乙肝病毒DNA的实验室检测
乙肝的实验室诊断标准
乙肝的实验室诊断标准
乙肝的实验室诊断标准主要包括以下几个方面：
1. 乙肝病毒标志物的检测：如乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）、核心抗体（抗-HBc）等。
这些指标的阳性或阴性可以用来判断是否感染了乙肝病毒。
2. 肝功能检查：包括谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、胆红素等指标。
这些指标的异常可以反映肝脏的功能状况，有助于判断病情和治疗效果。
3. 乙肝病毒DNA检测：通过检测乙肝病毒DNA的含量，可以了解病毒复制的程度，有助于判断病情和制定治疗方案。
4. 肝脏病理学检查：对于一些病情较重或需要进一步了解肝脏病变情况的患者，可以进行肝脏病理学检查，通过观察肝脏的组织结构、炎症程度、纤维化程度等指标，对病情进行评估和诊断。
需要注意的是，不同的实验室诊断标准在不同的临床情况下可能有不同的意义和用途，医生会根据具体情况选择合适的检测方法，并结合临床表现和其他检查结果进行综合分析和诊断。
乙肝dna即刻法质控规则
乙肝dna即刻法质控规则
乙肝DNA即刻法是用于检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA的一种快速检测方法，而质控规则是保证检测结果准确可靠的重要环节。
乙肝DNA即刻法的质控规则通常包括以下几个方面：
1. 内部质控，实验室需要建立内部质控体系，包括稳定的实验操作流程、标准操作程序和质控样本。
内部质控样本应与临床样本一起进行检测，以确保实验操作的稳定性和准确性。
2. 外部质控，实验室需要参与外部质控项目，定期将实验室的检测结果提交给权威的外部质控组织进行评估。
通过与其他实验室的比对，可以评估实验室的准确性和可靠性。
3. 质控记录和分析，实验室需要建立完善的质控记录系统，记录每次实验的操作步骤、检测结果和质控样本的情况。
对质控数据进行定期分析，及时发现和纠正实验中出现的偏差和问题。
4. 质控标准和参考值，实验室需要按照相关的质控标准和参考值进行操作，包括使用符合要求的试剂盒和仪器设备，按照标准操作程序进行检测，以确保结果的准确性和可比性。
5. 质控措施，当实验中出现偏差或问题时，实验室需要及时采取相应的质控措施，包括重复检测、检查仪器设备状态、调整操作流程等，以确保检测结果的准确性和可靠性。
总的来说，乙肝DNA即刻法的质控规则是确保实验室检测结果准确可靠的重要保障，实验室需要严格遵守相关规定和标准，建立完善的质控体系，不断优化实验操作流程，提高检测结果的准确性和可靠性。
实时荧光定量PCR检测HBV DNA室内质控分析
实时荧光定量PCR检测HBV DNA室内质控分析目的探讨实时荧光定量PCR在HBV DNA定量检测过程中的室内质控问题。
方法用实时荧光定量PCR法检测2013年1~7月自制的乙肝阳性室内质控血清，与临床标本同步检测，计算每次阳性质控结果的常用对数、标准曲线的斜率、截距和相关系数(r)及相关结果的均值(x)、标准差(s)和变异系数(cv)，利用EXCEL折线散点图画出质控图进行质控。
结果本室2013年1~7月测定自制的阳性室内质控结果测定值均在控，标准差和变异系数均在允许范围内，符合要求。
结论本实验室采用实时荧光定量PCR检测HBV-DNA定量检测过程中，选用的质控方法和自制的质控品稳定性良好，能可靠有效地为临床提供准确的检验结果。
Abstract：ObjectiveTo explore the indoor quality controlproblems in HBV DNA quantitative detection of real-time fluorescence quantitative PCR. Indoor quality control serum HBsAg positive self detection.MethodsFor 1~7 months of 2013 by real-time fluorescence quantitativePCR method and clinical specimens, synchronous detection, curve of standard logarithm, calculated for eachpositive quality control results of the slope, intercept and correlation coefficient (R) value and related results ,standard deviation (s) and the coefficient of variation(CV), scatter picture quality control chart for quality control by using the EXCEL line. ResultsThe 1~7 months of 2013 were positive results of internal quality control of homemade measured values are in control, the standard deviation and variation coefficient were within the allowable range, meet the requirements. ConclusionThis laboratory detection of HBV-DNA quantitative real-time fluorescence quantitative PCR detection process,quality control methods and quality control of homemadegood stability, can provide valid and reliable accurate test results for clinical.Key words：Real time fluorescence quantitative PCR; Polymerase chain reaction; HBV-DNA; Quality controlHBV DNA含量是诊断和监测乙型病毒性肝炎的重要指标[1]。
小三阳dna定量的标准是
小三阳dna定量的标准是小三阳DNA定量的标准是什么？小三阳是指乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒核心抗体（HBcAb）三项指标中，HBsAg、HBeAg阳性，HBcAb阴性的状态。
小三阳患者是指乙肝病毒携带者中，血清HBV-DNA定量＞10^4～10^5拷贝/ml的患者。
那么，小三阳DNA定量的标准是什么呢？小三阳DNA定量的标准主要是通过实验室检测乙肝病毒DNA的数量，来确定患者的病情和治疗方案。
根据国际上的共识，小三阳DNA定量的标准一般是指血清HBV-DNA定量＞10^4～10^5拷贝/ml。
这个标准是根据临床研究和实践经验得出的，对于小三阳患者的治疗和管理具有重要的指导意义。
HBV-DNA定量是通过PCR技术来检测乙肝病毒DNA的数量，PCR技术是一种高灵敏度和高特异性的方法，可以准确地检测出血清中的乙肝病毒DNA。
根据检测结果，可以确定患者的病毒载量，从而指导治疗方案的制定和调整。
小三阳患者的DNA定量结果在一定程度上反映了病毒的活跃程度和病情的严重程度。
一般来说，DNA定量＞10^4～10^5拷贝/ml的患者病毒活跃度较高，需要及时进行治疗和管理，以防止病情的进一步恶化。
而对于DNA定量＜10^4拷贝/ml的患者，可以采取观察和监测的策略，定期进行血清HBV-DNA的检测，以及肝功能和肝脏影像学的检查，及时发现病情的变化。
除了DNA定量，对于小三阳患者来说，还需要进行肝功能、肝脏影像学和肝纤维化程度的评估，综合判断患者的病情和治疗方案。
对于DNA定量＞10^4～10^5拷贝/ml的患者，一般建议进行抗病毒治疗，以减少病毒载量，控制病情发展。
而对于DNA定量＜10^4拷贝/ml的患者，可以采取规范化管理和监测的策略，定期进行血清HBV-DNA的检测，及时调整治疗方案。
在治疗过程中，需要密切监测患者的DNA定量和肝功能指标的变化，及时调整治疗方案，以达到控制病情、减少病毒载量、保护肝脏功能的目的。
乙肝dna定量标准
乙肝dna定量标准
乙肝DNA定量是用于测量乙型肝炎病毒（HBV）DNA在患者血液中的数量的一种检测方法。
定量检测有助于评估病毒活动性、指导治疗和监测疾病进展。
乙肝DNA定量的结果通常以国际单位（IU/mL）或拷贝数
（copies/mL）表示。
标准化乙肝DNA定量的一种常见方法是使用国际标准物质，即WHO国际标准物质。
该标准物质通常包括已知数量的乙肝病毒DNA，并已被广泛认可和使用。
在进行乙肝DNA定量时，实验室通常使用这些标准物质进行标定，以确保测试结果的准确性和可比性。
实验室通常会报告标本中乙肝DNA的数量，并与国际标准物质进行比较，以确定病毒载量。
这有助于医生了解患者的感染程度，并为治疗决策提供重要信息。
标准化和规范化乙肝DNA定量方法对于确保测试结果的可比性和一致性非常重要。
因此，在实验室进行检测时，通常会遵循相关的质量控制和质量保证标准。
高敏度乙型肝炎病毒DNA定量检测 项目简介
高敏度乙型肝炎病毒DNA定量检测简介该项目对乙肝病毒DNA定量检测的灵敏度可达10 IU/ml，远高于常规乙肝病毒DNA定量检测（常规检测下限为500 IU/ml），且该检测的线性范围可达20 IU/ml~2.0×109 IU/ml。
通过本项目的检测可有效减少由于检测灵敏度不足导致的“假阴性”和漏检，避免了乙型肝炎患者提早停药、病情复发及重复检验等问题，对乙肝的诊疗具有重要的应用价值。
临床意义
①高敏度乙型肝炎病毒DNA定量检测，可作为抗病毒治疗患者治疗终点和复发再治判断的依据，以及隐匿性病毒性肝炎的诊断；
②帮助评估患者抗病毒治疗效果，监测耐药；确定更符合临床的治疗方案，实现优化的个体化治疗；
③通过检测病毒载量来反映人体内乙肝病毒是否存在及病毒复制活跃程度，HBV DNA载量越高复制越活跃，传染性也越高。
筛查时期
1.抗病毒治疗半年时；
2.巩固治疗期没半年检测一次；
3.停药患者每3个月检测一次；
4.隐匿性乙肝病毒感染诊断。
标本采集要求
干燥管取血，及时分离血清1.5ml，2-8℃保存。
临床项目收费标准。
乙型肝炎病毒DNA定量检测的临床应用
乙型肝炎病毒DNA定量检测的临床应用目的：探讨乙型肝炎患者HBV-DNA含量与其乙型肝炎血清学标志物的关系。
方法：采用微板核酸杂交技术对200例乙型肝炎血清学标志物阳性的患者和20例正常健康人群，进行HBV-DNA PCR定量检测。
结果：根据血清学标志物分为五组，HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性患者HBV-DNA含量高于其他患者，比较差异有统计学意义（P＜0.05），HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性患者与HBsAg、抗-HBc均阳性患者DNA拷贝数比较差异无统计学意义。
结论：乙肝血清学标志物作为乙肝病毒有无感染的指标不能完全反映患者体内HBV的复制情况，HBV-DNA定量检测对监测乙肝病毒感染的病情发展及抗HBV复制药物的治疗具有重要意义。
标签：乙型肝炎病毒；微板核酸杂交；血清学标志物【Abstract】Objective：To investigate the relation between the amount of HBV-DNA in serum of patients with HBV infection and the marker of hepatitis B virus.Method：Serum HBV-DNA was quantitatively detected by tiny plank nucleic acid hybridize technique of PCR to 200 policlinic patients infected with HBV and 20 healthy men.Result：The men were divided into 5 groups with the marker of HBV，there were significance differences from student test between HBsAg，HBeAg，HBcAb masculine and others.Conclusion：It is as index that the marker of HBV monitor hepatitis B virus infection，which couldn’t reflect completely replication of HBV.Quantitative detection of HBV-DNA had important significance to moniter the state of HBV infection and drug treatment.【Key words】Hepatitis B virus；Tiny plank nucleic acid hybridize；Marker of serum hepatitis B virus我国是世界上乙型肝炎病毒感染的高发地区，全国约有50%～70%的人感染过乙型肝炎病毒，约10%的人为携带者。
乙肝病毒DNA检测Microsoft Word 文档
乙肝病毒DNA检测乙肝病毒DNA指的是脱氧核糖核酸，病毒的复制是靠DNA的复制来完成的，DNA的浓度越高，病毒的复制越活跃。
合起来，HBV-DNA指的就是乙肝病毒的脱氧核糖核酸。
乙肝病毒DNA检测是判断乙肝病毒复制的常用手段。
一般的，把数值大于10的3次方为阳性，把3-5次方认为是低量复制，5-7为中等量，大于7次方为大量。
乙肝两对半并不能准确的判断病毒复制情况，DNA弥补了这个的不足。
不过由于DNA检测技术要求严格，容易受到干扰，因此，一次结果不足以说明问题，遇到阳性，可以换医院再次检查。
目录1DNA检测2作用3临床意义4复制过程▪第一步：黏附▪第二步:脱壳▪第三步：入核▪第四步：转录▪第五步：翻译▪第六步：逆转录▪第七步：组装5频率6注意事项7检测方法8检测报告9检测费用10检测要空腹吗11乙肝病毒DNA检测的作用1DNA检测以往乙肝患者抗病毒治疗的指征是：乙肝病毒e抗原阳性（大三阳）患者HBVDNA数值要求达到10的5次方拷贝/毫升（20000U/ml），乙肝病毒e抗原阴性（小三阳）患者乙肝病毒DNA数值要求达到10的4次方拷贝/毫升（2000U/ml），但是10的4次方拷贝/毫升以下也不能认为就没有问题了，最新的国际研究资料表明：和肝脏疾病进展相关的病毒DNA水平域值尚不清楚，即使HBVDNA水平持续低于20000U/ml，也可能乙肝病毒情仍在进一步发展，因此HBVDNA数值应该越低越好，目前国际建议的HBVDNA检测正常值应该是：< 50U/ml 。
2作用目前，乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中使用的越来越普遍，可见乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中占的分量越来越重，这是因为乙肝病毒DNA检测对确诊乙肝和评估乙肝治疗效果具有十分重要的作用。
主要表现在以下七个方面：1、了解乙肝病毒在体内存在的数量。
2、乙肝病毒是否复制。
3、乙肝是否传染，传染性有多强。
4、是否有必要服药。
5、肝功能异常改变是否由病毒引起。
乙肝病毒DNA检测2种不同核酸提取方法的性能验证情况分析
乙肝病毒DNA检测2种不同核酸提取方法的性能验证情况分析董剑;许小华【摘要】目的:对乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测的2种不同核酸提取方法,即手工法(煮沸法)和全自动核酸提取仪法(磁珠法),在使用相同的检测试剂和核酸扩增仪的条件下进行性能验证,以评价其验证结果.方法:依据《医学实验室质量和能力认可准则》《全国临床检验操作规程》等相关文件,由同一操作人员应用中山达安公司生产的HBV-DNA检测试剂盒和ABI7500实时荧光核酸扩增仪,分别采用手工法和全自动核酸提取仪法提取HBV-DNA进行临床样本的批内精密度、批间精密度、正确度、线性范围性能验证实验.结果:手工法的高值血清批内精密度为2.18％,低值血清批内精密度为3.76％;高值质控品批间精密度为3.29％.全自动核酸提取仪法的高值血清批内精密度为1.78％,低值血清批内精密度为2.44％;高值质控品批间精密度为2.84％.正确度验证分别取浓度为2.0×103、2.0×104、2.0×105、2.0×106copies/ml的可溯源标准品进行验证,手工法偏倚分别为-4.88％、-2.51％、-2.46％,-2.12％,全自动核酸提取仪法偏倚分别为-2.37％、-0.95％、0.74％、-1.33％.线性范围验证中,手工法和全自动核酸提取仪法的相关系数分别为0.9660、0.985 8,均能满足临床检测的需求.结论:全自动核酸提取仪法较手工法提取核酸有利于简化HBV-DNA提取流程,实现分子生物实验室自动化提取核酸.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2019(040)006【总页数】4页(P40-43)【关键词】乙型肝炎病毒DNA定量检测;手工(煮沸法);全自动核酸提取仪法(磁珠法);性能验证;血清【作者】董剑;许小华【作者单位】联勤保障部队第909医院检验科,厦门大学附属东南医院检验科,福建漳州363000;联勤保障部队第909医院检验科,厦门大学附属东南医院检验科,福建漳州363000【正文语种】中文【中图分类】R318;R446.10 引言乙型肝炎也被称为乙肝，是目前世界上最常见的一类传染病，据不完全统计[1] ，在全世界范围每年至少有100万以上的患者死于乙肝。
乙肝有哪些实验室检测
乙肝是临床上最为常见的一种传染性慢性疾病，其发病率非常高。
乙肝患者可能因为各类途径而感染乙肝病毒，乙肝病毒会破坏乙肝患者的肝脏及免疫功能，如果长期患病，就会诱发肝硬化，最终转化为肝癌。
就目前而言，临床上找不到治疗乙肝的方法，只能采取科学有效的措施预防乙肝，进而大大降低发病的概率。
乙肝病毒感染被誉为世界范围内最为严重的公共卫生问题。
据统计，世界上的百分之五的人口已出现慢性感染症状，百分之十五至百分之三十五的人口将由最初的慢性乙型肝炎演变为肝硬化或肝癌。
由此可见，想要降低乙肝病毒感染率，就需从根源入手，及时检测并进行针对性治疗。
鉴于部分研究人员在此方面已进行深入探究，且取得了一定进展，所以医者需基于乙肝病毒感染检测技术研究进展进行乙肝病毒感染检测工作。
如此，才可及时检测乙肝病毒感染，才能及时进行防治。
什么是乙肝？乙型肝炎病毒被称为乙肝病毒，它属于一种 DNA病毒。
猩猩和人类很容易感染这种病毒。
乙肝患者是感染乙型肝炎病毒而发病，这种疾病的病程较长，乙肝患者的肝脏会出现慢性炎性病变，进而导致患者患上肝癌、肝硬化以及出现多脏器损伤的情况。
目前来说，乙肝病毒携带者的数量仍然在逐年增长，大部分的患者患病都是由于对乙肝相关的知识不了解以及不重视预防乙肝，进而导致疾病的发生。
因此，乙肝相关预防知识的普及教育非常重要。
乙肝实验室检测有哪些？1.快速检测乙肝病毒感染快速检测技术为胶体金免疫层分析技术，其具备试剂稳定、检测时间短、标本用量少等优势。
因乙肝病毒感染突如其来，倘若无法进行快速检测，将会造成错珍，使患者错过最佳治疗时期，而快速检测技术可于简陋环境下快速生成报告结果，可为医者接下来的治疗奠定基础，所以在工作中起到了一定的作用。
2.电子显微镜技术2.1常规电镜法英国学者曾于1970年在电镜下发现了完整的乙肝病毒颗粒，通过不断探究后，发现这一方法于检测乙肝病毒感染方面有一定的优势。
如:观察较为直观、形象，制样速度较快，标本用量少。
乙型病毒性肝炎的实验室检查详解演示文稿
HBV C基因
前C区
C区 表达
HBeAg
前C / C 蛋白
切割、加工 HBcAg
分泌到细胞外
HBeAg只存在于血清中
5
第五页，共32页。
HBV 的三种形态
1,Hepatitis B virion(Dane particle)
2,secreted filament 3,secreted sphere
疗有效；
每日0.5mg恩替卡韦治疗1年时, HBeAg 阳性和阴性慢性乙型肝炎患者 HBV DNA 检测不到率分别为67% 和90%, 恩替卡韦的HBeAg转换率为 21% , 与其他口服抗病毒药相似。
并不以HBeAg转阴或HBsAg转阴为治疗终点或目标。 24
第二十四页，共32页。
HBV DNA 定量检测试剂盒的性能对比
胆碱酯酶, 甲胎蛋白, 凝血酶原时间(PT)及部分凝血因子；
9
第九页，共32页。
2. HBV 血清标志物检测
方法学的发展
ELISA：灵敏性高，成本低，适用于普通病人筛查； 胶体金免疫层析法(金标法)：简便易行，可用于急诊病人快速检测； 化学发光法定量检测：价格昂贵，可用于HBVMs为临界值的病人的
学 改 善
清 除
对 干耐 扰药 素变 应异 答
27
常用HBV基因分型方法比较
分型方法 序列测定法
聚合酶链反应-限制性片 段长度多态性分析法 (PCR-RFLP) pre-S2单克隆抗体酶联 免疫测定 (mAbs EIA法)
分子探针杂交法
型特异性引物PCR法
优缺点
最直接，最可信，是HBV基因分型的金标准，但繁琐 费时而且价格昂贵，混合型检测能力差，不适于大样本 检测。
乙肝丙肝实验室检测及临床意义PPT课件
丙型肝炎抗体测定（ Anti-HCV）
血浆/血清/全血 250403014 20元 酶免
每天上午10：00前样本当天可出报告，10:00后样本第二天下午 出报告
HBV 血清学检测
HBV DNA检测
HBeAg
HCV RNA检测
HBV DNA 分子检测 HBV DNA 定量检测
HBV 耐药突变株检测
③ PCR检测结果与其它检测 项目不同，一般量值变化 在一个数量级内均视为没 有变化
乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测意义
缩短“窗口期”，有利于感染的早期诊断
HBV感染后至血液中出现可检出的HBsAg或HBV特异抗体需要一定时间。
HBV DNA先于 HBsAg出现于外周
血循环中 实时荧光定量PCR检
HBeAg
HCV RNA检测
表面抗原 (HBsAg) e 抗原(HBeAg) 表面抗体(抗-HBs) e抗体(抗-HBe)
HBV血清学检测——乙肝两对半
+ 定性（qualitative） 判断阴阳性
+ 定量（quantitative） 单位：ng/ml、IU/ml、IU/L、PEIU/ml
定性-乙肝“两对半”
HBV DNA高精度检 全血、血清、血浆 促凝管 4℃ 测
每周一、周四10:30 前样本，15:00出报 告
每周四11:00前样本 ，当日16:30出报告
HCV RNA检测 全血、血清、血浆 促凝管 4h内送 每周三10:00前样本
至实验室
，15:00出报告
HBV耐药基因检测 全血、血清、血浆 促凝管 4℃
－
－
接种疫苗获得免疫力
相关检验项目详情
检验科（84005）
检测
乙肝病毒DNA怎么检测
乙肝病毒DNA怎么检测乙肝病毒DNA是乙肝病毒的核心物质，也是病毒进行复制（医学对病毒的繁殖统称为“复制”）的基础。
其复制依靠病毒体内的DNA为模板，转录形成两段不同长度的RNA，短片段转译成外衣壳蛋白，长片段除转译为衣壳蛋白外，还继续作为模板进行病毒复制。
DNA全称为脱氧核糖核酸，体内病毒DNA载量越高，表明病毒在体内复制越活跃，传染性也越强。
一、乙肝病毒DNA阳性意味着什么乙肝病毒是一种部分双链病毒，其遗传物质DNA拥有病毒全部的遗传信息，乙肝病毒通过DNA进行复制、增殖、繁衍。
过去的研究证明，乙肝病毒的裸DNA，也就是DNA外没有蛋白质包裹，就具有感染性，通过侵袭宿主，在宿主体内形成完整的乙肝病毒颗粒，乙肝病毒DNA就是完整的乙肝病毒颗粒。
所以，如果在人体血浆中检测到乙肝病毒DNA，无论乙肝两对半中抗原标志物是否出现阳性，都可以判断此人已经感染了乙肝病毒，并且他的血液和体液有着较强的传染性。
同时如果该患者伴有转氨酶升高就可以确诊为乙肝患者，后期就要进行保肝、降酶、抗病毒等的治疗。
而该患者的亲属需要进行乙肝表面抗体检测，根据抗体量判断是否需要进行乙肝疫苗的注射，防止被传染。
二、乙肝病毒DNA检测的意义（一）乙肝病毒DNA定性和定量的检查对于后期医生的诊断和用药具有重要的意义，当前大多数医学者的共识是，通过进行抗病毒治疗可以把血浆中乙肝病毒DNA的含量降低，这也是进行乙肝病毒感染治疗的必要方法。
通过乙肝病毒DNA检测可以帮助医生选用抗病毒治疗药物；还可以对患者的治疗效果进行监测，判断预后。
根据患者体内乙肝病毒DNA量的变化进行用药的剂量和用药时间进行调整，判断是否需要联合用药，也是对抗病毒治疗效果或使用的免疫增强药物疗效判定的重要指标。
（二）乙肝病毒DNA测定能够直接反映体内病毒数量和传染性，是治疗过程中的重要监测指标。
通过监测乙肝病毒DNA，能够判断病毒的传染性。
也就是说乙肝病毒DNA载量越高，体内的病毒量就越多，病毒复制更为活跃，当然也就拥有较强的传染性。
乙肝dna检测规程模板
乙型肝炎病毒核酸扩增荧光定量检测标准操作程序1.目的：明确乙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行乙肝病毒核酸定量的检测。
2.适用范围：2.1适用于进行乙肝病毒核酸定量检测的检验人员。
2.2适合仪器：LightCycler型核酸扩增荧光检测仪2.3方法原理：采用PCR方法结合荧光探针的扩增技术2.4样品要求：血清3.职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。
4.试剂来源：中山大学达安基因股份有限公司HBV DNA荧光PCR检测试剂盒。
5.质控物：阴性、阳性对照及阳性参控品系列均来源于试剂盒6.标准操作：6.1 试剂准备（在试剂准备区操作）6.1.1将试剂盒及其它所需试剂置室温解冻（Taq酶为液态试剂，临用前取出，用后立即放回冰格），完全融解后混匀。
6.1.2根据当次实验标本量，取出相应试剂总的需求量于一管中（其余随即放回原温度保存），如所需要的管数为n (n=标本数+1管阴性对照+1管阳性对照+1管临界阳性对照+4管阳性参控品)（定性检测无需做阳性参控品），取PCR反应管，转移至样本制备区。
6.2 样本制备及加样（在标本制备区操作）6.2.1 取血清标本40ul，或阴阳性对照标准品各10ul（强阳性标准品使用前加入稀释液90ul 混匀），加等量DNA提取液打匀，（提取液内含不溶于水的物质，取样时需用加样器充分混匀后吸取。
如出现因吸头嘴部太细不能吸取或取样后填满吸头的现象，可先用洁净无污染的剪刀将吸头嘴部剪去一截）。
沸水浴10分钟，转至4℃静置8-12小时以保证病毒颗粒充分裂解。
6.2.2 10000rpm离心5分钟，取上清液2ul直接加入到PCR反应管中，6000rpm离心数秒。
6.2.3 将各反应管带入PCR仪。
6.3 PCR扩增（在扩增区操作）按仪器使用说明或标准操作程序操作。
扩增条件如下：93℃→2分钟预变性93℃30秒→55℃60秒（40个循环）6.4 结果判断：6.4.1 2个阴性对照的Ct值应无数值，1个强阳性对照的Ct值应小于等于30，1个临界阳性对照的Ct值应大于阳性对照的Ct值，并小于等于38，否则实验视为无效。
乙肝dna检测方法
乙肝dna检测方法
乙肝DNA检测方法主要有两种：核酸杂交法和聚合酶链反应（PCR）法。
1. 核酸杂交法：该方法通过将乙肝病毒DNA片段与标记有放射性核素或荧光染料的探针结合，一旦存在乙肝病毒DNA，则产生特定的核酸杂交信号。
这种方法可以用于检测乙肝病毒的DNA含量、基因型、药物抗性等信息。
2. 聚合酶链反应（PCR）法：PCR是一种体外扩增DNA的技术，可以高度敏感地检测乙肝病毒DNA。
它通过复制乙肝病毒DNA的特定片段，使其达到可检测的水平。
PCR法可以快速、准确地检测乙肝病毒DNA，对乙肝的早期诊断和病毒载量监测具有重要意义。
这两种方法都是常用的乙肝DNA检测技术，具有高度敏感性和特异性，能够辅助乙肝的诊断和治疗。
但是，具体使用哪种方法还需根据医生的建议和实际情况来确定。
梅毒、 艾滋病、乙肝的实验室检测
三期梅毒
. 流行病学：多数有不安全性行为，或性伴感染史，或多性伴史；可有一期或二期梅毒史。病期在2年以上。
. 临床表现：晚期良性梅毒：结节性梅毒疹、马鞍鼻，梅毒性骨关节损坏，眼梅毒，神经梅毒及心血管梅毒。
. 实验室检查：
1、血清检查：
特异性抗体： 阳性
非特异性抗体： 阳性
.
有明确的不安全性行为史，而2年前无不安全性行为史。
.
有过符合一期或二期梅毒的临床表现，但当时未得到诊断和治疗者。
.
性伴有明确的早期梅毒感染史。
晚期隐性梅毒：感染时间在2年以上。无法判断感染时间者亦视为晚期隐性梅毒。既往无明确的梅毒诊
断和治疗史。
临床表现：无任何梅毒性的临床表现。 1、血清检查：
特异性抗体： 阳性 非特异性抗体： 阳性 2、脑脊液检查：一般无明显异常（用于排除无症状神经梅毒）
• 因治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为 疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。
二、梅毒螺旋体抗原血清学试验----- 特异性梅毒抗体
. 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) . 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) . 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） . 化学发光免疫分析法（CLIA） . 梅免疫层析法-梅毒快速检测 (RT) . 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） . 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
• 所有HIV感染母亲所生儿童，在出生后6周或3个月未接受EID检测者，应进行 HIV抗体检测。检测时间： • 满12月龄 和 • 满18月龄（必要时，见HIV抗体检测流程）
• 出生后3个月EID检测结果为阴性的儿童也应接受HIV抗体检测
满18月龄HIV抗体检测阳性，可确认儿童HIV感染。
乙型肝炎病毒DNA定量检测室内质控品的制备及应用研究
乙型肝炎病毒DNA定量检测室内质控品的制备及应用研究目的自制乙型肝炎病毒DNA室内质控血清并探讨其在临床标本检验中的应用价值。
方法用检测后的患者标本自制阳性室内质控血清，用实时荧光定量PCR检测血清HBV-DNA，记录2013年1～5月质控结果、标准曲线的斜率、截距、相关系数和相关结果的均值（x）、标准差（s）及变异系数（cv）；结果自制质控物结果对数的累计数据x±2s范围为 4.3～5.34，在该质控的参考值范围内；结论本实验室采用Taqman实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA实验中，质控品稳定性良好，可联合运用多参数同时监测的质控方法进行，能保证为临床提供有效可靠的准确结果。
标签：聚合酶链式反应；室内质控；斜率；截距；相关系数乙型肝炎属于我国高发的流行性疾病。
日前为止，我国慢性乙型肝炎病毒感染者约为1.3亿，其中慢性乙型肝炎患者约5000万例。
HBV DNA定量检测可反映病毒复制水平，主要用于慢性HBV感染的诊断、治疗适应证的选择及抗病毒疗效的判断[1]。
一般当患者肝功波动，转氨酶升高，乙肝病毒复制指标阳性，肝功处于代偿阶段的时候，抗病毒治疗最为合适[2]。
实时荧光定量PCR是目前核酸定量检测较为理想和方便的方法之一，而Taqman探针技术的应用更大大增加了探针的杂交稳定性，使结果更精确、分辨率更高[3]。
但其结果因反应体系、系统误差、检测条件、人员等多种因素影响，易致结果的批内、批间差异较大，因此需要好的质控方法和质控品保证结果的稳定性和可靠性。
我室收集2013年1～5月对自制HBV-DNA阳性质控血清检测的质控结果、标准曲线和相关结果的均值（x）、标准差（s）及变异系数（cv）进行累积数据评价，斜率、截距、相关系数结果分析如下。
1 材料与方法1.1 试剂与仪器仪器为广州中山大学达安基因股份有限公司生产的DA7600荧光定量扩增分析仪，试剂为该公司配套试剂。
1.2 质控血清来源选取日常患者无溶血、无脂血、无黄疸的阳性血清标本（乙肝病毒定量值104～105），收集标本血清20ml，混匀，进行HBV-DNA定量检测，结果为6.93×104，对数值为4.84，在预期范围内。
乙型病毒性肝炎的实验室诊断
乙型病毒性肝炎的实验室诊断乙肝作为一种全世界广泛传播的疾病，严重威胁人体的健康，愈来愈受到重视。
不少人士定期参加体检以了解自己的身体状况，及早发现乙肝的存在。
乙肝的实验室检测作为目前国内最为常用的检验项目，主要涉及乙肝的生物化学检测、乙肝“两对半”的检测和基因诊断。
第一节乙肝的生物化学检测一、乙肝生物化学检测的简介当患者感染乙肝病毒之后，一些生化指标会发生改变。
与病毒性肝炎密切相关的生化指标包括：丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、白蛋白、胆红素、胆碱酯酶、甲胎蛋白以及凝血因子。
其中，丙氨酸转氨酶（ALT）又最为重要，常与乙肝“两对半”和基因诊断联合检测，指导临床用药。
二、丙氨酸转氨酶（ALT）检测的临床意义丙氨酸转氨酶对于病毒性肝炎的特异性不高，但却是反映肝损伤的灵敏指标。
当患者感染乙肝病毒，发生急性肝损伤时，血清中的丙氨酸转氨酶可在临床症状出现之前升高，且急性肝炎时丙氨酸转氨酶的高低与病情状况平行，因此是病情恢复的较好指标。
通常，当急性肝炎时，AST/ALT<1；肝硬化时，AST/ALT≥2；肝癌时，AST/ALT≥3。
第二节乙肝“两对半”检测一、乙肝“两对半”的简介当生化检查肝功能指标异常，怀疑为乙肝病毒感染时，可以进行乙肝“两对半”的检查。
乙肝“两对半”包括：乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（HBeAb）以及乙肝核心抗体（HBcAb），因为乙肝核心抗原没有检验，所以叫做乙肝“两对半”。
乙肝表面抗原（HBsAg）：乙肝表面抗原又称为“澳抗”，是“澳大利亚抗原”的简称，因为最早发现于澳大利亚，故以此命名。
它是患者血清中首先出现的血清标志物，可用于乙肝的早期诊断。
乙肝表面抗体（HBsAb）:乙肝表面抗体是一种保护性抗体，表明人体对乙肝病毒具有抵抗能力，是人体感染或者接种乙肝疫苗的标志。
该指标阳性提示乙肝病毒感染后的恢复期。
艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术
艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术岳阳市疾控中心白志永艾滋病抗体检测及样品保存、运送一、HIV抗体检测筛查方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验快速检测（RT）（建议配备合格的快速检测试剂，灰区。
）二、筛查程序初筛和复检流程（图1）图1 HIV抗体筛查检测流程三、筛查试验结果的报告（建议用修改后报告单附表3）（例）HIV抗体筛查试验用附表1、2进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。
四、 HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程1、适用范围HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现H IV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。
2、检测程序图4 艾滋病感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程五、样品的保存、运送1、样品的保存用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2～8℃，一周以上应存放于-20℃以下。
2、样品的运送（例）（1）应符合生物安全要求；(2)应采用三层容器对样品进行包装。
第一层容器：直接装样品，应防渗漏。
样品应置于带盖的试管内。
在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。
第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。
要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。
第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。
外面要贴上醒目的标签、联系方式，还应易于消毒。
(3) 用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。
质量控制一、艾滋病抗体检测的统计学室内质量控制1、试剂盒内部对照即试剂盒提供的阳性和阴性对照血清。
用于判断实验的有效性，不能作为室内质控品使用，内部对照结果无效，必须重新试验。
2、室内质控品为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。
也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2～3倍为宜。
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调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于 HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳” 的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否
处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV
DNA来决定。
HBV DNA检测的临床意义
HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？
●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。
PCR 反应过程
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs
Taq 酶
反应组分
变
性
3’
5’
5’
3’
退
火
3’
Taq Taq
3’
5’
延 重
伸 复
3’
3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’
5’
循环2 4个拷贝
3’
3’
3’ 3’ 3’ 3’
3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’
HBsAg(－) HBV-DNA(＋) HBeAg 也可能出现HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。
5.HBeAg阳性标本HBV DNA检出率90％左右
HBeAg与HBV DNA有着良好的相关性
乙肝病毒的感染
免疫耐受期 免疫清除期 非活动或低（ 非）复制期 再活动期
●PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对 结合。 ●病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。
乙肝的治疗 目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的 药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。 目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗 病毒药物主要有两大类： 干扰素：重组人α -1b干扰素、α - 2a、
5’
循环3 8个拷贝
3’ 3’
3’
3’
荧光定量PCR原理
插入染料法 SYBR Green I 杂交探针法(最常用) TaqMan
TaqMan探针
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs Taq酶
R
反应体系
Q
Probe
Taq
l
R
Q
变
性
Q
5’
R
3’
退 火
R Q
5’
Taq
3’
1. 链取代
R Q
（TaqDNA聚合酶）的作用，经过高温变性、低 温退火、适温延伸三个步骤在3个小时内反复循
环25-30次，把特定的DNA片段扩增1000万倍。
* 每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列
的DNA模板、引物、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖 核酸三磷酸（dNTP）
荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入 ，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过 对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始模版 进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的核 酸测定中最灵敏的方法。
HBeAg阴性 慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化
临床诊断
乙肝病毒的感染
慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标
鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断 研究进展 2009
HBV-DNA与临床
HBV DNA检测的临床意义
HBV DNA是HBV存在最直接的依据
HBV DNA是HBV复制的标志 HBV DNA是患者具有传染性的标志 HBV DNA对乙肝两对半起补充作用 HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标
HBV DNA ALT
HBV DNA贯穿感染者的终生，是评价病毒复制的金标准
正常 无明显异常, 或 轻度炎症纤维化
慢性HBV携带者
肝组织学
增高或者波动 中度或严重炎症、纤 维化快速进展
HBeAg阳性慢性乙型肝 炎 乙型肝炎肝硬化
正常 无炎症或仅有轻 度炎症
非活动性 HBsAg携带者
增高或者波动 中度或严重炎 症、肝纤维化
5’
Taq
R
5’ 3’
2. 水
解
Taq
5’
5’ 3’
3. 聚
合
l Taq
5’
R
5’ 3’
4. 检测荧 光
乙肝病毒的感染
*
乙肝病毒的感染 （一） 乙型肝炎病毒结构及特点
HBsAg：是HBV感染的主要标志 HBsAb：保护性抗体 HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，
一般不存在于血循环中
HBcAb: 非保护性抗体，HBcAb-IgM
α -2b干扰素等。
核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。
乙肝的治疗
主要包括
、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等
对于HBV
DNA≥105的患者应进行抗病毒治疗
HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎
HBV DNA检测的临床意义 提供直接证据缩短“窗口期”
PCR检测 HBV HCV HIV “窗口期” 56 70 22 核酸检测缩短的“窗口期”的天数 6-15 41-60 10-15
有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断
HBV DNA检测的临床意义
袁立云
LOREM IPSUM DOLOR
1、荧光定量PCR技术
2、乙肝病毒的感染
3、HBV-DNA与临床
荧光定量PCR技术
荧光定量PCR技术
* Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶链式
反应，是一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通
过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热酶
提示HBV处于复制状态
HBeAg：HBV复制及强感染性的指标 HBeAb：有一定的保护作用，预后良好
乙肝病毒的感染
（二） HBV-DNA与“两对半” 1. “两对半” ：机体的免疫反应状态；
FQ-PCR：检测的是HBV本身的遗传物质—DNA，是 病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。
2. “携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学 指标不能 反应体内病毒复制水平与感染程度。 3. 血清学指标(－)不能排除HBV感染。