高密度脂蛋白胆固醇(HDL

高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定

1.第1页页首内容

血清高密度胆固醇（HDL-C）测定（直接法）

天津市宝坻区人民医院检验科

操作规程文件号：CZGC/SH/043

第四版

共3 页

本规程每2年复审一次

复审日期：2013年5月1日

复审人：陈玉良（签名）

规程编写者：崔树明

审批者：陈玉良

批准日期：2013年5月6日

实施日期：2013年5月10日

文件分发部门和/或个人：检验科

医务科；保管者：王文志（签名）

院长办公室；保管者：刘会芹（签名）

院档案室；保管者：刘会芹（签名）

检验科；主任：陈玉良（签名）

临床化学检验室：崔树明（签名）

2.原理

本方法是双试剂测定，第一种试剂包含聚合物和多聚阴离子，它们附着在LDL，VLDL 和乳糜微粒的表面。这些脂蛋白甚至在清洁剂存在的情况下都是稳定的，清洁剂是作为第二种试剂的一部分被添加进去的，另外一部分是胆固醇试剂剩下的成分。另一方面，HDL颗粒在聚合物和多聚阴离子存在的情况下是不稳定的，它们被清洁剂溶解。因此，只有HDL-C作用于胆固醇测定。

胆固醇脂酶

高密度脂蛋白胆固醇脂+H2O-------------﹥胆固醇+脂肪酸

胆固醇氧化酶

胆固醇+O2-------------﹥胆烯酮+ H2O2

过氧化物酶

H2O2+4-氨基安替比林+DSBmT-------------﹥醌亚胺+H2O

3.样本采集与处理

3.1受检者（体检对象或病人）的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻断剂、免役抑制剂、某些降压药、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。对体检对象应做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检

验。应嘱体检对象在抽血前24h内不做剧烈运动。

3.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。例如：站立5min可使血脂浓度提高5％，15min提高16％，故在采血前至少应静坐5min。一般从肘静脉采血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后立即松开止血带。静脉阻滞5min可使甘油三酯增高10％-15％。采血试管采用真空采血管。

3.3样本类型：采用无溶血的血清。如用血浆，宜采用EDTANa2（1mg/ml）抗凝。抗凝血浆中的总胆固醇和甘油三酯水平比血清中约低3％。EDTA用量越多，血浆水平偏低越明显。但肝素抗凝不影响血浆中水平。

3.4 样本处理：血标本应尽快送检验室。室温下放置30-45min后离心分离血清或血浆置样品杯中待测。若不能及时检测，置于洁净试管中加塞后4℃保存，可稳定4天。

4 试剂

4.1 试剂：本室使用日本积水公司生产的液体双试剂试剂盒，试剂为浅粉红色透明液体，直接使用。批号为KB573。

4.2 试剂组成：

试剂主要成分如下：

MES缓冲液（PH6.5）100 mmol/L

胆固醇氧化酶≥0.2U/mL

胆固醇脂酶≥0.15 U/mL

过氧化物酶≥0.62 U/mL

DSBmT 0.25mmol/L

4氨基安替比林0.5mmol/L

多聚阴离子>0.02 %

清洁剂>0.2 %

其中含有保护剂。

注意：1. 此试剂为体外诊断用。

2. 不要吸入。吞服有害。

4.3 试剂的储存与稳定性：未开封的试剂于2-8℃保存，稳定至有效期。

4.4 校准血清：BECKMAN公司提供的多项定标液，产品批号为0115。为冻干品，未开封者2-8℃保存至有效期。临用前用5ml去离子水复溶，放置30min，混匀待完全溶解后使用。复溶的血清2-8℃可稳定4天。

4.5 质控品：RONDOX公司提供，LECEL-2及LEVEL-3，产品批号为759UN及551ue。冻干品，未开封者2-8℃保存至有效期。使用前用5ml去离子水复溶，30分钟后轻轻混匀，待完全溶解后使用。复溶后的血清2-8℃可稳定4天。每天随样品一起测定，测定值应在允许范围内。

5 仪器

奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪

6操作

6.1 AU2700开机

6.1.1.检查W1、W2清洗液及稀释液有足够量，不足时补充；

6.1.2.打开水机水源的自来水阀门，按水机前面板的（POWER ON）键，开启水机；

6.1.3.按分析仪前面板的（POWER ON）键，开启分析仪主机；

6.1.4.确认打印机为开机并处于联机状态，开启中文机；

6.1.5.确认仪器上在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足时添加，并在系统状态下的试剂状态检查试剂。

6.2.开始分析

6.2.1.将兰架第一位置放水，黄架相应位置放入校准液；

6.2.2.将兰架、黄架、白色标本架放入样品台上；

6.2.3.用鼠标点击在屏幕最上方（开始分析）图标；

6.2.4.点击屏下方（EXIT）图标，退到主屏幕。

6.3分析参数

样品体积 2.3ul 温度37℃

试剂1体积132ul 方法终点法

试剂2体积25ul 单位mmol/L

波长520nm 定标方式AB

读点0-27 0-10

7 计算：

无须手工计算，结果自动以mmol/L打印。

报告结果：

异常结果的处理程序：

根据仪器参数的参考范围会打印异常标志，以“H”、“L”表示，“H”表示高于正常，“L”表示低于正常。

报告格式：

以自动打印的报告单报告

8 操作性能

8.1 准确度：不准确度≤4％。

8.2 精密度：批内瓶间差CV≤3％，批间差CV≤4％。

8.3 线性范围：本法线性范围可达3.0mmol/L，如果超出线性范围，以生理盐水稀释再做，结果乘以稀释倍数。

8.4干扰物质

乳糜乳糜达到1000mg/dL时影响小于8%

溶血血红蛋白达到500mg/dL时影响小于1%

胆红素胆红素达到40mg/dL时影响小于1%

抗坏血酸抗坏血酸达到20mg/dL时影响小于1%

9.参考范围

人群血脂水平主要取决于生活因素，特别是饮食影响，应根据冠心病流行病学研究及临床经验统一制定高密度胆固醇划分标准。

参考值：0.6-1.58 mmol/L

10. 临床意义

不同的脂蛋白分类在冠心病有非常明显和不同的效果。在脂类代谢中，HDL的主要作用是通过一个被称为从外围组织到肝脏吸收和运输胆固醇，低HDL-C水平与冠心病的风险增加有关。因此，血清HDL-C的测定对于识别高风险病人是一个有用的工具。HDL-C 与冠心病发病成负相关，HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危险因素，HDL-C增高（大于1.55mmol/L）被认为是冠心病的“负”危险因素。HDL-C下降也多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬变等患者。高TG血症往往伴以低HDL-C。肥胖者HDL-C也多偏低。吸烟也可使HDL-C下降。饮酒及长期体力活会使HDL-C升高。

11. 参考文献

1.叶应妩主编，全国临床检验操作规程（第3版）。南京：东南大学出版社，2006。

2.OLYMPUS AU2700自动生化分析仪操作手册。

3.日本积水公司HDL-C检测试剂盒使用说明书。