牛黄解毒片的分析综述

1 牛黄解毒片的分析综述

摘要:目的:介绍牛黄解毒片质量控制方法的研究进展及趋势。

方法:查阅资料，选取有代表性的文献进行综述。结果:叙述牛黄解毒片在定性、定量和检查三个分析项目上的研究进展，说明了牛黄解毒片质控的趋势和需解决的现实问题。结论:牛黄解毒片的质量将得到更有效，更全面的控制。

关键词:牛黄解毒片;质量控制方法;综述牛黄解毒片是临床常用的中药复方制剂，成分有人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰品、甘草，收载于2010 版《中国药典》一部[1] 。现行标准中虽有一套简便易行的质量控制方法，但不够完整和全面。随着新技术的发展，学者们对牛黄解毒片进行了更深入的研究。因此，本文通过对近十几年来牛黄解毒片的质量控制进展进行分析总结，为进一步加强牛黄解毒片质量控制方法的研究，建立科学合理的质控指标，保证其内在质量，确保临床安全、有效、合理、规范提供参考。1.鉴别1.1 性状、显微鉴别和化学鉴别合格的牛黄解毒片除去包衣后应显棕黄色，有冰片香气，味微苦，辛。王蕾等[2] 对五个生产厂的牛黄解毒片进行抽查检验，结果从外观性状看大部分批次不合格。《中国药典》2010 版中以60~140μm 的草酸钙簇晶(大黄)和有光泽的金黄色或橙黄色不规则碎块(雄黄)作为代表进行显微鉴别。张惠珍等[3] 对8 家厂家产的牛黄解毒片进行显微鉴别，观察到三个样品中簇晶的大小和形态不符合规定，并用薄层色谱鉴别出这种非正品大黄为河套大黄，证明显微鉴别对大黄真伪进行质量控制的方法结果确实可靠。冰片是其清热解毒的中药成分作用，具有升华性。《中国药典》2010 版中利用微量升华鉴别法，将升华物加新配制的1%香草醛硫酸溶液1~2 滴，液滴边缘渐显玫瑰红色来证明冰片的存在。张宜凡等人[4] 则是用乙醚超声提取，挥干后在残渣中加入1%香草醛硫酸溶液1~2 滴，观察有无出现紫红色来验证冰片的存在。1.2 色谱鉴别《中国药典》2010 版采用薄层色谱法对胆酸、大黄、黄芩和人工牛黄进行定性鉴别。赵慧敏等人[5] 在实际工作中对牛黄解毒片检验发现，微量升华法鉴别冰片的结果有的不是十分明显，故改用薄层层析色谱法鉴别冰片，将牛黄解毒片用乙醚超声提取，挥干溶剂后加入乙酸乙酯作为供试品，取冰片对照品的乙酸乙酯溶液作为对照品，以苯-醋酸乙酯(19:1) 2 在硅胶G 薄层板上展开，晾干后用新配制的1%香草醛硫酸溶液显色，在110℃烘数分钟，显相同位置的玫瑰红色斑点。该法较化学法干扰更少，结果更清晰明显。另外，张宜凡等人也是使用薄层色谱法鉴别冰片，与上法比较，其最大的特点在于设计了阴性对照溶液，是按处方比例，取不含冰片的其他七味药，粉碎混匀后按供试液同法制备成阴性对照液。结果显示阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应位置上无斑点。并比较不同点样量对斑点深浅的影响，结果确定点样量以5μL 为佳。人工牛黄的主要成分是胆酸、猪去氧胆酸、胆红素，药典中只对胆酸做鉴别，吴琼莲等人[6] 抽检8 家药厂的12 批牛黄解毒片进行胆红素鉴别，分别对供试品溶液、胆红素对照品溶液阴性对照溶液、人工牛黄对照溶液进行点样，以氯仿-冰醋酸(10:0.2)为展开剂，展开。结果供试品色谱中在与对照品色谱相应位置均显相同的深黄色斑点，阴性对照溶液无干扰。可以用胆红素斑点的大小和颜色证明人工牛黄的优劣。汤新兰[7] 利用牛黄解毒片中胆酸的薄层鉴别供试液直接作为大黄的薄层鉴别的供试液点于硅胶H 薄层板，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)为展开剂，展开晾干，结果供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上均显示相同颜色的斑点。最后得出结论:《中国药典》2010 版中胆酸的薄层鉴别供试液可用于大黄的薄层鉴别，该法更为简便、快捷、重现性好。肖安菊等人[8] 亦采用薄层鉴别人工牛黄的供试液点于硅胶G 板上，以环己烷-醋酸乙酯(17: 3)为展开剂展开，也能得到清晰明显的结果。张玮等[9] 应用聚酰胺薄层色谱法以黄芩苷为对照品对黄芩进行定性鉴别，以醋酸作为展开剂展开，效果较理想。该法较药典中的方法，提取过程简单，所用试剂单一，降低了试验成本并缩短了检验周期，结果也十分可靠。

1.3 指纹图谱对牛黄解毒片指纹图谱的研究较活跃，其中色谱指纹谱报道较多，此外红外

光谱指纹谱、X-光衍射指纹谱也有报道: 孙国祥等[10] 采用RP-HPLC 法，用“中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统3.0”软件计算牛黄解毒片HPLC 指纹图谱的46 个参数并进行潜信息特征数字化评价，以黄芩苷峰为参照物峰，确定51 个指纹峰，建立了牛黄解毒片-HPLC 数字化指纹图谱，以双定性- 双定量相似度法评价不同批次牛黄解毒片质量。在此方法的基础上，毕开顺等[11] 也是采用RP-HPLC 法，用系统指纹定量法评价牛黄解毒片质量，以黄芩苷为参照物峰，确定53 个共有指纹峰，建立了牛黄解毒片-HPLC 指纹图谱，以宏定性相似度和宏定量相似度为参量对15 批牛黄解毒片进行聚类分析，确定以其中10 批生成对照指纹图谱，以此为标准评价15 3 批牛黄解毒片质量。李洪宇等[12] 采用丙酮提取牛黄解毒片中成分并测试提取物的红外指纹图谱，对10 批牛黄解毒片红外图谱进行平均化处理后，作为标准图谱建立快速比较方法。计算机对图谱的横、纵坐标数据进行峰位及相对峰强进行比较，得出相似度。相似度高于90%才判定为合格产品。这些信息可以用为评价牛黄解毒片的真伪。郑笑为等[13] 比较了21 批牛黄解毒片由粉末X 衍射所得X 衍射傅里叶图谱的图形几何拓扑规律和特征标记峰，通过图形的识别及特征标记峰的分析，比较不同厂家的产品质量，明显不同者说明了其在药材来源、制剂工艺等方面的不规范。这种方法虽然能够控制牛黄解毒片的整体质量，但是缺乏标准指纹图谱，无法快速比较得出结果。2.检查牛黄解毒片中雄黄的毒性较强，其主要成分为三硫化二砷，且易分解氧化成三氧化二砷，毒性更强，若大量服用，其毒性可影响到神经系统、消化系统、造血系统和泌尿系统[14] 。故牛黄解毒片的质量检查中应检查三氧化二砷。采用古蔡氏法判断砷斑，精密度不高、重复性差，难以做到准确测定[15] 。故郑志祥等[16] 建立了银盐法测定牛黄解毒片中三氧化二砷含量的方法，将试样与标准砷溶液在同一条件下的产物置分光光度计下测定透光度，通过比较透光度的相对大小，来判断是否符合规定。该法优点在于可以避免目视法引起的误差，但比较繁琐和复杂。近年来的研究多侧重于牛黄解毒片中砷的含量测定，这部分内容将在“含量测定”项下介绍。彭柳等[17] 采用微波消解法对牛黄解毒片样品进行消解，采用石墨炉原子吸收光谱法对重金属元素Cu、Pb、Cd 进行测定，使用氢化物发生-原子吸收光谱法对As 及Hg 元素进行测定。该法除了准确测定出As 的含量，同时测定了其他四种重金属元素的含量和总金属含量，为制定牛黄解毒片重金属检查的限量标准提供依据。中成药的药效与所含微量元素有关，而药典中并未涉及这一点，故李玉珍等人[18] 采用压力溶弹消解-快速火焰原子吸收法对牛黄解毒片中Cr、Mn、Fe、Zn、Cu 5 种微量元素含量进行测定，结果显示不同厂家的牛黄解毒片中Fe 含量有较大差异，其他元素含量相差不大。该方法准确可靠，可用于牛黄解毒片中微量元素的检查。被微生物污染了的中药制剂，一方面可能导致其成分分解、变质而失去疗效，另一方面微生物本身的致病性可能导致服用者患病[19] 。吴琳等[20] 分别采用常规法、培养基稀释法、离心集菌薄膜过滤法测定牛黄解毒片对大肠埃希菌等5 种试验菌株的回收率，结果发现本法能准确检出牛黄解毒片中所污染菌。唐素芳[21] 采用了培养基稀释法、离心集菌薄膜过滤法、 4 薄膜过滤法对细菌、霉菌及酵母菌、控制菌逐一进行验证，结果显示8 家药品生产的牛黄解毒片均符合规定。为药品检验机构对牛黄解毒片的微生物限度检查提供了完整、可靠的验证方法。在对牛黄解毒片进行检验时，若按标准规定的生产工艺，不应检验出除大黄、雄黄以外的细胞组织，但是，近年来有部分企业为了降低生产成本，擅自改变生产工艺，而现行标准并没有规定对其中的异性有机物进行检查，因此无法有效监管企业的这种行为。徐庆辉[22] 将收集的3 个厂家7 批次的牛黄解毒片扫描近红外光谱和显微鉴别后，将法定检验结果与近红外光谱结合，建立应急检验模型，该法具有简便、易操作等特点，可以作为异性有机物的筛查方法。3.含量测定2011 版《中国药典》采用高效液相色谱测定了其中黄芩苷的含量。李巍等[23] 用固相萃取柱进行样品前处理，采用循环伏安法与差示脉冲伏安法研究黄芩苷在玻碳电极上的伏安行为。结果显示用20%