兽用狂犬病疫苗研究进展

兽用狂犬病疫苗研究进展

孙招金，陈晶，梁红茹

（华南农业大学兽医学院，广东广州５１０６４２）

中图分类号：￥８５２．６５９．６文献标识码：Ａ文章编号：１００５—８５６７（２００８）０５—０００７—０２

狂犬病是人类最古老的疾病之一，是由狂犬病病毒引起的一种人畜共患病，病死率几乎高达１００％。目前，狂犬病尚无有效的治疗方法，及时接种疫苗是预防该病的最有效措施之一。狂犬病病毒宿主范围广，几乎所有的温血动物均易感，但犬是该病毒的主要宿主，在携带和传播狂犬病过程中起主要作用。据报道，狂犬病分布于世界１００多个国家，全世界每年因狂犬病死亡的人数达５５０００人，绝大多数病例发生在发展中国家，其中主要在亚洲。２００７年１１月１２日，我国卫生部召开新闻发布会，介绍中国人狂犬病发病数仅次于印度，居全球第二，成为世界上狂犬病流行最严重的国家之一。

近年来，我国人狂犬病疫情持续上升，疫情波及范围不断扩大。从１９５０－２００４年我国人狂犬病的死亡总人数约为１０３２００例，２００５年全国共报告狂犬病死亡２５４５例，２００６年卜９月全国累计报告发病数己达２２５４例，比前一年同期上升了２９．７９６。根据中国卫生部公布的最新数字显示，２００７年全国共报告狂犬病死亡病例２７９５例，较２００６年（２６９２例）上升了３．６８％，高居３７种法定传染病报告病死数之首。而我国人狂犬病约９４％由家犬引起，６％由猫引起，另外还有为数不多的由猪和鼠引起【¨。我国人狂犬病主要发生在农村，其主要原因是我国对于犬狂犬病监管力度不足，特别是农村从犬传染给人的事件连续发生嘲。从病毒的传染源入手，对动物接种兽用狂犬病疫苗是预防人狂犬病最好的办法，兽用狂犬病疫苗的发展已逐渐引起人们的关注。

１国外兽用狂犬病疫苗的研究进展

１．１兽用灭活疫苗早在１８８４年，Ｐａｓｔｅｕｒ就应用由狂犬病固定毒制成的疫苗给５０多只犬进行预防接种试验，结果发现这些犬能抵抗狂犬病病毒的攻击。１９１１年，Ｓｅｍｐｌｅ开始应用石炭酸灭活的神经组织疫苗，该疫苗对犬和其他动物都有较好的免疫

收稿日期：２００８－０４－１６保护力，免疫期长达１年左右，但是疫苗中含有髓磷酯结合的蛋白物质，接种后有约０．０５％的动物出现神经性麻痹。限于经济和技术条件，直至２００５年前仍有不少国家使用这种疫苗，其中印度是主要的制造、应用和出口这种疫苗的国家阅。现在国外生产的兽用狂犬病灭活疫苗是由狂犬病疫苗株在体外细胞上繁殖，灭活后与佐剂按一定比例制备。常用的生产用疫苗株有１９４０年Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ等分离，鸡胚传代培养得到的Ｆｌｕｒｙ株以及由巴斯德派生的ＣＶＳ、ＰＭ、Ｋｉｓｓｉｎｇ、ＳＡＤ、Ｕｎｕｋｏｖｏ、Ｋｅｌｅｖ等毒株：常用繁殖病毒的细胞有仓鼠肾细胞（ＢＨＫ一２１）、犬肾、猪肾细胞和鸡胚成纤维细胞等；常用的免疫佐剂有氢氧化铝、磷酸铝。近年来，灭活疫苗的研制取得很大的进步。已经研制出ＩＳＣＯＭ（免疫刺激复合物）、角鲨烯、脂质体等新型疫苗佐剂，克服了传统铝佐剂难以吸收、注射部位反应大等缺陷：灭活剂由９一丙内酯、ＢＥＩ（二乙烯亚胺）和维生素Ｃ取代了传统的甲醛和石炭酸灭活，克服了传统灭活剂灭活不彻底和副作用大等不足；疫苗的剂型也由传统的液体型发展到了冻干型，使狂犬病灭活疫苗的效力变得更加稳定。目前，国外较好的狂犬病灭活苗品牌有“英特威”、“维克”、“梅里亚”。狂犬病灭活苗可与犬瘟热、犬细小病毒病、犬传染性肝炎、犬副流感、犬腺病毒病和犬钩端螺旋体病等疫苗联合使用，预防犬的上述常见传染病。

１．２兽用活疫苗目前弱毒疫苗主要有１９３５年美国从狂犬病患犬的脑中分离到一个狂犬病街毒株经仓鼠肾细胞、鸡胚、牛肾细胞和猪肾细胞传代后育成的ＳＡＤ苗、ｋｅｌｅｖ苗；１９４０年Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ等从狂犬病致死的一个女孩脑内分离到的Ｆｌｕｒｙ鸡胚低代苗（也称ＬＥＰ）和Ｆｌｕｒｙ鸡胚高代苗（也称ＨＥＰ）；１９８５年日本利用来源于兔传代的固定毒病原株，经鸭胚传２９４代，再经鸡胚细胞培养及

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・８・专题综述兽用狂犬病疫苗研究进展一孙招金，等

Ｖｅｒｏ细胞适应获得ＲＣ－ＨＬ株和狂犬病毒基因工程株等。许多国家已将Ｆｌｕｒｙ疫苗作为兽用狂犬病疫苗，ＬＥＰ活疫苗用于犬、猫，牛则强调应用ＨＥＰ活毒疫苗。应用ＬＥＰ或ＨＥＰ疫苗给狗、猫免疫后，能抵抗致死剂量的街毒攻击，ＲＣ—ＨＬ株应用于犬和猫得到了很好的免疫效果。

活疫苗分为肌肉注射和口服两种。活毒疫苗的免疫效果虽然比灭活疫苗好，但是活疫苗存在引起动物狂犬病的潜在危险。近几年来一些发达国家人和家养动物的狂犬病发病率下降，而野生动物的发病率上升。通过将这些活疫苗包在动物的食饵内是预防野生动物狂犬病的主要措施。用于预防野生动物狂犬病的新型狂犬病口服疫苗是近年来国外狂犬病疫苗研究的热点。安全有效的免疫原、疫苗载体和适宜的疫苗投放系统是国外兽用狂犬病活疫苗研究的几个主要方向。Ｋｉｅｎｙ等旧分别以痘苗病毒为载体，构建了狂犬病病毒糖蛋白的重组疫苗，在法国和美国进行了野外试验，野生红狐免疫收到良好的效果：Ｐｒｅｖｅｃ等ｎ１研制了人５型腺病毒载体狂犬病病毒糖蛋白重组疫苗，小鼠、犬、狐狸、臭鼬等均能产生高水平的保护性抗体。由于发达国家已经基本消除人和家养动物的狂犬病，对兽用狂犬病疫苗的研制主要致力于预防野生动物如浣熊的狂犬病，以口服狂犬病疫苗为主。Ｘｉａｎｇ等（１９９４）和扈荣良等（１９９４）用带有狂犬病病毒糖蛋白亚单位疫苗和重组活疫苗在小鼠、臭鼬、猴等进行试验，均获得了满意的免疫效果。另外利用抗狂犬病病毒单克隆抗体制备的抗独特型抗体疫苗可以保护小鼠抵抗致死性狂犬病病毒的攻击。Ｙａｒｏｓｈ等协１以腺病毒为载体制备的狂犬病遗传重组疫苗。ＹｕｓｈｉｂｏｖＣ９１以紫花苜蓓花叶病毒为载体构建重组病毒疫苗；Ａｓｈｒａｆａ∞利用烟草作为载体，高效表达了狂犬病病毒表达糖蛋白狂犬病基因工程疫苗。目前，表达狂犬病病毒糖蛋白的重组痘苗病毒作为兽用疫苗，在欧洲、美国已经取得了商业生产许可，并成功应用于野生动物。Ｎｅｌ等［Ｉｕ构建了狂犬病病毒相关病毒Ｍｏｋｏｌａ的ｐＣＩ—ｎｅｏ、ｐＣＩ—ｎｅｏ—ｍｏｋＧ、ｐＳＧ－ｍｏｋＧ和ｐＢｕｄＣＥ４－ｍｏｋＧ＋Ｎ４种ＤＮＡ疫苗；２００４年Ｓｈｏｊｉ等［埘通过Ｈｅｐ—Ｆｌｕｒｙ株（缺失完全的Ｐ基因）ｃＤＮＡ，利用反向遗传学的方法得到缺失Ｐ基因的狂犬病基因缺失疫苗。虽然这些新型的狂犬病疫苗存在许多的不足，但是却为安全有效的狂犬病活疫苗的研究提供

了广阔的前景。

２国内兽用狂犬病疫苗的研究进展

我国生产上市的兽用狂犬病疫苗，迄今为止都是活疫苗。从上世纪５０年代到８０年代先后采用了羊脑固定减毒苗、Ｓｅｍｐｌｅ型疫苗和ＬＥＰ—Ｆｌｕｒｙ疫苗。我国１９５９年版《狂犬病疫苗制造及检验方法》将接种狂犬病毒的绵羊脑组织加０．５％石炭酸、５０％甘油溶液做成２０％脑悬液，于３７℃中减毒３天制成疫苗。这种疫苗中允许有残余毒力存在，因此安全性较差。为了提高疫苗的安全性，减去残余毒力，自１９６５年起参照Ｓｅｍｐｌｅ氏法生产狂犬病灭活疫苗，实践证明疫苗有效，但存在个别动物注射后出现麻痹症状，对各种家畜的使用剂量大（５～５０ｍＬ）、免疫期短（６个月）和疫苗生产工艺复杂等缺点。从１９７７年开始研制非神经组织的弱毒疫苗，种毒为ＬＥＰ－Ｆｌｕｒｙ株，用ＢＨＫ一２１传代细胞生产疫苗，仅限家犬使用，免疫期为１年。８０年代初从国外引进了ＥＲＡ株，在ＢＨＫ一２ｌ细胞上进行生产，其对马、牛、羊和犬的免疫力可达一年以上。中国药品生物制品检定所利用ＣＴＮ－１８１毒株在ＢＨＫ一２１传代细胞生产疫苗，免疫性与ＬＥＰ—Ｆｌｕｒｙ相似，但安全性比ＬＥＰ—Ｆｌｕｒｙ好。长春生物制品研究所制备的ａＧ株原代仓鼠肾弱毒佐剂疫苗在给犬接种后，中和抗体至少可保持一年，加强免疫一次后，免疫期可持续２年以上。中国军事兽医研究所、长春生物制品研究所分别从ＳＡＤ株和ＣＴＮ－Ｉ株中筛选制备了犬口服疫苗，犬口服后抗体阳转率分别大于或等于９７％和８０％。随着分子生物学和分子病毒学的发展，基因工程疫苗、合成肽、抗独特型抗体疫苗及基因疫苗等狂犬病疫苗正在研究和发展中，目标是生产免疫原性好和安全性高的兽用口服弱毒疫苗［心】。２００３年，张云等［１４】应用ｐＡｄＥａｓｙ载体系统，构建了表达ＧＰ基因的重组腺病毒狂犬病疫苗。由于基因工程疫苗既保留有完整的狂犬病毒免疫原性，又不具有狂犬病病毒的致病基因，是我国兽用狂犬病疫苗的研究方向。近年来，国内已经开始从事兽用狂犬病灭活疫苗的研究，相信不久便可用于预防动物狂犬病的预防。

３结语’

欧美国家对家养动物进行强制性接种和捕杀

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