植物组培的条件.
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植物组织培养实验教学中所需要的实验条件
植物组织培养的大致过程是:在无菌条件下,将植物器官或组织(如芽、茎尖、根尖或花药)的一部分切下来,放在适当的人工培养基上进行培养,这些器官或组织就会进行细胞分裂,形成新的组织。不过这种组织没有发生分化,只是一团薄壁细胞,叫做愈伤组织。再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下,愈伤组织便开始分化,产生出植物的各种器官和组织,进而发育成一棵完整的植株。
一、培养条件
1、温度:大多数植物23-32℃,一般25±2 ℃。低于15 ℃或高于35 ℃对植物的生长不利,其中26~27℃最适合。
2、光:包括光照强度、时间长短、光照质量等。组织培养通常在散射光线下进行。光的影响可导致不同的结果。有些植物组织在暗处生长较好,而另一些植物组织在光亮处生长较好,但由愈伤组织分化成器官时,则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。有些次生物质的形成,光是决定三因素。
3、渗透压:渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。通常1~2个大气压可促进植物组织生长,2个大气压以上时,出现生长障碍,6个大气压时植物组织即无法生存。
4、酸碱度:一般植物组织生长的最适宜pH为5~6.5。在培养过程中pH 可发生变化,加进磷酸氢盐或二氢盐,可起稳定作用。
5、湿度条件
培养容器中湿度100%
培养室的湿度一般70 % -80 %的相对湿度。
6、通气:悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。小量悬浮培养时巨常转动或振荡,可起通气和搅拌作用。大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。
二、实验设备
(一)可以分为几个室
1、洗涤室(区)
玻璃器皿和塑料器皿
2、药品室
存放常用的化学试剂、无机盐类、有机物、生长调节剂等
3、制备室
培养基的配制等
4、灭菌室即消毒室,是培养基、玻璃器皿、塑料器皿和其他物品消毒灭菌的地方
5、操作室也称接种室,是开展组织培养研究包括接种、继代、细胞融合等的场所。
要求:干爽安静,清洁明亮,墙壁光滑平整不易积污灰尘,地面平坦无缝便于清洗和灭菌。
6、培养室是将接种到培养瓶等器皿中的植物材料进行培养的场所。
主要设备:空调机、除湿机、换气扇、培养架、灯光等
(二)设备
1、冰箱陈列于制备室中
作用:低温保存材料,存放药品、培养基母液、激素、酶制剂。
2、灭菌锅陈列于灭菌室中
类型:普通医用消毒锅
大的高压灭菌锅
作用:培养基、水和各种器皿的消毒
3、超净工作台陈列于操作室(接种室)中
类型:垂直式和水平式
作用:无菌操作用
4、酸度计陈列于制备室中
作用:测定培养基及酶制剂的pH值
5、天平陈列于制备室中
作用:称取大量元素、微量元素、酶制剂
(三)仪器
1、培养容器
培养用的器皿要求透光度好,能耐高压蒸汽灭菌。根据培养目的和要求不同,可采用不同种类和规格的玻璃容器。
(1)试管
用于茎尖、花药、幼胚培养。一般要求试管口径要大,长度稍短,便于操作,以20mm*150mm、25mm*150mm、0mm*200mm为宜。
(2)三角瓶
是植物组织培养中最常用的培养容器,适于各种培养。接种外植体时多用容积为50毫升的三角瓶,一般实验用100毫升的三角瓶,生产育苗多用150毫升的三角瓶,液体振荡培养用300毫升以上的大三角瓶。优点是瓶口小,瓶底大,培养面积大,受光好,易放置,不易失水,培养效果好。缺点是价格较贵,易破损。
(3)果酱瓶或罐头瓶
用于组培苗的大量繁殖,生产中应用较多的是200~300毫升的果酱瓶或罐头瓶。优点是成本低,瓶口大,操作方便,透光好,空间大,培养材料生长健壮。但培养基容易失水,污染率较高。
(4)培养皿
用于无菌材料分离、无菌发芽、单细胞固体平板培养、胚和花药培养、滤纸灭菌等。常用的规格有60mm、90mm和120mm。
(5)封口材料
为防止培养基干燥和污染杂菌,培养容器瓶口需要一定的封口材料包扎。可用牛皮纸、硫酸纸、耐高温聚丙烯塑料,用线绳或耐高温橡皮筋捆扎,或用塑料瓶盖。
2、玻璃器皿
(1)试剂瓶用于各种试剂、母液的存放,有广口和细口之分,有白色和棕色之分。见光易分解的药品用棕色瓶保存。
(2)烧杯用于配置各种母液和培养基。
(3)量筒配制各种溶液及培养基是测量用。
(4)容量瓶用于配制各种溶液时定容用。
(5)移液管(吸管)用于吸取各种母液和植物生长调节剂,有条件的可用微量可调移液器。
3、接种器械
(1)镊子有直镊和枪镊之分,接种和转移材料常用枪镊,枪镊腰部弯曲,使用省力,枪镊规格有16cm、20cm、23cm、26cm、30cm。
(2)剪刀有直剪和弯剪之分,用于剪取植物材料、茎段,进行继代培养的转接。
(3)解剖刀用于切割植物材料。
(4)其他工具包括接种针、接种铲等,用来接种花药或转移植物组织。
4、其他用品
灼烧工具的酒精灯,各种洗瓶刷,称药用的药勺,试管架,铝锅或不锈钢锅,托盘等