08-人用狂犬病疫苗质量控制研究-李玉华

欧洲药典 病毒灭活验证 无检测项 免疫学方法，检测糖蛋 白含量，在允许的限度 内 无要求
WHO规程 病毒灭活验证 无检测项 抗原含量： EELISA法检测糖蛋白 要求： 企业内部建立以病毒滴 度和抗原含量为指标的 生产一致性监测体系
原液检定 7 原液生产的一 致性监测体系
8
15
National Institutes for Food and Drug Control
大连汉信
兰州所 河南远大
aG
aG aG
转瓶
转瓶 转瓶
PHK细胞
PHK细胞 PHK细胞
1.0mL/支， 液体
0.5ml/支，冻干 1.0ml/瓶 液体
5针 5针 5针 5针
中科生物
aG 转瓶 PHK细胞 1.0ml/瓶 液体
成都康华 PM 发酵罐 MRC-5
National Institutes for Food and Drug Control 5针 1.0ml/ 瓶， 冻干
2015年版中国药典： 液体剂型人用狂犬病疫苗已经不再被收录。 National Institutes for Food and Drug Control
我国狂犬病疫苗标准与国际标准比较（1）
编号 检定项目 毒种
1 2010年版中国药典 欧洲药典 WHO规程
2
生产用 细胞
aG株： PHK或Vero细胞 CTN株：Vero细胞生产 PM株：人二倍体细胞，国 外引进 PV株： Vero ，国外引进 地鼠肾原代细胞(PHK） Vero细胞 二倍体细胞
批签发前提：药品批文号、GMP证 批签发方式：采用批记录摘要审查和实验室检验相结合
批记录审查+部分检验 （中检院）
批记录审查+全检检验：新申请批签发、工艺发生变更、
质量出现偏差等（中检院） 无菌和异常毒性检查（授权的省药检所）
批批全检（进口疫苗，中检院）
依据：企业注册标准和国家药典
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冻干 液体
液体 液体 液体 液体 冻干 冻干
1074.0 602 1342.8 696 1447.6 National Institutes for Food and Drug Control
我国人用狂犬病疫苗的质量控制——批签发
为了加强狂苗质量管理，2005年8月国家药监局将狂犬病疫苗
作为第一个二类疫苗纳入批签发管理。
系列举措促进了狂犬病疫苗质量的显著提高。
2005年狂犬病疫苗实施批签发，有佐剂疫苗停止签发。 2007年加强监管，多次飞行抽检。 2009年DNA残留纳入批批检。 上市后疫苗的市场监督评价性抽验。 2010年药典增加了抗生素、宿主蛋白指标、放行效价不低于
4.0IU/剂。
狂犬病疫情自2007年达到高峰以后，自2008年持续下降，2012年
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批签发依据
人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）质量标准
检验项目 质量标准 检验方法
鉴别试验
采用酶联免疫法检查，应证明含有狂犬病病毒抗原
酶联免疫法
外观 装量 pH值 硫柳汞 效价测定 牛血清白蛋白残留量
应为澄明液体，无异物 应不低于标示量 7.2～8.0 应不高于50μg/ml 不低于2.5IU/剂,出厂标准≥4.0IU/剂 应不高于50ng/剂
人用狂犬病疫苗质量控制研究
李玉华
中国食品药品检定研究院
2015年11月19-20日 广州
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主要内容
狂犬病在我国的流行情况及疫苗的作用探讨
狂犬病疫苗的生产情况及特点 狂犬病疫苗质量控制 狂犬病疫苗质量控制方法的研究
毒种
生产用毒种：获得国务院CFDA 批准； 建立毒种三级种子库：原始种子批、主种子批、工作种子批，
并使用规定代次： 来源、历史清楚
上市
• 批签发制度
上市后
• 国家计划性抽验
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2011-2015年批签发情况
National Institutes for Food and Drug Control
wk.baidu.com
2011年-2015年批签发批次和人份数及其变化
批签发依据
（冻干）人用狂犬病疫苗（vero细胞）质量标准
质量标准
采用酶联免疫法检查，应证明含有狂犬病病毒抗原 应为澄明液体，无异物 应不高于3.0% 7.2～8.0
检验项目
鉴别试验 外观 水分（冻干） pH值
检验方法
酶联免疫法 灯检法 费休氏法 电位法
效价测定
牛血清白蛋白残留量 抗生素残留量 Vero细胞DNA残留量 Vero细胞宿主蛋白质残留量 无菌检查 异常毒性检查 细菌内毒素
企业 细胞 基质 剂型 规格
批 冻干 辽宁成大 液体 冻干 长春长生 Vero 液体 冻干 0.5 0.5 0.5 0.5 1.0 21 117 ／ 4 ／
2011
人份 100.6 669.2 ／ 3.0 ／ 批 28 345 ／ 11 ／
2012
人份 48.4 798.2 ／ 8.2 ／ 批 228 115 ／ ／ ／
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我国人用狂犬病疫苗流行及疫苗效果
狂犬病是由狂犬病病毒感染引起神经系统损伤性疾病， 一旦发病，几乎100%死亡，
给人们的健康构成了严重威胁。
历史上出现了3次流行发病高峰：1956年(1942例)、1981年(7037例)、2007年(3300例) 1981年达到建国以来最高发病水平,7000余例。 1990年代中期，疫情得到有效控制，1996年仅报告159例。
1 59 71
／ ／ 32 ／ ／ ／ 615
2.1 119.3 85.2
／ ／ 18.7 ／ ／ ／
／ 149 3
26 ／ 15 ／ 3 ／
／ 301.2 4.6
33.2 ／ 9.1 ／ 6.3 ／
／ 49 3
64 23 ／ ／ 14 ／
／ 107.9 2.3
52.7 17.2 ／ ／ 21.0 ／
灯检法 重量法 电位法 滴定法 NIH法 酶联免疫法
抗生素残留量
地鼠肾细胞宿主蛋白质残留量 无菌检查 异常毒性检查 细菌内毒素
应不高于50ng/剂
应不高于24μg/剂 应无菌生长
酶联免疫法
酶联免疫法 薄膜过滤法
接种小鼠和豚鼠，结果判定时应动物健存，体重增加，无异常 动物法 反应 应不高于50EU/剂 凝胶限度法
国内人用狂犬病疫苗生产工艺
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我国人用狂犬病疫苗的质量管理
制度及措施
• 疫苗上市许可 上市前 • 许可证制度
法规
《中华人民共和国药品管理法》 《中华人民共和国药品管理法实施条例》 《中华人民共和国药品注册管理办法》 《药品非临床试验质量管理规范》（GLP） 《药品临床试验质量管理规范》（GCP） 《中华人民共和国药典》 《药品生产质量管理规范》（GMP） 《生物制品批签发管理办法》 《疫苗流通和预防接种管理条例》 《药品不良反应报告和监督管理办法》 …………………………….法规、条列等等
原液中检测 不高于10ng/剂 原液中检测 不高于10ng/剂
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批签发内容
批签发资料审核--审查表
原材料 成品 趋势分析
生产全过程的控制
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我国狂犬病疫苗标准与国际标准比较（3）
成品检定
检定项目
pH 硫柳汞 灭活剂 效价 热稳定性
2010年版中国药典
7.2-8.0 ＜100µg/剂， 冻干剂不允许添加加 甲醛100µg/ml β-丙内酯不检测 出厂标准≥4.0IU/剂 效期内2.5IU/剂 液体：37×14天 冻干：37×28天 效价仍≥2.5IU/剂 ＜ 50ng/剂
“疫苗大量使用/疫苗效价提高/政府出台限制养犬条例等”
2007年，再次升高达到3300例/年：之后采取了一系列联防措施、养犬管理、疫苗暨
被动免疫制剂质量监管等。
我国1950-2014年报告狂犬病
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狂犬病疫苗质量的提高使狂犬病疫情大幅度下降
欧洲药典
无检测项 无检测项
WHO规程
无要求 如添加则需检测，按NRA标准 执行 不要求 效期内2.5IU/剂 批签发可做单一稀释度法 不要求
效期内2.5IU/剂 无
抗生素残留
无 无要求
不要求 无要求
宿主细胞蛋白残留 PHK：24 µg/剂 Vero：4 µg/剂 不高于100pg/剂 Vero细胞DNA
1.0 1.0 1.0
1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
13 65 13
／ ／ 52 8 ／ 15 447
14.4 116.8 10.6
／ ／ 37.6 31.5 ／ 17.2 1262.4
3 131 93
／ ／ 37 10 ／ 29 902
5.9 286.3 75.1
／ ／ 24.2 27.0 ／ 31.0 1814.0
全国报告1400例狂犬病例；2014年全国报告924例狂犬病例。
2014年发病数首次降低到924例，比2007年高峰期下降了234%。
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我国人用狂犬病疫苗的生产现状
企业名称 辽宁成大 生产用毒种 PV 细胞病毒培养 发酵罐 生产基质 Vero细胞 0.5ml/支，液体 广州诺诚 辽宁依生 吉林迈丰 长春长生 宁波荣安 吉林亚泰 aG CTN aG aG aG aG 发酵罐 转瓶 发酵罐 发酵罐 转瓶 转瓶 Vero细胞 Vero细胞 Vero细胞 Vero细胞 Vero细胞 PHK细胞 1.0ml/支，冻干 0.5ml/支，冻干 1.0mL/支， 液体 1.0mL/支， 液体 1.0mL/支， 液体 1.0mL/支， 液体 5针 5针 5针 5针 5针 5针 规格剂型 0.5ml/支，冻干， 程序 5针、4针
人用狂犬病疫苗的生产工艺及质控点
Vero PHKC MRC-5
CTN、PV、aG、PM株
转瓶、细胞工厂、生物反应器
种毒 成品质量控
病毒培养
冷冻干燥
收获病毒液 澄清过滤 超滤浓缩 灭活
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保护剂研制
半成品质量控制
柱层析纯化
2013
人份 287.6 291.1 ／ ／ ／ 批 75
2014
人份 138.5 483.6 212.6 ／ 78.8 批 249 121 73 ／ 100
2015
人份 521.7 282.7 231.6 ／ 210.7
179 85 ／ 40
宁波荣安
液体 广州诺诚 吉林迈丰
河南远大 中科生物 大连汉信 兰州所 成都康华 印度诺华 合计 MRC-5 鸡胚 细胞 PHKC
3
4
5
病毒收获 6.0logLD50 (Vero细胞) 液的病毒 5.5logLD50（PHK细胞） 滴度 病毒收获 无菌、支原体 无菌和支 原体检查 病毒收获 无要求 液鉴别
PM株：Vero和二倍体细 例举出的毒种： 胞 CTN Flury株：鸡胚细胞 Vnukovo -32; PM Flury Vero细胞 全部推荐 二倍体细胞 鸡胚原代细胞 鸭胚 需检测，无标准 要求测定，不规定合格标准
不低于2.5IU/剂,出厂标准≥4.0IU/剂
应不高于50ng/剂 应不高于50ng/剂 应不高于100pg/剂 应不高于4μg/剂 应无菌生长
NIH法
酶联免疫法 酶联免疫法 斑点杂交法 酶联免疫法 薄膜过滤法
接种小鼠和豚鼠，结果判定时应动物健存，体重增加， 动物法 无异常反应 应不高于50EU/剂 凝胶限度法
无检测项
无菌、真菌、支原体
无检测项
要求鉴别实验，确认为狂犬 病毒
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我国狂犬病疫苗标准与国际标准比较（2）
编号 5 6
检定项目
2010年版中国药典 病毒灭活验证 蛋白残留量： 不高于80µg/剂 抗原含量： ELISA法检测，按批准 的标准执行 无要求