乙肝病毒DNA检测Microsoft Word 文档
乙肝dna定量检测质控行标
乙肝dna定量检测质控行标
乙肝DNA定量检测的质控行标是指用于确保检测结果准确可靠的内部参照物或校正因子。
常用的乙肝DNA定量检测质控行标有以下几种：
1. 标准曲线法：通过制备一系列已知浓度的乙肝DNA 标准品，构建标准曲线。
然后将待测样品的乙肝DNA浓度与标准曲线进行比对，从而确定其浓度。
2. 外源引物法：引入一个外源的DNA序列作为内部参照，与待测样品中的乙肝DNA一起扩增。
通过比较外源引物的扩增效率和乙肝DNA的扩增效率，计算出乙肝DNA的浓度。
3. 内部控制法：在PCR反应中加入一个内部控制（IC），它与待测样品一起扩增。
这个内部控制可以是一个稳定且数量已知的基因或DNA序列。
通过比较内部控制的扩增效果和乙肝DNA的扩增效果，计算出乙肝DNA的浓度。
以上方法都需要在实验过程中采用合适的技术和试剂来进行准确测量，并且需要严格控制实验条件和标准操作流程，以确保可靠的定量结果。
具体的质控行标选择应根据实
验室设备和试剂的可用性以及实验要求来确定。
HBV DNA提取方法
HBV DNA提取方法：
1、取病毒DNA OUT 300ul，加入血清标本100ul。
2、涡旋震动30″，室温静置10分钟，再涡旋震动30″。
3、15000g离心10″（目的是将管内盖上的液体离下，防止开盖
时污染），双手开盖（严格控制手指接触EP管内壁及液体），加入异丙醇350ul（要求每个标本换一个枪头），盖盖后涡旋震动30″。
4、15000g离心15分钟。
5、取出后双手开盖（严格控制手指接触EP管内壁及液体），轻
柔吸出液体，15000g离心1分钟，用200ul小抢，从EP管内壁将液体充分吸尽。
6、加入70％乙醇500ul，15000g离心5分钟。
7、取出后双手开盖（严格控制手指接触EP管内壁及液体），轻
柔吸出液体，15000g离心1分钟，用200ul小抢，从EP管内壁将液体充分吸尽。
8、开盖室温放置8分钟，晾干至肉眼可见管壁上有少量白色物。
9、加入80ulTris,充分吹匀溶解DN A。
乙肝dna定量内标法参考标准
乙肝dna定量内标法参考标准乙肝是由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的肝脏疾病，它被认为是一种具有较高传染性和危害性的疾病。
乙肝病毒DNA定量内标法是一种用于检测乙肝病毒DNA含量的标准方法，具有较高的灵敏度和准确性。
在临床诊断和治疗中，乙肝DNA定量内标法参考标准对于确诊乙肝病毒感染、评估疾病进展和指导治疗具有重要意义。
一、乙肝病毒DNA定量内标法原理乙肝病毒DNA定量内标法是基于PCR（聚合酶链式反应）技术的一种检测方法。
其原理是利用引物特异性结合乙肝病毒DNA，在PCR反应中扩增目标序列，通过内标物（一种已知数量的DNA片段）作为参照物，可以精确测定样本中乙肝病毒DNA的含量。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，可以准确检测乙肝病毒DNA在血液中的含量，为临床诊断提供可靠依据。
二、乙肝病毒DNA定量内标法参考标准1.中国肝炎防治方案根据中国肝炎防治方案，乙肝病毒DNA定量内标法的参考标准包括标本采集、检测方法、结果解读和临床意义等方面的要求。
例如，标本采集应选择抗凝血样本，采血后应及时离心提取血清，并在4℃条件下保存。
检测方法应选择经过认证的PCR仪器和试剂盒，遵循严格的实验操作规范。
结果解读应根据实验条件和内标物的测定值，进行准确的样本定量，并结合临床表现进行诊断和治疗。
2.国际标准化组织ISO15189ISO15189是国际标准化组织制定的临床检验实验室认证标准，对乙肝病毒DNA定量内标法的参考标准进行了详细规定。
包括实验室管理、质量控制、标本采集和处理、检测方法验证和结果报告等方面的要求。
ISO15189认证可以提高实验室的技术水平和管理能力，确保乙肝病毒DNA定量内标法检测结果的准确性和可靠性。
三、乙肝病毒DNA定量内标法在临床应用中的意义1.确诊乙肝病毒感染乙肝病毒DNA定量内标法可以检测血液中的乙肝病毒DNA含量，帮助医生明确诊断患者是否感染乙肝病毒。
对于乙肝病毒携带者和慢性乙肝患者，定量内标法可以发现病毒复制水平的变化，评估疾病活动性和预后。
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。
2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。
3.职责3.1操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。
3.2专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。
3.3实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。
4.原理采用荧光PCR技术，以HBV基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值（CT）实现对未知样品的检测。
另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。
5.样品要求5.1适用样品类型：血清或血浆。
5.2样品采集：5.2.1血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2:^，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA （乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml 灭菌离心管。
5.3样品保存和运送使用专用样品0c冰壶送检，温度约维持在4℃左右。
分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。
5.4拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。
6.仪器和试剂6.1仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。
hbv-dna检测基本原理和流程
hbv-dna检测基本原理和流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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乙肝病毒cccDNA检测
1.选择性PCR
选择性PCR：rcDNA不被扩增
选择性PCR：cccDNA能被扩增
“选择性”PCR：并非万无一失
PCR产物自身退火（self annealing）
rcDNA被大量扩增，阳性结果不可靠，定量结果也不可靠
Hepatology Research 2003;15: 234-243（PBMC）
解决方案
特异性抽提分离cccDNA与其它形式的病毒DNA 采用沉淀法或质粒抽提试剂盒抽提法 酶切纯化cccDNA 采用绿豆核酸酶或ATP依赖的plasmid-safe DNA酶
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
选择性PCR(普通PCR、套式PCR、荧光PCR) 侵入者探针法（Invader assaay）
P2
cccDNA能被扩增 检测到荧光信号
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
实时荧光定量PCR的原理
实时荧光定量PCR的原理
实时荧光定量PCR的原理
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
结果 ： 标准曲线方程YCtcopy 相关指数： R2=0.995 灵敏度至少可以达到103copy/ml
与定性法比较增加了一个荧光探针，探针位于扩增片段区（负链缺口下游），与cccDNA的负链互补。
01
选择性实时荧光定量PCR检测cccDNA
02
rcDNA不能被扩增 无荧光信号
EcoR I
5‘
+
P1
P2
3200(1)
5‘
3‘
1590
3‘
1820
P1
1820
1590
+
3200（1）
EcoR I
World J Gastroenterol 2004;10(1):82-85(血清)
乙肝抗病毒正常报告单
乙肝抗病毒正常报告单尊敬的患者：根据您提供的乙肝抗病毒正常报告单，我了解到您的检查结果显示您的乙型肝炎病毒DNA定量、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）指标都在正常范围内。
以下是详细解读和相关建议：1. 乙型肝炎病毒（HBV）DNA定量：根据您提供的报告，乙肝病毒DNA检测结果为阴性或低于检测限。
这意味着在您体内，乙肝病毒的DNA含量非常低，也可能无法检测出来。
这是一个非常好的结果，表明您的乙型肝炎病毒活动性很低或没有活动性。
2. 丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）：根据您的报告，您的ALT和AST指标都在正常范围内。
这是一种血液中的酶类物质，其浓度可以反映肝脏的健康状况。
如果这些酶的浓度超过正常范围，可能表示肝脏遭受损害或者炎症。
您的正常指标表明您的肝脏功能正常，没有发现明显的异常。
根据您提供的乙肝抗病毒正常报告单，您的乙肝病毒指标均在正常范围内，这是一个非常好的结果。
这意味着您的乙肝病毒活动性较低，您的肝脏功能正常，肝细胞没有受到明显的损伤。
这也意味着您的乙肝病毒传播风险较低。
虽然目前没有发现明显的活动性乙肝病毒，但根据相关专业建议，我们仍然建议您定期进行肝功能、肝病毒指标和血清HBsAg 检测以监测您的乙肝病毒感染状况。
此外，建议您注意以下几点：1. 接种乙肝疫苗：如果您尚未接种过乙肝疫苗，我们建议您尽快接种。
乙肝疫苗是预防乙型肝炎的最有效方法之一，可以减少病毒感染的风险。
2. 饮食和生活方式：保持良好的饮食习惯和生活方式对乙肝病毒携带者来说非常重要。
建议您避免高脂肪、高糖分和高盐分的食物，多摄入蔬菜、水果和富含纤维的食物。
此外，避免饮酒或限制饮酒量，避免接触乙肝病毒的传播途径，如注射毒品的共用器具和不安全的性行为。
3. 定期复查：建议您每6个月到1年定期进行一次肝功能和肝病毒指标检查，以监测乙肝病毒感染状况。
请注意，这只是基于您提供的报告的一个初步解读，建议您咨询专业医生进行详细的诊断和咨询。
乙肝实验室报告单模板
乙肝实验室报告单模板报告编号：GBR20190228患者姓名：XXX 性别：女年龄：36岁检测日期：2019年02月28日检测项目------------------------------------------------------------------------------ HBsAg | 阳性 (+)HBeAg | 阳性 (+)Anti-HBc IgM | 阴性 (-)Anti-HBc IgG | 阳性 (+)Anti-HBs | 阴性 (-)HBV-DNA | 1020 IU/mLALT (谷丙转氨酶) | 42 U/L检测结果说明：------------------------------------------------------------------------------根据实验室检测结果，患者的HBsAg、HBeAg和Anti-HBcIgG都呈阳性反应。
Anti-HBc IgM和Anti-HBs均呈阴性反应。
HBV-DNA含量为1020 IU/mL，ALT水平为42 U/L。
HBsAg阳性反应表明患者目前正在患有乙肝病毒感染。
HBeAg阳性反应表明患者的病毒具有高度传染性。
Anti-HBc IgG阳性反应表明患者曾经感染过乙肝病毒，并且对其产生了免疫反应。
然而，Anti-HBc IgM阴性反应表明患者没有处于活动状态的乙肝病毒感染。
Anti-HBs阴性反应表明患者目前没有对乙肝病毒的免疫保护。
HBV-DNA含量为1020 IU/mL，表示患者体内病毒复制活跃。
ALT水平为42 U/L，超过正常范围，表明肝脏受到了一定程度的损害。
根据检测结果，患者需要进一步接受专业医生的诊断和治疗。
请在医生的指导下继续进行后续治疗并注意个人卫生及传染性控制，以降低病毒传播的风险。
------------------------------------------------------------------------------ 注：本报告仅供医学参考，具体诊断请咨询专业医生。
病毒性肝炎MicrosoftWord文档
病毒性肝炎一、各型肝炎病毒特点甲型肝炎病毒（HAV）RNA病毒只有一个血清型和1个抗原抗体系统IgM出现早，有现症感染意义。
IgG抗体，存在多年，有保护力。
乙型肝炎病毒（HBV）DNA病毒亦称Dane颗粒有3个抗原抗体系统续表丙型肝炎病毒（HCV）RNA病毒抗HCV为非保护性抗体，而是感染指标丁型肝炎病毒（HDV）RNA病毒是一种缺陷病毒，必须借助HBsAg包裹才能成为感染性病毒颗粒戊型肝炎病毒（HEV）RNA病毒儿童及年青人多隐性感染，老年人多发病。
HBV 3个抗原抗体系统：【例题】对人体有保护作用的抗体是（）A.抗-HBsB.抗-HBeC.抗-HBc-IgMD.抗-HBc-IgGE.抗-HBV-DNA[答疑编号700611020101：针对该题提问]【正确答案】A【答案解析】只有表面抗体具有保护性。
二、各型肝炎传播途径甲型肝炎粪-口乙型肝炎母婴传播血液、体液传播，经破损皮肤和粘膜进入机体丙型肝炎输血及血制品戊型肝炎粪-口【例题】近年来输血后肝炎主要由哪种病毒引起（）A.甲型肝炎病毒B.乙型肝炎病毒C.丙型肝炎病毒D.戊型肝炎病毒E.丁型肝炎病毒[答疑编号700611020102：针对该题提问]【正确答案】C【答案解析】甲、戊型经粪口传播，乙型经母婴、血液及体液传播，丙型主要经输血传播。
三、急性肝炎的诊断：1.发热、乏力、食欲减退、恶心等症状；急性黄疸型尿黄加深，皮肤巩膜黄染。
2.可有肝脾大。
3.血清ALT、胆红素升高，诊为急性黄疸型肝炎；胆红素不高诊为急性无黄疸型肝炎。
注意：急性黄疸型肝炎分期：黄疸前期、黄疸期、恢复期。
黄疸前期传染性最强。
【例题】急性黄疸型肝炎黄疸前期最突出的症状是（）A.呼吸道症状B.消化道症状C.神经系统症状D.精神症状E.皮肤瘙痒症状[答疑编号700611020201：针对该题提问]【正确答案】B【答案解析】急性黄疸型肝炎出黄疸前主要表现为食欲减退、腹胀、恶心、呕吐等症状。
(完整word)分子生物学检验完整版
1病原生物基因组在医学上有何应用？详见书P3a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查2什么是原癌基因，原癌基因有什么特性,原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些？原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒）固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称.特性：进化上高度保守，负责调控正常细胞生命活动，可以转化为癌基因。
功能分类：生长因子，生长因子受体,信号转导蛋白，核调节蛋白，细胞周期调节蛋白，抑制凋亡蛋白激活机制：插入激活,基因重排，基因点突变，基因扩增,基因转录改变3试述Down综合征（21三体综合征)的主要临床特征及核型。
临床特征：生长发育障碍，智力低.呆滞面容，又称伸舌样痴呆。
40%患者有先天性心脏畸形。
肌张力低，50％患者有贯通手,男患者无生育能力，女患者少数有生育能力，遗传风险高。
核型：92。
5%患者游离型：核型为47，XX(XY)，+212.5％患者为嵌合型:46，XX(XY)/47，XX（XY），+215%患者为易位型：46，XX（XY),-14,+t(14q21q)4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点，对比分析分子生物学方法的优势1直接涂片染镜检：敏感度和特异性差,不能用于确诊。
2分离培养法:诊断NG感染的金标准，但是其对标本和培养及营养要求高,培养周期长,出报告慢，难以满足临床要求。
3免疫学法：分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制，推广受限.分子生物学的优点:敏感，特异，可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌，适应于快速检测5、在单基因遗传病的分子生物学检验中，点突变检测常用方法有哪些?1异源双链分析法（HA)2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA 芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸（DNA RNA）的检测、基因分型和耐药基因分析等。
传染病 Microsoft Office Word 97-2003 文档
【致病菌】1.肝炎：肝炎病毒。
甲乙丙丁戊。
甲：微小RNA；乙：DNA；丙：黄病毒；丁：缺陷病毒；戊：杯状。
（乙肝是DNA病毒，其他是RNA 病毒。
）甲戊无慢性。
2.出血热：汉坦病毒。
共13型。
我国：1型汉坦病毒（野鼠型），2型汉城病毒（家鼠型）。
传染源：鼠类，黑线姬鼠。
3.艾滋病：艾滋病病毒。
2型，1和2型。
2型主要在西非。
单链RNA 病毒，逆转录病毒科，慢病毒亚科。
（单链逆转录，单干性怪癖；慢病毒科，病程长慢折磨）4.非典：冠状病毒。
冠状病毒科。
有包膜的RNA病毒。
（冠状有包膜，邪恶又坚固）5.流脑：脑膜炎球菌。
奈瑟菌属，革兰阴性双球菌。
13个群。
我国流行A群。
6.伤寒：伤寒杆菌。
D群沙门菌，革兰染色阴性。
有鞭毛。
7.菌痢：痢疾杆菌。
肠杆菌科的志贺菌属。
革兰染色阴性。
有菌毛。
4群（A志贺、B福氏、C鲍氏、D宋内。
），国内B群，发达国家D 群。
产生内外两种毒素。
A志贺群外毒素力强，临床最重。
8.霍乱：霍乱弧菌。
弧菌科弧菌属，短小弓形杆菌，喜碱性。
分3群：O1群，非O1群，不典型O1群。
（O1：古典生物型、埃尔托生物型；非O1型：O2-O138、O139；不典型O1：没有致病性）记忆：分型：（1点寒，2爱3乱，4利5肝，13脑热）分类：4病毒4细菌。
【传播途径】1.肝炎：甲：粪口；乙：体液、母婴、皮肤黏膜破损处；丙：输血；丁：叮住乙肝；戊：粪口。
2.出血热：1.呼吸道2.消化道3.接触4.母婴5.虫媒（母婴呼吸接触虫媒进消化）3.艾滋病：1.性接触2.血液或血液制品3.母婴4.其他4.非典：1.呼吸道2.消化道5.流脑：呼吸道6.伤寒：粪—口7.菌痢：消化道8.霍乱：经口感染。
【病理特点和主要病变部位】1.肝炎：病变部位主要在肝，影响到胆。
急肝：肝细胞变性坏死，气球样变。
慢性：炎症和纤维化（炎症：从PN到BN变化；纤维化：纤维化由小到大最后硬化）。
淤胆型：肝内淤胆（胆管有胆栓形成，肝细胞内有胆色素淤滞）2.出血热：3个基本病理改变是：小血管内皮细胞肿胀、变性、坏死，管腔内微血栓形成，周围组织水肿和出血。
(完整word)临床分子生物学检验
绪论1.20世纪50年代，Waston和Crick提出了DNA双螺旋结构,标志着现代分子生物学的兴起。
2.从广义上来讲，应用到临床的分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物,目前，临床分子生物学检验的靶标主要以核酸(DNA或RNA）为主.第一章:核酸与分子标志物1.分子标志物：可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子,是生物标志物的一种类型。
核酸分子标志物是分子生物学检验的主要内容，包括基因突变、DNA多态性、基因组DNA片段、RNA和循环核酸等多种形式。
2.DNA的组成：是一种高分子化合物，其基本单位是脱氧核苷酸,每个核苷酸由磷酸、脱氧核糖和含氮碱基3部分组成。
3。
DNA与RNA的区别：2位脱氢。
4。
DNA的结构：①DNA一级结构：各种核苷酸单体沿多核苷酸链排列的顺序，表明该DNA分子的化学构成。
②DNA二级结构：双螺旋结构，DNA双螺旋的直径为2nm,一圈螺旋含10个碱基对,每一圈螺距为3.4nm，每个碱基的旋转角度为36度.维持DNA结构稳定的力量主要是碱基对之间的堆积力，碱基对之间的氢键也起着重要的作用.③DNA三级结构：DNA双螺旋进一步盘曲形成的更加复杂的结构。
5.核小体的形成(真核生物染色体包装过程)：在核小体中,DNA盘绕组蛋白八聚体核心,使DNA缩短为原来的1/7；6个核小体形成螺丝管，缩短为1/6；核小体彼此相连成串珠状染色质细丝，螺旋化形成染色质纤维，进一步折叠成染色单体.6.DNA双螺旋结构的变异：右手螺旋A—DNA、C-DNA、D-DNA、E—DNA、H—DNA、L—DNA、P-DNA，左手螺旋Z —DNA7.RNA主要分为三类：tRNA、rRNA、mRNA 还有一些小型RNA：反义RNA、微小RNA（microRNA，miRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA。
)8.真核mRNA与原核mRNA的区别(简答题)原核mRNA结构简单，为多顺反子,编码序列之间有间隔序列，原核生物mRNA中没有修饰碱基。
HBV-DNA检测标准操作程序
2.3 吸取已编号的待测血清或血浆样本、试剂盒中的阴性对照、强阳性对照、临界阳性对照及定量标准品（1→）各200μl,分别加入到1.5ml离心管中，在离心管上编好号，振荡混匀。
2.4 56℃温浴15-2Omin,期间颠倒混匀数次。
2.5 加入200Ul无水乙醇，充分混匀，将全部液体转入装有2ml收集管的硅胶柱中，IoOoorPm离心Imin,倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
2.6 在硅胶柱中加入500Ul溶液Wl（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），1000OrPm离心Imin,倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
2.7 在硅胶柱中加入500Ul溶液W2（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），1000OrPm离心Imin,倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
2.8 在硅胶柱中加入500Ul溶液W2（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇）,IoOOOrPm离心Imin,倒掉收集管中的废液。
2.9 将硅胶柱放入收集管中，1200OrPm空管离心3min,丢弃收集管。
2.10 将硅胶柱放入新的1.5ml离心管中，开盖静置L2min,往硅胶柱中心加入80Ul 的TE洗脱液，静置2-5min,1200OrPm离心2min,丢弃硅胶柱，盖好离心管盖，做好相对应的编号。
（注意：TE洗脱液的体积应不少于50ul,体积过小影响回收率。
为增加基因组DNA的回收率，可将TE洗脱液稍微加热。
获得的DNA应保存在-20°C,以防DNA降解。
）3 .加样（在样本处理区进行）3.1 向设定的n个PCR反应管中分别加入步骤1处理好的样品DNA、强阳性对照、临界阳性对照、阴性对照以及定量标准品（4个）各20μ∣,盖紧管盖，稍做离心。
3.2 将PCR反应管转移到检测区，放入相应的荧光PCR检测仪内，记录样品摆放顺序。
4 .PCR扩增（检测区）4.1 循环条件设置使用ABI7500和Line-Gene9660荧光PCR检测仪时循环程序设置如下：1150℃2min无2195℃9min无34595℃15sec无58℃50sec单次采集荧光4138℃10sec无■阴性对照无定量值出现，且内标Ct值W40；■强阳性对照检测值范围(3.16X105-3.16X106),临界阳性对照检测值范围(3.16×101-3.16×102),且内标Ct值W40。
乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测标准操作规程
乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的: 规范乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围: HBV DNA 荧光定量检测。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。
5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。
5.2 实验原理：用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测乙型肝炎病毒DNA。
5.3 性能参数：5.3.1 精密度：检测下限为5.0x102IU/ml。
5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108IU/ml。
5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集5.4.1 标本类型：血清。
5.4.2 标本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。
5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。
5.4.5 标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。
5.5 设备和试剂：5.5.1 设备： DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯、冷冻离心机。
乙肝DNA测定结果如何解读
乙肝DNA测定结果如何解读乙肝DNA测定结果的解读：乙肝DNA测定是一项用来检测乙型肝炎病毒是否存在于体内的重要检测手段。
其结果可分为阳性和阴性两种，具体解读如下：1、乙肝DNA测定结果为阴性：表示体内没有乙型肝炎病毒或病毒数量很少。
此时，患者有可能已经从疾病中恢复或处于病毒携带者状态。
2、乙肝DNA测定结果为阳性：表示体内存在乙型肝炎病毒。
阳性结果的大小表示病毒载量的多少，数字越大，病毒载量越高。
数字越小，病毒载量越低。
当病毒载量高时，就需要进行相应的治疗。
乙肝DNA测定的治疗方法：目前，治疗乙肝感染的方法主要是药物治疗以及疫苗预防。
药物治疗依靠抗病毒药物来抑制病毒复制，达到稳定病情、控制病毒、防止病情恶化等效果。
常用的抗病毒药物有：拉米夫定、爱地华、恩替卡韦等。
疫苗预防是针对乙型肝炎病毒产生抗体，从而达到预防感染的目的。
乙肝DNA测定的注意事项：1、准确性：乙肝DNA测定的结果应该由专业医生来解读，因为误判会对治疗方案产生影响。
2、重要性：乙肝DNA测定是乙肝治疗的一个关键指标，检测结果直接关系到患者治疗的方向和疗效。
3、检测周期：乙肝DNA测定结果不是一次就能确定的，需要定期测定。
一般来说，至少每半年进行一次测定，以保证治疗的有效性和及时处理病情。
4、治疗方案：乙肝治疗除了要考虑病毒载量外，还需要注意患者的肝功能情况、乙肝病期、合并症等因素，因为不同的患者情况需要的治疗方案是不同的。
5、生活习惯：患者在治疗期间应该注意生活习惯，比如不要喝酒，不要吃刺激性食物，同时保持充足的休息，加强身体锻炼，避免感染其他疾病。
为什么肝炎会引起脾肿大肝炎是指肝脏组织发生炎症的一种疾病。
脾肿大是肝炎患者常见的一种症状。
本文将介绍肝炎引起脾肿大的原因、治疗方法以及注意事项。
一、肝炎引起脾肿大的原因肝炎引起脾肿大的原因是由于病毒感染肝脏后，肝脏组织细胞受到破坏，肝脏的功能受到影响，不能顺利完成代谢和排毒的功能。
为了调节体内代谢和排毒功能，脾脏需要承担一部分肝脏的功能，从而导致了脾肿大的症状出现。
乙肝hbv-dna病毒数量标准[001]
![乙肝hbv-dna病毒数量标准[001]](https://img.taocdn.com/s3/m/043d1d83c67da26925c52cc58bd63186bdeb9266.png)
乙肝hbv-dna病毒数量标准乙肝(HBV)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的一种肝炎疾病。
HBV-DNA是HBV病毒所含的一种核酸，HBV-DNA病毒数量标准是可以评估乙肝患者病情严重程度的指标之一。
本篇文章将重点阐述乙肝HBV-DNA病毒数量标准、治疗方法以及注意事项。
一、乙肝HBV-DNA病毒数量标准HBV-DNA病毒数量可以通过PCR扩增技术测定，计量单位为“国际单位/ml”(IU/ml)，也可以用“拷贝数/ml”(cp/ml)表示。
目前，国内外对于HBV-DNA病毒数量的划分标准不尽相同。
根据中国抗病毒治疗指南2019年版，“HBV-DNA<500IU/ml”被认为是阴性，”HBV-DNA≥500IU/ml“被认为是阳性。
根据美国国立卫生研究院(NIH)建议标准，“HBV-DNA≥2000IU/ml”属于阳性。
HBV病毒的复制速度与其病毒数量呈正比关系。
一般来说，患者血清中HBV-DNA病毒数量越高，说明患者的乙肝病情越严重，肝细胞受损的程度也就越明显。
因此，通过测定HBV-DNA病毒数量的高低，可以评估乙肝的病程严重程度，以指导下一步的治疗方案。
二、乙肝HBV-DNA阳性的治疗方法1. 治疗目标乙肝的治疗旨在抑制HBV病毒复制，降低肝炎的病情恶化，减少肝损伤，同时通过肝功能的改善，提高患者的生活质量，降低肝癌的发生率。
2. 抗病毒治疗目前临床应用的抗病毒药物有拉米夫定、恩替卡韦、阿德福韦等，这些药物都可以有效地抑制HBV病毒的复制。
因此，高病毒载量的乙肝患者，可以选用抗病毒药物进行治疗，以取得抑制病毒复制的效果。
拉米夫定: 口服适用，不良反应小，临床应用最广泛，能有效控制HBV病毒复制，是治疗乙肝的一线药物。
恩替卡韦: 口服适用，单次日剂量可减轻。
一般耐药率较低。
适用于HBV 基因突变的患者以及对拉米夫定耐药的患者。
阿德福韦: 是治疗慢性乙肝的一线药物，纯量形式为口服胶囊，也可以采用注射方式应用。
乙肝病毒DNA检测Microsoft Word 文档
乙肝病毒DNA检测乙肝病毒DNA指的是脱氧核糖核酸，病毒的复制是靠DNA的复制来完成的，DNA的浓度越高，病毒的复制越活跃。
合起来，HBV-DNA指的就是乙肝病毒的脱氧核糖核酸。
乙肝病毒DNA检测是判断乙肝病毒复制的常用手段。
一般的，把数值大于10的3次方为阳性，把3-5次方认为是低量复制，5-7为中等量，大于7次方为大量。
乙肝两对半并不能准确的判断病毒复制情况，DNA弥补了这个的不足。
不过由于DNA检测技术要求严格，容易受到干扰，因此，一次结果不足以说明问题，遇到阳性，可以换医院再次检查。
目录1DNA检测2作用3临床意义4复制过程▪第一步：黏附▪第二步:脱壳▪第三步：入核▪第四步：转录▪第五步：翻译▪第六步：逆转录▪第七步：组装5频率6注意事项7检测方法8检测报告9检测费用10检测要空腹吗11乙肝病毒DNA检测的作用1DNA检测以往乙肝患者抗病毒治疗的指征是：乙肝病毒e抗原阳性（大三阳）患者HBVDNA数值要求达到10的5次方拷贝/毫升（20000U/ml），乙肝病毒e抗原阴性（小三阳）患者乙肝病毒DNA数值要求达到10的4次方拷贝/毫升（2000U/ml），但是10的4次方拷贝/毫升以下也不能认为就没有问题了，最新的国际研究资料表明：和肝脏疾病进展相关的病毒DNA水平域值尚不清楚，即使HBVDNA水平持续低于20000U/ml，也可能乙肝病毒情仍在进一步发展，因此HBVDNA数值应该越低越好，目前国际建议的HBVDNA检测正常值应该是：< 50U/ml 。
2作用目前，乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中使用的越来越普遍，可见乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中占的分量越来越重，这是因为乙肝病毒DNA检测对确诊乙肝和评估乙肝治疗效果具有十分重要的作用。
主要表现在以下七个方面：1、了解乙肝病毒在体内存在的数量。
2、乙肝病毒是否复制。
3、乙肝是否传染，传染性有多强。
4、是否有必要服药。
5、肝功能异常改变是否由病毒引起。
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乙肝病毒DNA检测乙肝病毒DNA指的是脱氧核糖核酸，病毒的复制是靠DNA的复制来完成的，DNA的浓度越高，病毒的复制越活跃。
合起来，HBV-DNA指的就是乙肝病毒的脱氧核糖核酸。
乙肝病毒DNA检测是判断乙肝病毒复制的常用手段。
一般的，把数值大于10的3次方为阳性，把3-5次方认为是低量复制，5-7为中等量，大于7次方为大量。
乙肝两对半并不能准确的判断病毒复制情况，DNA弥补了这个的不足。
不过由于DNA检测技术要求严格，容易受到干扰，因此，一次结果不足以说明问题，遇到阳性，可以换医院再次检查。
目录1DNA检测2作用3临床意义4复制过程▪第一步：黏附▪第二步:脱壳▪第三步：入核▪第四步：转录▪第五步：翻译▪第六步：逆转录▪第七步：组装5频率6注意事项7检测方法8检测报告9检测费用10检测要空腹吗11乙肝病毒DNA检测的作用1DNA检测以往乙肝患者抗病毒治疗的指征是：乙肝病毒e抗原阳性（大三阳）患者HBVDNA数值要求达到10的5次方拷贝/毫升（20000U/ml），乙肝病毒e抗原阴性（小三阳）患者乙肝病毒DNA数值要求达到10的4次方拷贝/毫升（2000U/ml），但是10的4次方拷贝/毫升以下也不能认为就没有问题了，最新的国际研究资料表明：和肝脏疾病进展相关的病毒DNA水平域值尚不清楚，即使HBVDNA水平持续低于20000U/ml，也可能乙肝病毒情仍在进一步发展，因此HBVDNA数值应该越低越好，目前国际建议的HBVDNA检测正常值应该是：< 50U/ml 。
2作用目前，乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中使用的越来越普遍，可见乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中占的分量越来越重，这是因为乙肝病毒DNA检测对确诊乙肝和评估乙肝治疗效果具有十分重要的作用。
主要表现在以下七个方面：1、了解乙肝病毒在体内存在的数量。
2、乙肝病毒是否复制。
3、乙肝是否传染，传染性有多强。
4、是否有必要服药。
5、肝功能异常改变是否由病毒引起。
6、判断病人是适合用哪类抗病毒药物。
7、判断药物治疗的疗效。
3临床意义所以说HBV—DNA定量检测指标降低在乙肝治疗中有着非常重要的意义，是乙肝转阴的前奏，也是康复最为关键的一步，只有体内的HBV—DNA定量指标降低，病毒的复制繁殖才会停止，乙肝的彻底治愈才有希望。
乙肝病毒DNA检测的临床意义一、对医生的诊断和用药非常重要。
通过乙肝病毒DNA检测能够判定判断乙肝患者适合用哪类抗病毒药物；乙肝病毒DNA检测对用药的剂量、用药时间、是否需要联合用药以及用药的效果等提供重要的参考依据，也是临床上评价抗病毒或免疫增强药物疗效的最客观的指标。
乙肝病毒DNA检测的临床意义二、能够直接反映乙肝病毒复制状态及传染性的最佳指标，通过乙肝病毒DNA的含量能直接反映病毒在体内存在的数量、是否传染，传染性有多强。
但是需要说明的一点是：乙肝病毒载量的多少并不代表肝脏的损伤程度，也无法判断病情的严重程度。
乙肝病毒DNA检测的临床意义三、反映病毒复制的活跃程度，间接地反映机体的免疫应答水平。
4复制过程不同于一个真正的生物体，病毒并不通过生长和分裂等方式繁殖自身，而是像铸造机器零件一样，按照一定的模具拷贝出来的。
病毒DNA中包含有一些程序，指导病毒的遗传物质和其它一些结构蛋白组分增殖。
另外，病毒DNA中还包含有一些信息，使得单一组分能够在细胞因子的帮助下，自发组装成新的病毒颗粒。
在医学上，病毒的繁殖被称之为“复制”，在复制的过程中，有两个很重要的因素：一个是催化剂，另一个是模板。
没有这两个因素，乙肝病毒就不能复制。
乙肝病毒复制的“催化剂”就是乙肝病毒DNA（即HBV-DNA）聚合酶。
没有这种聚合酶的作用，乙肝病毒的复制就会停止。
乙肝病毒的基因组（HBV-DNA）是由两条螺旋的DNA 链围成的一个环形结构。
其中一条较长负链已经形成完整的环状；另一条长度较短的正链，呈半环状。
在感染肝细胞之后，这条半环状的DNA链就会以负链为模板，在催化剂──HBV-DNA 聚合酶的作用下延长，最终形成完整的环状。
这时的乙肝病毒基因组就形成了一个完全环状的双股DNA。
把这种DNA称做共价闭合环状DNA（即cccDNA），可以把它看作是病毒复制的原始模板。
模板形成后，病毒基因会以其中的一条cccDNA 为模板，利用肝细胞基因中的酶和DNA 聚合酶的“催化”，一段基因又一段基因地复制，形成负链和正链。
最后再装配到一起形成新的HBV-DNA颗粒。
第一步：黏附HBV人侵人体后，依靠其外膜(表面抗原，HBsAg)能粘附在肝细胞膜上，当然，粘附的首要条件是HBsAg先要识别肝细胞膜。
一旦粘附成功，HBv的外膜也就完成了它的使命，甩掉了外膜，HBV钻进肝细胞内。
第二步:脱壳HBV核心部分来到肝细胞内，在肝细胞浆中还要脱掉它的“核壳”(核心抗原即HBcAG及E抗原即HbEAG)，这样，就暴露出了它最核心部分，即乙肝病毒核酸(HBv DNA)，HBV大有“赤膊上阵”之意。
HBV-DNA包涵着乙肝病毒的全部基因，是它主宰着HBv的复制的。
第三步：入核HBv-DNA从肝细胞浆内进入肝细胞核，在这里它要进一步发育完善，形成了HBv的“共价闭合环状脱氧核塘核酸”(HBv cccDNA)。
这个cccDNA十分了得，它深深藏匿在肝细胞核内，而肝细胞核外面有一层坚韧的核膜，目前所有药物都难以通过这坚韧的核膜，因而对cccDNA也无可奈何，但cccDNA却掌控着HBv 所有的遗传信息，指令着HBv的复制。
因此．现有的药物想彻底消灭人体内的HBv真比登天还难，这些药物只能抑制HBv的繁殖或复制，“全部转阴”也只能是一种幻想。
第四步：转录HBV在这一阶段会以cccDNA为“模子”，像录音带似的把HBv cccDNA上的所有信息全都转录到“信息核糖核酸”(mRNA)上。
这个转录过程需要人体内的酶类帮忙，因为所有的病毒都不能自己独立生活．必须有生物的机体帮忙，才能完成这个转录过程。
HBv也是这样。
在人体酶类的帮助下完成它的复制环节。
第五步：翻译在mRNA上已录取了HBv的所有信息，然后就是“翻译”了，其实就是开始制造病毒蛋白。
MRNA通过“翻译”过程，可将HBv的各种蛋白制造出来，如HBv 的外膜蛋白(HBsAg)、核壳蛋白(HBeAg、HBcAg)、HBvDNA多聚酶等；至此，HBv 的外膜有了，HBv的核壳也有了，这些东西只是零件，飘浮游离着的，还有重要的HBv最核心部分没有“制造”山来。
第六步：逆转录啥叫“逆转录””把HBv的遗传信息从DNA转录到RNA上叫做“转录”，是正常的“顺转录”；而将HBv的遗传信息从RNA上再转录到DNA上，就叫做“逆转录”了。
那么，HBv的mRNA上的遗传信息最后就转录成了HBV的DNA，这时，HBv的最核心部分(即HBv DNA)也算制造完成。
第七步：组装从第五步和第六步的复制看来，HBv的所有零件均已制作完毕，到了第七步也就简单了，把这些零件进行组装，装配妥了，HBv的复制也算大功告成了。
HBv就是这样繁殖或复制的。
看起来好像挺复杂，其实HBv复制过程是很快的．一个复制周期不到48小时。
复制出的下一代HBv或侵入另外的健康的肝细胞，或被释放到血液中去，在人们抽血化验时也就被检测到了。
5频率无论是大三阳还是小三阳的病人，发现患有乙肝的时候就建议检测HBV DNA。
一般来说，病人的具体情况可能会不太一样，如果在一个病毒的活动期，乙肝病毒DNA检测可能需要勤一些，一到两个月就应检测一次，如果是在病毒的耐受期，病情相对比较稳定，可以3—6个月检测一次。
在进行抗病毒治疗的过程中，也是需要定期检测HBV DNA。
一般来说至少三个月要检查一次。
6注意事项检查注意事项：1、这个检查与是否进餐没有任何关系,所以如果你只做HBV DNA检查,可以检查前进餐.2 、如果你还要做肝功能检查,建议你在检查前避免进餐,避免熬夜,避免酗酒,避免用药,女性生理期避免做肝功能检查.对于乙肝结果的认识,有这几点注意事项：1、关于单位的换算.最常见的单位是copies/ml,也有重量的单位,比如fg/ml,pg/ml.1 pg = 1000 fg,那么1 pg/ml = 283,000 copies/ml.2、由于PCR的方法虽然精确度高,但是误差相对较大,而且假阳性率也比较高,所以,对于每次乙肝DNA检查的结果,在两个数量级之内的变化,通常会认为没有变化或变化不大.而且DNA也在不断的波动,所以不能以一次或两次的检查结果就简单的判断是否好转,应该综合其它结果以及DNA的变化趋势.3、对于乙肝阴性的标准,我们一般认为是10的3次方,但不能一概而论,应该视化验单上具体给出的参考值而定.阴性最准确的表达方式是,未检测到,化验单表示为<参考值copies/ml,并没有具体的数值.4、DNA复制程度的大小并不代表肝脏实际损害的程度,DNA复制程度高,并非就代表损害严重.7检测方法主要有：荧光定量PCR技术、竞争PCR技术、PCR酶联免疫吸附法、荧光标记引物法和PCR酶联化学发光法。
临床上最先进的乙肝病毒DNA检测方法是实时荧光定量PCR方法，由于此技术要求较高，目前只有少数大型医院有条件使用实时荧光定量PCR方法。
8检测报告1、乙肝病毒DNA检测报告：主要包括定性和定量。
2、定性，即确定是阴性还是阳性。
乙肝病毒DNA的正常值为阴性，即乙肝病毒DNA<1x10的3次方拷贝/ml3、定性测得的阳性通常说明病毒容易传染给他人，阴性说明不容易传给他人。
对于乙肝大三阳来说，由于乙肝病毒e抗原(HBeAg)是阳性，所以乙肝病毒-DNA也是阳性的，表示乙肝病毒-DNA>1 x 10的3次方拷贝/ml ，这时体内的乙肝病毒复制活跃。
4、定量，即检测乙肝病毒在血液中的含量。
定量检测结果主要是对抗病毒治疗提供检测和疗效参考。
由于结果是数字的，而不是“高/低”、“阴/阳”、“正常/不正常”，所以看起来比较麻烦。
确定正常值指标一定要知道所做实验的参考范围。
参考范围因检测仪器、方法、试剂的不同而有差异。
5、“+”：阳性，体内病毒存在复制。
对应于定量方式中HBV-DNA>1x10E3 copies/ml。
6、“－”：阴性，病毒的复制程度低于检测限。
对应于定量方式中HBV-DNA<1x10E3 copies/ml。
7、定量：HBV-DNA定量单位在报告单上通常用“copies/ml”、“拷贝数/ml”或“IV/ml”表示，表示每毫升的血清或血浆中病毒基因组的个数，该数据越大，表明病毒在人体的复制越厉害，例如“HBV-DNA=4.3x10E3 copies/ml”代表每毫升血清中有4.3乘以10的3次方，也即4300个乙肝病毒。