用于实验室诊断病料采集规程

猪病料采集操作规程

1病料采集工具的准备

EP管、剪刀、镊子、手术刀、样品袋、酒精棉、酒精灯、选择性培养基、无菌医用棉签、生理盐水、保鲜膜、冰袋（可用矿泉水瓶自制）、保温箱（泡沫箱）、医用手套、口罩，以上工具能灭菌的都灭菌。

2疑似细菌性病料的采集、保存和运输

细菌的实验室诊断主要包括细菌的分离培养、药敏试验、RT-PCR检测等，通过检测，我们能准确地知道是什么原因造成病情不能控制，通过药敏试验告诉我们什么药物敏感，治疗效果明显。在选择细菌性疾病检测病料时，要选择有代表性的病例，最好是未经抗生素治疗的病例，而且在采集病料前，最好是活体动物。

2.1病料采集部位

2.1.1呼吸困难、咳嗽、打喷嚏病例的病料采集

采集病料时选取鼻腔粘液及鼻拭子、整个肺脏以及临床剖检的病变组织。

2.1.2腹泻病例的病料采集

样品采集可用无菌医用棉签伸入直肠蘸取后放入灭菌EP管中，也可取小段肠道，两端结扎。

2.1.3神经症状和步态不稳病例的病例采集

可采集大脑组织、关节液以及临床剖检的病变组织。

2.1.4精神、食欲不佳、发热和皮肤病病例的病料采集

可直接采血送检，有肉眼可见皮肤病如疹块等，切开疹块挤出血液或渗出液送检。2.2具体的采集方法

对于鼻腔黏液、新鲜粪便、关节液、血液等不需要解剖采样的病料，尽量在无菌条件下采；有条件且需要解剖采集病变组织的，整个采集过程尽量保证无菌，采集3-4cm3的病变组织，采集病料前先放血，从大腿内侧将皮肤、肌肉切开，直接将股动脉割断，放血至病猪休克死亡。

a、鼻腔黏液的采集：用无菌医用棉签伸入病猪鼻腔中，充分刮擦后放置于一个灭菌的

EP管中，并做标记。

b、胸腔积液和心包积液的采集：用手术刀或剪刀切开胸腔或心包，尽量避免接触污染，

用一次性注射器抽取几毫升积液放入EP管中并做标记。

c、肺脏采集：用手拉住气管切口将整个肺脏拉出，背面向上，割取介于病变和正常组

织之间的部分放置于干净的样品袋中并标记。

d、肝脏采集：打开腹腔靠近膈肌位置，从肝脏与消化道连接处将肝脏提起并取出，再

病变与正常组织结合部取一块放置于干净的样品袋中并标记。

e、脾脏采集：沿腹中线打开腹腔，在腹腔左侧胃和回肠下面找到脾脏，小心摘取，放

置于干净的样品袋中并标记。

f、关节液采集：用酒精棉对关节肿大部位消毒，用一次性注射器抽取几毫升关节液放

入EP管中并做标记。

g、肠道及内容物采集：取小肠一段道，两端结扎，剪下放入样品袋并做标记。

h、神经系统样品采集：用手术刀剥离头皮，凿开头盖骨，将大脑取出放置于干净的保

鲜袋中并做标记。

2.3病料的运输

用于细菌分离的病料，最好是现场采集现场分菌。没条件现场分菌的，必须新鲜运输，整个运输过程病料始终处于低温状态，但不能结冰，尽量减少人为污染。保持病料低温最好用专用冰袋，没有冰袋的可以用矿泉水瓶装水自制冰块。病料运输时将足够的冰块和病料一起放置在保温箱中，冰块将病料包裹，如果冰块不够则将冰块放置在病料上下。用于PCR

检测的病料，则可以冷冻保存。用于细菌分离的病料应在6h内送实验室分析，用于PCR检测的病料在-20℃保存条件下最好1周之内送检。

3疑似病毒性病料的采集、保存和运输

3.1病料采集部位

3.1.1疑似猪瘟病毒感染

主要采集扁桃体、淋巴结、脾脏、肾脏和血清。

3.1.2疑似猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒感染

主要采集肺、血清、扁桃体、脾淋巴结、粪便，新鲜流产胎儿的脾、肺、血清和胸水3.1.3疑似猪流行性乙型脑炎病毒感染

主要采集患病动物的脑、脑脊髓液、和死产胎儿的脑组织，血液、分泌物、脾、肿胀的睾丸（含毒量最高）。

3.1.4疑似猪细小病毒病感染

采集流产或产死胎儿的新鲜脏器（脑、肾、肝、肺、睾丸、胎盘及肠系膜淋巴结等），以肠系膜淋巴结和肝脏最佳。

3.1.5疑似猪伪狂犬病病毒感染

主要采集脑、血清和扁桃体；另外，鼻咽分泌物也可用于病毒分离。

3.1.6疑似猪圆环病毒2型感染

主要采集肺脏、淋巴结、肾脏和血清。活体采集最好采集扁桃体。

3.1.7疑似猪口蹄疫病毒感染

采集未破裂或刚破裂的水疱皮（液），对新发病死亡的动物可采取脊髓、扁桃体、淋巴结组织等。

3.1.8疑似猪传染性胃肠炎

主要采集十二指肠、空肠及回肠的黏膜，鼻腔、气管、肺的黏膜及扁桃体、粪便

3.1.9疑似猪流行性腹泻

主要采集粪便。

3.1.10疑似猪轮状病毒感染

主要采集粪便和肠内容物。

3.1.11疑似流感病毒感染

主要采集鼻腔黏液，也可采集肺脏和淋巴结。

3.2具体采集方法

对于能采集血清送检的病毒样本，可以前腔静脉或耳静脉采血（2毫升）送检；鼻腔黏液或粪便能检测出的病毒则选择采集鼻腔黏液、粪便；对于有条件采集组织送检的则采取组织，采集病料组织的个体最好是发病的活体，整个采集过程尽量保证清洁，采集3-4cm3的病变组织，采集病料前先放血，从大腿内侧将皮肤、肌肉切开，直接将股动脉割断，放血至病猪休克死亡。

a、扁桃体采集：可使用专业扁桃体采集枪进行活体采集；有新鲜病死猪的也可从胸部

中线偏右打开胸腔，在气管与肺脏连接处向前10cm处割断气管，并将气管剖开，在舌根靠近上腭部两边可以看到两个淋巴结（扁桃体），小心取下放入样品袋并编号。

b、肺脏采集：从胸部中线偏右打开胸腔，用手拉住气管切口将整个肺脏拉出，背面向

上，割取介于病变和正常组织之间的部分放置于干净的样品袋中并标记。

c、腹股沟淋巴结采集：两后腿向下向外压，在两侧凹陷的腹股沟处中间部位看到的隆

起即腹股沟淋巴结，小心割开皮肤和淋巴结表面的被膜，摘取后放入样品袋并标记。

d、脾脏采集：沿腹中线打开腹腔，在腹腔左侧胃和回肠下面找到脾脏，小心摘取，放

置于干净的样品袋中并标记。

e、肠系膜淋巴结采集：沿腹中线打开腹腔，在肝脏和胃下面找到肠系膜，在肠系膜靠

近肠道端有许多结节（肠系膜淋巴结），小心摘取放入样品袋并标记。

f、神经系统样品采集：用手术刀剥离头皮，凿开头盖骨，将大脑取出放置于干净的保

鲜袋中并做标记。

g、鼻腔黏液的采集：用无菌医用棉签伸入病猪鼻腔中，充分刮擦后放置于一个灭菌的

EP管中，并做标记。

h、肠道样品的采集：从腹腔中剪取病变的小肠10cm，从一侧将肠道剪开，刮去肠道内

容物，将肠道放入样品袋并标记。

i、肺门淋巴结的采集：用手拉住气管切口将整个肺脏拉出，背面向上，在气管分为支

气管与肺脏连接处，可以看到位于左右两侧的两个肺门淋巴结，小心摘取放入样品袋并标记。

j、血液样品的采集：血液样品的采集可以用一次性注射器，对于活体可以通过前腔静脉或耳静脉采集，对于刚死亡的个体可以采集心脏中未凝固的血液。采集完成后先标记，再将注射器活塞稍微拔出，留下空间放置30分钟让血液自然凝固。

3.3 样品的运输

用于病毒检测的病料不需要完全无菌，保证清洁就行。样品最好冷冻（-20℃）保存，并且整个运输过程保持低温。保持病料低温最好用专用冰袋，没有冰袋的可以用矿泉水瓶装水自制冰块。病料运输时将足够的冰块和病料一起放置在保温箱中，冰块将病料包裹，如果冰块不够则将冰块放置在病料上下。用于PCR检测的病料最好在-20℃保存条件下一周内送检。