′88）规定的室间质量评价允许误差范围为标准，判断不同检测试剂盒测定结果的可比性。

结果不同试剂盒检测结果发现：异常标本，特别是高度异常标本，其差异巨大，无法接受。

结论当用某一试剂时，应进行比对和偏倚评估，判断其临床可接受性能，保证检验结果的可比性。

标签：不同试剂盒；血清乳酸脱氢酶；比对研究两个实验室认可的国际标准ISO / IEC 17025[1]（检测和校准实验室能力的通用要求）和ISO /15189[2]（医学实验室-质量和能力的专用要求）都对检验结果的溯源性和可比性提出了明确要求，强调方法学比较试验（比对试验）是实现准确度溯源和患者标本检验结果可比性的重要途径。

但比对试验如何进行，如何评估不同检测系统检验结果的偏差，如何判断不同检测系统结果的可比性，是目前检验医学界关注和讨论的热点。

本研究参考美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）的EP9-A2文件[3]，对不同检测试剂盒血清乳酸脱氢酶测定进行比对和偏倚评估，为实现血清酶测定的溯源性和可比性提供实验数据，纠正许多实验室只考虑节约成本，不对异常结果关注，只有通过异常标本的检测才能发现试剂质量的好坏，从而为临床提供可靠的结果。

1 资料与方法1.1一般资料1.1.1检测系统的组成以OLYMPUS AU5421生化分析仪、国内某一品牌试剂（试剂1）、贝克曼原装配套试剂（试剂2）和贝克曼复合酶校准品和伯乐质控品组成的检测系统。

乳酸脱氢酶细胞毒性检测

产品简介：产品编号产品名称产品包装产品价格C0016 100次176.00元碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。

本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。

同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。

细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。

通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。

LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。

LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。

本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。

吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。

该酶联反应原理的示意图如下：可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。

一个试剂盒可进行100次检测。

包装清单：产品编号产品名称包装C0016-1 LDH释放试剂 1.5mlC0016-2 乳酸溶液2mlC0016-3 酶溶液1ml×2C0016-4 INT溶液(10X) 0.2mlC0016-5 INT稀释液2ml—说明书1份保存条件：-20℃保存，一年有效。

乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P比色法)

2、手工比色检测：按照下表设置测定管，溶液应按照顺序依次加入，幵注意避免产生气泡。如果样品中的 LDH 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管。
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加入物(ml) 待测样品(血清、血浆、体液等) LDH 检测工作液
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乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 比色法)
简介：
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH 或 LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应。乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 比色法)是利用乳酸脱氢酶催化上述逆反应，即丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD+。在上述反应过程中，丙酮酸还原成乳酸，同时 NADH 氧化成 NAD+，引起 340nm 处吸光度的下降。该 LD-P 法的优点是：1、操作比二硝基苯肼比色法简单；2、重复性好；3、准确性比二硝基苯肼法好；4、
2、处理后的样品应及时检测，否则 LD4 和 LD5 易失效。 3、血清或肝素抗凝血浆检测效果较好，草酸类、EDTA 抗凝剂对 LDH 活性有抑制作用。
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4、避免使用溶血样本。 5、为了您的安全和健康，请穿实验服幵戴一次性手套操作。
自动分析仪计算公式：LDH(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(296/10)=ΔA/min×4758.8 注意：如果待测样品加入 LDH 保护工作液，其结果应除以 0.9。

乳酸脱氢酶同工酶1(LDH1) 测定试剂盒(化学抑制-乳酸底物法)产品技术要求lideman

乳酸脱氢酶同工酶1(LDH1) 测定试剂盒（化学抑制-乳酸底物法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中乳酸脱氢酶同工酶1的含量。

1.1 规格：试剂1（R1）：4×80mL，试剂2（R2）：4×16mL；试剂1（R1）：5×60mL，试剂2（R2）：5×12mL；试剂1（R1）：3×40mL，试剂2（R2）：3×8mL；试剂1（R1）：2×80mL，试剂2（R2）：2×16mL；试剂1（R1）：5×45mL，试剂2（R2）：5×15mL；试剂1（R1）：3×45mL，试剂2（R2）：3×15mL；试剂1（R1）：2×45mL，试剂2（R2）：2×15mL；试剂1（R1）：4×60mL，试剂2（R2）：4×20mL；试剂1（R1）：2×60mL，试剂2（R2）：2×15 mL；试剂1（R1）：1×20mL，试剂2（R2）：1×6mL。

质控品（选配）：低高值两个水平 2×5mL；1×5mL。

1.2 组成1.2.1试剂组成试剂组成见表1。

表1 试剂组成1.2.2质控品的组成：2个水平的冻干质控品，在牛血清中添加不同浓度的乳酸脱氢酶同工酶1，稳定剂<0.1%；定值范围：（40-100）U/L和（150-350）U/L。

2.1 外观液体双试剂：试剂1（R1）: 无色透明液体；试剂2（R2）: 无色透明液体。

质控品：冻干品,溶解后为淡黄至橙黄色液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白2.3.1空白吸光度在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，用去离子水或（生理盐水）作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度应<0.60 ABS。

2.3.2空白吸光度变化率在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，用去离子水或（生理盐水）作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应<0.002 ABS/min 。

生化检验实验DB TB LDH

实验十二实验名称：DB/TB的测定实验目的与要求：掌握测定血清总胆红素和结合胆红素的基本原理实验仪器、试剂：DB/TB测定试剂盒，722E/723分光光度计实验原理：DB/TB在酸性溶液中及表面活性剂条件下，与重氮盐反应，形成偶氮胆红素，在570nm处比色，其值与样本中的DB/TB含量成正比。

操作方法：1、DB/TB测定各取3支试管，按以下步骤操作单位ml 标准测定空白样本－0.05 －标准0.05 －－蒸馏水－－0.05工作液 1.0 1.0 1.0混匀,37℃温育5分钟，以空白管调零。

570nm，0.5cm比色杯，测定各管的A实验现象与数据：记录各管的A结果分析与结论：DB/TB浓度＝A样/A标×C标参考值：DB<6.0μmol/l, TB<20.0μmol/l（C标DB ＝43μmol/l，C标TB＝120μmol/l）临床意义：实验十三实验名称：血清中乳酸脱氢酶的测定实验目的与要求：掌握连续监测法测定血清乳酸脱氢酶总活性的基本原理。

实验仪器、试剂：乳酸脱氢酶测定试剂盒，半自动生化分析仪实验原理：以辅酶Ⅰ为受氢体，LD催化L－乳酸脱氢生成丙酮酸，同时使NAD+还原为NADH。

NADH在340nm处有吸收峰，因此反应引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本中LD活性呈正比关系操作方法：1、将R1 4ml与R2 1ml混匀，即为工作液。

2、取试管1支，加入样本0.025ml，工作液1ml，充分混匀37℃水浴90秒，读取初始吸光度，同时开始计时，在精确1，2，3分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度变化（ΔA/分）实验现象与数据：记录ΔA/分结果分析与结论：LDH（U/L）＝ΔA/分×F F=Vt/Vs/消光系数×1000=6592，Vt：反应总体积Vs：样品体积消光系数=6.22 参考范围：135-225 U/L（男）135-215 U/L （女）临床意义：。

LDH检测

乳酸脱氢酶释放法lactate dehydrogenase release assay碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。

本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。

同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。

细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。

通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH 的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。

LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。

LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。

本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。

吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。

该酶联反应原理的示意图如下：可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。

一个试剂盒可进行100次检测。

包装清单：产品编号产品名称包装C0016-1 LDH释放试剂 1.5mlC0016-2 乳酸溶液2mlC0016-3 酶溶液1ml×2C0016-4 INT溶液(10X) 0.2mlC0016-5 INT稀释液2ml—说明书1份保存条件：-20℃保存，一年有效。

小鼠乳酸脱氢酶LDH试剂盒ELISA

小鼠乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒（ELISA）使用说明书●本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中小鼠乳酸脱氢酶（LDH）的含量。

●有效期：6个月●保存条件：2-8℃●本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被小鼠乳酸脱氢酶（LDH）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的小鼠乳酸脱氢酶（LDH）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。

最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本处理1. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

乳酸脱氢酶(LDH)释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒产

乳酸脱氢酶（LDH）释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途乳酸脱氢酶（LDH）释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂是一种旨在通过酶联连续反应系统检测由于细胞损伤导致的细胞内稳定的乳酸脱氢酶释放到细胞外，使四唑盐染料碘硝基氯化四氮唑（INT）还原为红色甲臜（farmazan），即比色法定量测定酶活性，以评价活体细胞繁殖的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

适用于各种药物、化学、环境因子和营养因子处理的贴壁或悬浮生长中的动物或人体细胞。

替代传统的同位素[51 Cr]释放检测的最佳选择。

产品严格无菌，即到即用，简捷敏感，性能稳定，显色清晰，检测准确，重复性好。

技术背景细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的损害或完全裂解导致细胞浆内的酶释放外泄到培养液里，其中包括活性稳定的乳酸脱氢酶。

乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）释放法的测定是基于在乳酸脱氢酶的作用下，还原NAD+反应生成的NADH，再与氧化型2-（4-碘苯）-3-（4-硝基苯）-5-苯四唑（Iodonitrotetrazolium；INT）在硫辛酰胺脱氢酶（diaphorase）的催化下反应生成红色生色产物甲臜（formazan），在490nm波长下产生吸收峰，从而确定释放的乳酸脱氢酶的活性，作为细胞膜完整性的标志：吸光值与细胞死亡或毒性程度成线性正相关。

酶联连续反应系统为：lactate dehydrogenaseNAD+ + Lactate → Pyruvate + NADHdiaphoraseNADH + INT → NAD++ Formazan（red）产品内容裂解液（Reagent A）1毫升补充液（Reagent B）1毫升反应液（Reagent C）5毫升显色液（Reagent D）1毫升终止液（Reagent E）1毫升标准液（Reagent F）20微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，反应液（Reagent C）和显色液（Reagent D）避免光照；有效保证6月用户自备96孔细胞培养板：用于细胞操作的容器细胞培养箱：用于孵育反应孔板离心机：用于沉淀细胞酶标仪：用于定量检测染色后的细胞实验步骤一、贴壁细胞检测1．准备96孔细胞培养板的待测细胞（每孔100微升）：包括未处理的对照细胞（样品对照孔），未处理的后续裂解的细胞（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞（处理样品孔），并做好标记（细胞密度为每孔2 X 103至2 X 104细胞）2．到规定的检测时间点前1小时，从湿润的细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板（注意：确保细胞培养液维持在100微升容量）3．加入10微升裂解液（Reagent A）到未处理的后续裂解的细胞孔里（样品最大酶活性对照孔）4．同时加入10微升补充液（Reagent B）到其余所有检测孔里5．放回湿润的细胞培养箱里，继续培养1小时，即规定检测时间6．从湿润的细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板7．放进孔板离心机离心10分钟，速度为250g8．分别小心移取50微升上清液到新的96孔板的相应孔里，避免触摸细胞颗粒，同时注意做好标记9．分别加入50微升反应液（Reagent C）（注意：使用前，须混匀）10．分别加入10微升显色液（Reagent D）11．摇动96孔板混匀12．在室温下孵育30分钟，避免光照13．（选择步骤）分别加入10微升终止液（Reagent E）14．即刻放进酶标仪里测读：波长490nm15．计算处理样品实际吸光读数：处理样品孔吸光读数－样品对照孔吸光读数16．计算样品细胞最大酶活性的实际吸光读数：样品最大酶活性对照孔吸光读数－样品对照孔吸光读数17．计算细胞毒性或死亡率（％）：（处理样品实际吸光读数÷样品细胞最大酶活性的实际吸光读数）X 10018．或绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（A）；横坐标（X轴）为细胞数或时间点或药物浓度；据此计算其LD50二、悬浮细胞检测1．准备96孔细胞培养板的待测悬浮细胞（每孔100微升）：包括未处理的对照细胞（样品对照孔），未处理的后续裂解的细胞（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞（处理样品孔），并做好标记（细胞密度为每孔5 X 103至5 X 104细胞）2．到规定的检测时间点前1小时，从湿润的细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板（注意：确保细胞培养液维持在100微升容量）3．加入10微升裂解液（Reagent A）到未处理的后续裂解的细胞孔里（样品最大酶活性对照孔）4．同时加入10微升补充液（Reagent B）到其余所有检测孔里5．放回湿润的细胞培养箱里，继续培养1小时，即规定检测时间6．从湿润的细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板7．放进孔板离心机离心10分钟，速度为250g8．分别小心移取50微升上清液到新的96孔板的相应孔里，避免触摸细胞颗粒，同时注意做好标记9．分别加入50微升反应液（Reagent C）（注意：使用前，须混匀）10．分别加入10微升显色液（Reagent D）11．摇动96孔板混匀12．在30℃温度下孵育30分钟，避免光照13．（选择步骤）分别加入10微升终止液（Reagent E）14．即刻放进酶标仪里测读：波长490nm15．计算处理样品实际吸光读数：处理样品孔吸光读数－样品对照孔吸光读数16．计算样品细胞最大酶活性的实际吸光读数：样品最大酶活性对照孔吸光读数－样品对照孔吸光读数）17．计算细胞毒性或死亡率（％）：（处理样品实际吸光读数÷样品细胞最大酶活性的实际吸光读数）X 10018．或绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（A）；横坐标（X轴）为细胞数或时间点或药物浓度；据此计算其LD50注意事项1．本产品为100次（1个96孔板）操作2．操作时须戴手套3．整个操作须无菌操作4．建议每个样品安排3个孔，即重复3次，计算时取其平均值5．检测体系相应增加，试剂用量按比例相应增加：例如200微升检测体系，试剂用量增加1倍6．每孔中的培养液需100微升，避免使用周边培养孔（常常液体蒸发而减少）7．系统测试，可以加入2至5微升标准液（Reagent G）到50微升无细胞的细胞培养液里，然后按照说明书加入反应液（Reagent C）和显色液（Reagent D）即可8．细胞裂解效果不佳，可以使用20微升裂解液（Reagent A）处理9．孵育时，须避光10．染色完成后，建议即刻检测，最迟不得超过1小时11．细胞培养和处理时，避免使用草酸（OXALATE），草氨酸（OXAMATE）和EDTA，否则影响检测的准确性12．血清含有乳酸脱氢酶，建议使用浓度不要超过1％13．细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶14．酚红会干扰检测15．样品最大酶活性对照孔或最大OD吸光读数与细胞裂解程度密切相关16．如果用户没有孔板离心机，则移取上清液时格外小心17．如果用户没有匹配的波长，可以使用波长470nm至570nm之间的任一波长替代18．本公司提供系列细胞繁殖检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。

乳酸脱氢酶LDH检测作业指导书

乳酸脱氢酶LDH检测作业指导书1 检验目的规范乳酸脱氢酶（LDH）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。

2 测定方法DGKC改良法L→P。

3 检测原理乳酸脱氢酶催化乳酸氧化为丙酮酸，同时NAD+被还原为NADH。

NADH在340nm处有吸收峰，因此反应会引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本中乳酸脱氢酶活性呈正比的关系。

乳酸脱氢酶L-乳酸+NAD+丙酮酸+NADH +H+4 样本血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见生化标本采集程序。

稳定性：2～8℃稳定7天；15～25℃稳定1天。

5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪、迈瑞BS800M生化分析仪。

5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂及迈瑞公司提供的生化试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。

5.3 校准物：Rodan混合校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。

5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO 标准，贮存、准备严格遵照说明书。

6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。

6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。

7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。

8 参考范围135～225U/L。

9 警告/危急值：未规定。

10 性能指标10.1 线形上限：△A/min为0.40，1600U/L。

10.2 精密度：批内、批间CV分别为5.9%、6.8%。

10.3 准确度:不准确度≤15%。

10.4 试剂贮存:密闭避光贮存2～8℃可稳定12个月；工作液密闭避光贮存2～8℃可稳定21天，室温可稳定7天。

11 干扰因素及变异的潜在来源11.1.由于红细胞、血小板中含有大量的LD，故严禁使用溶血标本。

11.2.在采用血浆作为标本时必须用3000ｒ/min离心15min以除去血小板。

乳酸脱氢酶(LDH,LD)

乳酸脱氢酶(LDH,LD)
乳酸脱氢酶(LDH,LD)介绍：
乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。

乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。

乳酸脱氢酶(LDH,LD)正常值：
血清：100～300U／L；
尿：560～2050U／L；
脑脊液含量为血清的1／10。

乳酸脱氢酶(LDH,LD)临床意义：
增高：见于肝炎、肝硬化、肝癌、心肌梗死、横纹肌损伤、心肌炎、恶性肿瘤、肾病、肺梗死、巨幼细胞贫血、白血病、恶性淋巴瘤及妊娠等。

乳酸脱氢酶(LDH,LD)注意事项：
一、抽血前的注意事项
1、抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。

血液中的酒精成分会直接影响检验结果。

2、体检前一天的晚八时以后，应禁食，以免影响检测。

3、抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩，增加采血的困难。

二、抽血后应注意
1、抽血后，需在针孔处进行局部按压3-5分钟，进行止血。

注意：不要揉，以免造成皮下血肿。

2、按压时间应充分。

各人的凝血时间有差异，有的人需要稍长的时间方可凝血。

所以当皮肤表层看似未出血就马上停止压迫，可能会因未完全止血，而使血液渗至皮下造成青淤。

因此按压时间长些，才能完全止血。

如有出血倾向，更应延长按压时间。

3、抽血后出现晕针症状如：头晕、眼花、乏力等应立即平卧、饮少量糖水，待症状缓解后再进行体检。

4、若局部出现淤血，24小时后用温热毛巾湿敷，可促进吸收。

乳酸脱氢酶(LDH,LD)检查过程：
暂无相关信息。

LDH的测定

2，酶活性的测定
加入物(ml) 加入物(ml) 测定管对照管血清 0.01 0.01 NAD＋ NAD＋底物缓冲液 0.5 0.5 37度水浴 37度水浴5min 度水浴5min NAD＋ NAD＋溶液 0.1 － 37度水浴度水浴15min 37度水浴15min 2,4二硝基苯肼 2,4二硝基苯肼 0.5 0.5 NAD＋ NAD＋溶液－ 0.1 37度水浴15分钟 37度水浴15分钟度水浴15 0.4mol/L溶液 0.4mol/L溶液 5.0 5.0 混匀，室温放置5min 5min后 440nm波长处比色比色杯光径为1.0cm 波长处比色， 1.0cm，混匀，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用蒸馏水调零，读取各管吸光度。用蒸馏水调零，读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查校正曲线，得酶活性。校正曲线，得酶活性。单位定义： 100ml血清 37度作用底物15min 产生1umol 血清， 15min， 1umol丙酮酸为单位定义：以100ml血清，37度，作用底物15min，产生1umol丙酮酸为一个金氏单位。一个金氏单位。
乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋＋（正向L 乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋H＋（正向L-P，逆向P－L）。比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2 比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2，4二硝基苯肼作用生成丙酮酸－二硝基苯腙，后者在酸性环境中呈草黄色，在碱性溶液中显棕红色，颜色的深浅与丙酮酸的浓度成正比，与标准浓度的丙酮酸生成的苯腙进行比色，可推算LDH的活力。可推算LDH的活力。本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单位，

小鼠D-乳酸脱氢酶 (D-LDH)-ELISA试剂盒说明书

小鼠D-乳酸脱氢酶 (D-LDH)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E-EL-M0419（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。

本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。

适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组D-LDH浓度。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。

*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。

用抗小鼠D-LDH抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的D-LDH会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。

依次加入生物素化的抗小鼠D-LDH抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。

抗小鼠D-LDH抗体与结合在包被抗体上的小鼠D-LDH结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。

加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。

用酶标仪在450nm波长处测OD值，D-LDH 浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中D-LDH的浓度。

标本收集:1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。

避免使用溶血，高血脂标本。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

LD_L法

LD_L法
乳酸脱氢酶测定试剂盒(LD-L法)
主要成份：
试剂1(R1)：N-甲基-D-葡糖胺(N-Methyl-D-Glucamine)缓冲液；试剂2(R2)：乳酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷
批准文号：
国食药监械(进)字2014第2403303号
【药品名称】
通用名称：乳酸脱氢酶测定试剂盒(LD-L法)
英文名称：Lactate Dehydrogenase(LDH-L)
汉语拼音：RuSuanTuoQingMeiCeDingShiJiHe(LD-LFa)
【成份】
试剂1(R1)：N-甲基-D-葡糖胺(N-Methyl-D-Glucamine)缓冲液；试剂2(R2)：乳酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

(具体内容详见产品说
明书)。

产品有效期：存储条件：2～8℃储存，有效期一年。

附件：
注册产品标准，产品说明书。

【适应症】
该产品用于定量测定人血清，血浆中的乳酸脱氢酶(LDH)的活力。

【规格】
试剂1(R1):5×100ml，试剂2(R2):5×20ml；试剂1(R1):5×70ml，试剂2(R2):5×14ml；试剂1(R1):2×75ml，试剂2(R2):2×15ml；
试剂1(R1):2×100ml，试剂2(R2):2×20ml；试剂1(R1):1×5000ml，试剂2(R2):1×1000ml；。

血清乳酸脱氢酶(LDH)—生化检测项目

血清乳酸脱氢酶（LDH）
一、检测原理
LDH催化L-乳酸氧化成丙酮酸，同时NAD还原成NADH+，引起340nm吸光度的升高，与样品中LDH的活性成正比。

二、参考区间
血清：109—245U/L
三、临床意义
1、乳酸脱氢酶，属于糖酵解酶的一种，可以在人体的血液、骨骼以及心脏大量存在。

2、乳酸脱氢酶的临床意义较大，可以作为诊断心肌疾病、慢性肝炎以及肝癌等病症的诊断依据。

3、乳酸脱氢酶有5种同工酶的形式，即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4和LDH5，在人体的心肌、肾脏以及红细胞中LDH1、LDH2含量比较高，这两项升高常见于心肌炎、心肌梗死、恶性贫血、急性肾皮质坏死。

肝脏和横纹肌以LDH
4、LDH5为主，当升高的时候常见于肝硬化、肝炎以及骨骼肌的损伤等，
LDH3在胰腺、脾脏、甲状腺、肾上腺当中较多，当异常升高时常见于胰腺癌等疾病。

4、血清LDH活性检测可判断白血病的疗效和转归。

LDH文档,乳酸脱氢酶测定试剂盒(LDH)检测标准操作规程

1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒（IFCC法）测定方法2、适用范围：适用于人血清或血浆乳酸脱氢酶(LDH)的测定。

3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。

3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃～8℃有效期为一年。

试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定30天。

试剂不可冰冻。

3.3 仪器：迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理LDH 催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，NADH 的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活性成正比。

LDH乳酸+ NAD+ + H2O 丙酮酸+ NADH + H+4.2样本要求新鲜血清、肝素抗凝或EDTA抗凝血浆样本，采集后及时测定，应避免溶血和污染。

4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。

4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。

4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。

当有以下情况时需重新校准：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。

每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。

4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。

4.3.3 测试基本参数4.4参考范围115～220 U/L （注：各实验室应有自己的参考范围。

）4.5 方法评价线性范围：4～1000U/L内。

当样本测定值超过上限时，应将样本用生理盐水稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。

精密度：批内变异系数：≤ 3.0%；批间变异系数：≤5.0%。

分析灵敏度：本试剂盒的检测低限不高于4 U/L。

大鼠乳酸脱氢酶LDH酶联免疫分析

大鼠乳酸脱氢酶(LDH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T0.2 IU/L - 9IU/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中乳酸脱氢酶(LDH)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠乳酸脱氢酶(LDH)水平。

用纯化的大鼠乳酸脱氢酶(LDH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乳酸脱氢酶(LDH)，再与HRP标记的乳酸脱氢酶(LDH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的乳酸脱氢酶(LDH)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠乳酸脱氢酶(LDH)浓度。

试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

血清乳酸脱氢酶（LDH）活性测定及意义

血清乳酸脱氢酶（LDH）活性测定及意义
乳酸脱氢酶是体内能量代谢过程中的一个重要的酶。

此酶几乎存在于所有组织中，以肝、肾、心肌、骨骼肌、胰腺和肺中为最多。

这些组织中的LDH的活力比血清中高得多。

所以当少量组织坏死时，该酶即释放血而使其他血液中的活力升高。

测定此酶常用于对心梗、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。

1．正常参考值
速率法（LDH-L法）：100～240 U/L
比色法：190～310 U/L
2．临床意义：
①心肌梗塞：心肌梗塞后9～20h开始上升，36～60h达到高峰，持续6～10天恢复正
常（比AST、CK持续时间长），因此可作为急性心肌梗塞后期的辅助诊断指标。

②肝脏疾病：急性肝炎，慢性活动性肝炎，肝癌，肝硬化，阻塞性黄疸等。

肿瘤转移
所致的胸腹水中LDH往往也升高。

③血液病：如白血病、贫血、恶性淋巴瘤等，LDH升高。

④骨骼肌损伤、进行性肌萎缩、肺梗塞等。

⑤恶性肿瘤转移所致胸、腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。

⑥正常新生儿LDH水平很高，可达775～2000U/L，满月后为180～430 U/L，以后随
年龄增长逐渐降低，12岁后趋于恒定。

由于测定LD的特异性较差，目前临床上多同时测定乳酸脱氢酶同工酶来判断其组织来源，用于心肌梗塞、肿瘤、肝病等的诊断。

乳酸脱氢酶测定方法操作规程

乳酸脱氢酶（LDH）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒（IFCC 法）使用说明书【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或血浆中乳酸脱氢酶的活力。

【检验原理】LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH。

NADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活性成正比。

乳酸+ 2O LDH丙酮酸+NADH+H+【主要组成成份】R1：Good’s缓冲液50 mmol/LL-乳酸 5.0 mmol/LR2：NAD+7.0 mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。

【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2~8℃保存有效期为18个月。

试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定30天。

试剂不可冰冻。

【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。

若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。

建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。

【样本要求】新鲜血清或血浆，采集后及时测定，应避免溶血和污染。

【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向上升反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。

校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。

质控品测定值应该在规定的范围内。

若超出规定范围，有必要采取相应的措施或联系生产厂家。

【参考范围】男性：135~225U/L 女性：135~214U/L（注：各实验室应有自己的参考范围。

乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)

仅供科研版本号：170307 乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)【产品组成】【保存条件】-20℃,6个月【产品概述】乳酸(Lacticacid，LD)又称2-羟基丙酸是一种化合物，是一种含有羟基的羧酸，分子式是C3H6O3，参不生物化学徆多反应过程。

乳酸检测有化学氧化法、酶催化法、电化学法、酶电极感应器法。

乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)其检测原理是在NAD存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸生成丙酮酸，同时生成NADH。

通过分光光度比色法测定340nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出LD水平。

该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的乳酸含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

【使用方法】1、准备样品：①血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于LD的检测。

③高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的LD，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

2、配制标准品工作液。

4℃避光保存2个月有效。

3、LD检测：按照下表设置空白管、对照管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

如果样品中的LD浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

样品的检测最好能设置平行管。

南京森贝伽生物科技有限公司网址：/第1页南京森贝伽生物科技有限公司网址：/第2页4、用分光光度计检测，以蒸馏水调零，比色杯光径1.0cm ，读取空白管、对照管、标准管、测定管的340nm 吸光度(即A 空白、A 对照、A 标准、A 测定)，一般应数小时内检测完毕。

【计算结果】血清、血浆、尿液、脑脊液乳酸(mmol/L)=｛(A 测定−A 对照)/(A 标准−A 空白)｝/5 组织乳酸(mmol/g)=｛(A 测定−A 对照)/(A 标准−A 空白)｝/｛5×待测样品蛋白浓度(g/L)｝【注意事项】1、本法适用于自动分析仪，分别监测测定管和标准管的吸光度升高速率，计算乳酸的浓度。

LD-L分析性能评估

湖南新大陆生物技术有限公司产品分析性能评估资料产品名称：乳酸脱氢酶（LD-L）检测试剂盒（速率法）检验仪器：日立717、东芝40全自动生化分析仪试剂规格：R1: 1×30ml R2: 1×7.5ml检测人员：隆浩检测日期：2013.12.25审核人员：陈力明审核日期：2013.12.25一、目的制定拟订产品标准，以有效地控制产品生产工艺及产品质量的稳定。

二、范围适用于本公司生产的乳酸脱氢酶（LD-L）检测试剂盒(速率法)的性能分析，包括准确度、批内精密度、批间差、试剂空白吸光度、线性范围、分析特异性（受干扰性）、仪器间比对实验等项目。

三、试剂与仪器试剂：乳酸脱氢酶（LD-L）检测试剂盒(速率法)批号：20131222有效期：12个月规格：R1: 1×30ml R2: 1×7.5ml仪器：日立717、东芝40全自动生化分析仪（备注：除5.6仪器间比对实验在上述两个机型操作外，其余试验均在日立717全自动生化分析仪操作。

）四、质控品相关信息表1质控品一览表五、产品性能分析5.1准确度方法：用待检试剂对Randox定值质控血清平行检测3次, 取平均值，测定结果不准确度（相对偏差）在±15%范围内。

表2 准确度实验结果5.2精密度 5.2.1批内精密度【方法】：取临床LD-L 含量略高于参考范围上限血清平行检测20次，计算测量值的平均值（X ）和标准差（SD ），按公式（1）计算变异系数(CV)，应符合CV<6﹪ 。

%100/⨯=X SD CV (1)表3 批内精密度实验结果5.2.2批间差【方法】：取三个批号送检试剂，每个批号取三瓶。

分别测定1份浓度略高于参考范围上限的血清样本，分别计算9份试剂测定均值（1x ）和每个批号3份试剂的测定均值（1x 、2x 、3x ），并按式（9）求出三个批号试剂测定均值的变异系数CV （%），结果CV ≤10﹪ 。