植物组培快繁程序
植物组培快繁程序
（3）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、 细胞、器官，送入培养容器内，轻轻插入培养基。 若是叶片直接附在培养基上，以放1—3块为宜。接 完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时 盖上瓶盖或封口。
注意： 所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，
且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交 叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。
植物组培快繁程序
一、供体植株的培养与取材
一般来说，无论何种类型的细胞组 织培养技术，起始阶段均涉及外植体取 材、灭菌与接种培养等基本过程。
外植体来源的环境以及外植体的类型 ，均会影响将来培养的效果，而灭菌、 接种和培养条件的选择与控制，也与外 植体的来源和类型有关。
植物组培快繁程序
1、外植体的来源
-生长在自然环境下的植物 -有目的地培育在温室控制条件下生长的 植物 -无菌环境下已经过离体培养的植物 自然环境中生长的植株，一般带有微生 物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植 株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在 培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养 效果。
植物组培快繁程序
植自 株然
环 境 生 长
植物组培快繁程序
温室控制条件下生长植株
植物组培快繁程序
已离体培养植株
植物组培快繁程序
在多数情况下，应尽量使用温室或 人工气候室控制培养的植物材料作为 外植体来源，减少培养过程中的微生 物感染概率。同时，生长在控制条件 下的植物可以保持培养材料间的一致 性，提高实验的可重复性，也便于培 养技术的规范。
植物组培快繁程序
⑵注意防病 尤其是真菌和细菌病害 的侵染，取自感病植株的外植体，在 培养中的污染率远远高于来自健康植 株的外植体，必要时需使用化学药剂 防治病害。
植物组织培养快速繁殖技术应用
（4）移栽：在苗床（按照5 cm株距、8 cm行距）或钵中 用竹签打孔，将洗好的小苗插于孔中并将孔覆严，移栽完 毕用喷壶浇一遍水，以保证根系与基质充分接触。
5.苗期管理
（1）保持小苗的水分供需平衡：
在移植后5～7 d内，应给予较高的空气湿度条件，使叶面的 水分蒸发减少，尽量接近培养瓶的条件，让小苗始终保持挺拔的状 态。保持小苗水分供需平衡首先培养基质要浇透水，然后搭设小拱 棚，以减少水分的蒸发，并且初期要常喷雾处理，保持拱棚薄膜上 有水珠出现。
2.试管苗的特点
(1)生长细弱，角质层不发达； (2)叶片气孔数少，活性差； (3)叶绿体光合性能差； (4)根系不发达，吸收功能弱； (5)对逆境的适应性和抵抗能力差。
3.试管苗的驯化
驯化目的：提高试管苗对自然条件的适应性，促其健壮， 最终提高移栽成活率。 驯化原则：从温度、光照、湿度及有无杂菌等环境因素考 虑。驯化开始的数天内，创造与培养环境条件相似的条件； 后期则创造与预计栽培条件相似的条件，逐步适应。 驯化方法：即炼苗，将试管苗从培养间转移至驯化温室， 不开口自然光下放置7～10d，然后打开封口材料继续放置 1～2d。
（２）培养基中去掉细胞分裂素，加入适量的生长素。 （CTK/IAA比值低时有利于生根）
（３）生根培养基的蔗糖用量可适当减少，用1.5%～ 2%的浓度，以减少试管苗对异养条件的依赖。
(4）提高光照强度，促进光合作用。
（七）试管苗驯化与移栽
1.试管苗生存环境与自然环境的差异 2.试管苗的特点 3.试管苗的驯化 4.试管苗的移栽 5床准备：草本植物移栽于苗床（宽度1m，长度根 据温室跨度而定）中，直接在苗床中铺上栽培基质（如蛭 石、珍珠岩、草炭等），浇透水即可。木本植物移栽于塑 料营养钵中，将营养钵排于苗床中，钵中装填基质至距钵 上缘1 cm处，最后也浇透水。
植物组织培养快繁技术—组培苗生根培养
3、植物生长调节剂
对于大多数植物来说，诱导生根需要有适当的生长素，其中最常用的是 NAA和IBA，质量浓度一般为0.1-10mg/L。通常的使用方法是将植物生长调节 剂预先加入到培养基中，然后再接种组培苗诱导生根。
4、培养条件
不同植物对光照和温度的要求不同。光照强度和光照时间对生根影响十 分复杂。
二、影响组培苗生根的因素
1、植物材料 2、培养基 3、植物生长调节剂 4、培养条件
1、植物材料
不同植物、不同基因类型、同一植株不同部位和不同年龄对分化生根都 有影响，一般木本比草本难，成树比幼树难，乔木比灌木难。
2、培养基
一般情况下矿质元素浓度较高时有利于茎、叶生长，浓度较低时有利于 生根，且根多而粗壮，发根也快，加铁盐则更好，因此生根培养可使用1/2MS 或1/3MS培养基；生根培养时通常使用的糖是蔗糖，其浓度一般为1%-3%； 组培苗的生根要求一定的pH值，一般为5.0-6.0。
3、育苗室管理 温度：28℃左右。 湿度：50-60%。 光照：暗培养一周左右，给予1500lux-2000lux光照。
4、注意事项 （1）培养基灭菌彻底。 （2）严守无菌操作规程。 （3）严守生根苗切分及接种要求。
任务三 组培苗生根培养
目录
01 组培苗生根培养的类型 02 影响组培苗生根的因素 03 组培苗生根培养过程
ห้องสมุดไป่ตู้
一、组培苗生根培养的类型
1、瓶内生根 瓶内生根是指将完成壮苗阶段的单苗，转接到生根培养基上，在培养瓶
内生根的方法。 2、瓶外生根
瓶外生根也叫活体生根。瓶外生根是将已完成壮苗培养的小苗，用生根 粉或海藻素处理后栽入疏松透气的基质中，经过合理养护形成根系的方法。
三、组培苗生根的过程
植物快繁最常用的一种方法
植物快繁最常用的一种方法植物快繁是指通过一定的技术手段，使植物迅速繁殖和繁衍后代的过程。
这种方法在园艺、农业以及科学研究中得到了广泛应用，能够在较短的时间内大量繁殖植物，提高生产效率和遗传资源的保存。
下面将介绍植物快繁最常用的一种方法——组织培养技术。
组织培养技术是植物快繁中的一种常见方法，它通过利用植物组织的不同性质和特点，将组织、细胞、细胞器等在无菌条件下进行培养和繁殖，从而实现快速繁衍。
主要包括组织培养、愈伤组织培养和悬浮细胞培养等。
首先是组织培养。
这种方法是指以植物的组织培养为基础，通过无菌条件下的培养和营养物质的供给，将植物的种子、茎、根等组织转化为一个完整的植株。
这种方法不仅能够繁殖大量的植株，还能保持原植株的遗传特征。
常用的组织培养技术包括离体培养、激素处理、代谢工程等。
其次是愈伤组织培养。
这种方法是在组织培养的基础上，通过外界刺激使植物的细胞产生异常增殖和分化的现象，形成大量的愈伤组织。
愈伤组织具有分化、分裂和形成新的器官的潜能，可以大量繁殖植物，并且对生物技术研究有着重要的应用价值。
常用的愈伤组织培养方法包括切口愈伤组织培养、化学诱导愈伤组织培养、激素诱导愈伤组织培养等。
最后是悬浮细胞培养。
这种方法是在液体培养基中，将植物的细胞转化为悬浮细胞，通过转液培养来繁殖植物。
悬浮细胞培养的优点在于可以快速繁殖大量植物细胞，容器利用率高，也能避免污染的产生。
悬浮细胞培养主要应用于药物、抗体和生物多样性保护等领域。
总结一下，植物快繁最常用的一种方法是组织培养技术。
通过组织培养、愈伤组织培养和悬浮细胞培养等多种技术手段，可以在无菌条件下快速繁殖植物，提高生产效率和遗传资源的保存。
这些方法在园艺、农业以及科学研究中具有重要的应用价值，促进了植物的繁殖和研究。
植物组培快繁技术流程
植物组培快繁技术流程
1.组织选择
选择健康、无病虫害的植物材料作为组织培养的起始材料。
根据不同的植物种类和培养目标，选择适当的组织或器官，如叶片、茎段、花蕾、愈伤组织等。
2.消毒处理
将选取的组织或器官进行清洗，去除表面的尘土和污物。
然后将组织放入含有消毒剂的容器中进行表面消毒，消毒剂可以使用70%酒精或0.1%升汞等。
消毒完成后，用无菌水冲洗干净。
3.培养基制备
根据不同的植物种类和培养阶段，选择适当的培养基配方。
培养基是组织培养中提供营养和生长调节物质的介质。
制备好的培养基应进行灭菌处理，以保证无菌条件。
4.组织接种
将消毒处理后的组织放入已准备好的培养基中，确保组织与培养基充分接触。
接种过程中要保持无菌操作，防止污染。
5.培养条件控制
控制好组织培养的条件，包括温度、光照、湿度等。
不同植物和不同的培养阶段对光照、温度等条件的要求不同，需根据实际情况进行调整。
6.继代培养
在适宜的培养条件下，组织开始生长，经过一段时间的培养后，需要进行继代培养，即将已经生长的组织进行分离、切割或分株，重新接种到新的培养基上，以维持组织的生长。
7.壮苗培养
为了提高移栽成活率，在移栽前需要进行壮苗培养。
根据需要调整培养条件，
促进幼苗的生长和发育。
8.移栽
当幼苗长到一定大小时，可以进行移栽。
移栽前需要对幼苗进行适当的炼苗处理，以提高其适应能力。
然后将幼苗从培养基中取出，移植到适宜的栽培环境中。
大丽花的扦插繁殖和组培快繁技术
大丽花的扦插繁殖和组培快繁技术大丽花是一种美丽花卉，因其鲜艳的花朵和独特的形态成为了许多花卉爱好者的心头好。
想要繁殖大丽花，常见的方法包括扦插繁殖和组培快繁技术。
在本文中，我将介绍这两种方法，并提供一些实用的技巧。
一、扦插繁殖1. 准备工作在进行扦插繁殖之前，首先要准备好适宜的扦插材料。
选择健康、无病虫害的大丽花茎段作为扦插材料，长度约为10-15厘米，带有至少2-3个芽眼。
将茎段修剪整齐，确保底部切口平整、无损伤，并且去掉茎段上的叶片。
2. 扦插过程将准备好的茎段插入适宜的扦插介质中，如蛭石、珍珠岩或腐植土等，确保插入深度约为茎段长度的一半。
土壤应保持湿润，但不要过于湿泽以免导致茎段腐烂。
将扦插盆放置于光照充足并有适当通风的环境中，避免直接阳光暴晒。
3. 管理和注意事项扦插后的大丽花需要定期浇水和保持适宜的温度。
保持土壤湿润，但避免积水。
确保室温保持在20-25摄氏度，避免过度寒冷或过度高温。
同时，定期清除茎段周围可能生长的杂草，以保持良好的生长环境。
二、组培快繁技术1. 材料准备组培快繁技术是利用植物组织培养的方法繁殖大丽花。
首先需要准备好无菌的培养基和组织培养器具，如培养瓶、砧板、手套、无菌器械等。
还需要准备一些茎尖、芽或叶片作为组培材料。
2. 组培过程（1）材料处理：将选取的茎尖、芽或叶片进行去除边缘，保留3-5个组织，然后用消毒液进行表面消毒处理，如酒精或过氧化氢。
处理后，将材料放置在无菌环境下以待后续处理。
（2）接种培养基：准备好的培养基应包含适宜的植物激素，如生长素和细胞分裂素。
将材料小心地接种到含有培养基的培养瓶中，插入深度应适中。
（3）培养和生长：将接种好的培养瓶放置在暗室中，温度控制在20-25摄氏度，可适度增加湿度。
大丽花的组培过程需要一定的时间，一般为4-8周左右。
3. 管理和注意事项在组培过程中，需要定期观察培养瓶内的植株生长情况，并保持培养基的湿度和营养平衡。
如果有病害或过多的褐化组织出现，需要立即采取相应的处理措施，如更换培养基、消毒器具等。
组培快繁流程
组培快繁流程Assembling and culturing fast-growing cells can be a complex and time-consuming process. 组培快繁是一个复杂而耗时的过程。
It involves a series of steps that require precision and patience, from selecting the right tissue culture medium to ensuring the right environmental conditions for cell growth. 它涉及一系列需要精确和耐心的步骤，从选择合适的组织培养基到确保细胞生长的正确环境条件。
Therefore, it is crucial to have a well-defined and efficient process to ensure successful tissue culture fast propagation. 因此，有一个明确定义和高效的过程对于确保成功的组织培养快速繁殖至关重要。
First and foremost, the tissue culture process begins with the selection and preparation of the plant material. 首先，组织培养的过程始于植物材料的选择和准备。
This includes sterilizing the plant material to remove any contaminants and preparing it for aseptic culture. 这包括灭菌植物材料以去除任何污染物并为无菌培养做准备。
Once the plant material is ready, it is placed onto a sterile culture medium in a controlled environment to initiate cell growth. 一旦植物材料准备就绪，它就被放置在一个受控的环境中的无菌培养基上，以启动细胞生长。
组培快繁的主要操作流程和技术要点
组培快繁的主要操作流程和技术要点1. 供体材料的选择和消毒
- 选择健康、无病的植株作为供体材料
- 对供体材料进行充分消毒,去除污染源
2. 无菌操作和接种
- 在无菌条件下操作,避免污染
- 将消毒后的外植体接种到培养基上
3. 培养条件的控制
- 严格控制光照、温度、湿度等环境条件
- 保持培养基的pH值和营养成分适中
4. 脱分化和诱导
- 通过添加不同植物生长调节剂,诱导外植体脱分化
- 形成不定芽或胚状体
5. 增殖和生根
- 对脱分化后的组织进行增殖培养
- 添加适当auxin诱导生根
6. 移植和驯化
- 将体细胞系移植到无菌基质中
- 逐步驯化,使幼植株适应自然环境
7. 扩繁和种苗生产
- 将驯化的植株扩繁,大量繁殖种苗
- 严格检疫,确保种苗质量
组培快繁技术需要严格无菌操作,合理控制培养条件,精心调节植物生长素水平,从而实现植物组织的脱分化、增殖和再生,快速获得大量优质种苗。
植物无糖组培快繁技术
探索无糖组培快繁技术在更多植物种类和应用领域中的潜 力，如濒危植物保护、种质资源保存、药用植物繁育等， 促进其在实践中的广泛应用。
THANKS
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快速扩繁
无糖组培技术可以在短时 间内扩繁出大量的优质果 树和林木苗木，提高造林 和栽培的效率。
农作物脱毒苗的繁育与应用
脱毒苗生产
利用无糖组培技术，可以生产出 无病毒、无病原菌的农作物脱毒 苗，提高农作物的产量和品质。
病虫害防治
农作物脱毒苗具有较强的抗病抗 虫能力，可以有效减少农药的使 用量和频率，降低对环境的负面
技术原理与基本流程
基本流程 1. 选择适宜的外植体（如种子、幼苗、叶片等），进行消毒处理。
2. 将外植体接种到无糖培养基上，添加适量的激素和营养物质。
技术原理与基本流程
3. 在恒温、光照充足的培养室 内进行培养，定期观察并记录生
长情况。
4. 当植株生长至一定大小时， 进行炼苗处理，提高其适应外部
不受范围
技术优点与应用范围
农业生产
用于繁殖优良作物品种，提高农业生产效率 。
医药产业
用于繁殖药用植物，提取药物成分。
园林绿化
繁殖花卉、树木等观赏植物，丰富城市绿化 。
科研实验
用于植物生理、生化、遗传等方面的研究。
技术原理与基本流程
• 技术原理：植物无糖组培快繁技术基于植物细胞的全能性，即 植物细胞具有发育成完整植株的潜能。通过提供适宜的培养条 件和激素配比，可以诱导植物细胞或组织进行分裂、生长和分 化，最终形成完整的植株。
保持品种特性
无糖组培技术可以确保观赏植物幼 苗保持原品种的优良特性，提高观 赏价值。
果树与林木的优质苗木繁育
7.3植物组培快繁和脱毒技术
鉴定方法
1、直观测定法 2、指示植物法
利用病毒在其他植物上 出现症状的特征，作为 鉴别病毒种类的标准， 这种专门用以生产症状 的寄主植物即为指示植 物，又称鉴别寄主。
3、抗血清鉴定法
4、酶联免疫吸附法（ELISA） 5、电子显微镜检查法
6、免疫吸附电镜法
• 另一种是起源于苗基部切口处愈伤组织的上部，直接起源于中柱 鞘细胞，由于发生与茎的中柱相连，故利于移栽成活。
胚状体形成
• 概念： 离体培养下起源 于非合子细胞，经历 了胚胎发生和胚胎发 育过程所形成的类胚 结构。
原球茎形成
3、试管苗的增殖与继代培养
• 1）、试管繁殖速率及计算
• 理论计算：
接种一个芽或一块增殖的培养物，经一段时间的培养后看能 得到多少个芽或苗，从而推算理论上一年能繁殖出多少苗。
第一节 植物的离体快繁
植物离体快繁（Micropropagation） 又叫微型繁殖或试管繁殖，它是把植物 材料放在试管内，给予人工培养基和合 适培养条件，达到高速增殖，属离体无 性繁殖。
其特点是快速，每年能以千百万倍
一 .离体快繁的应用
良种快繁 脱毒良种苗快繁和无病毒苗大量快繁； 特殊育种材料快繁； 制种材料快速繁殖； 自然和人工诱变有用突变体的快繁； 基因工程植株的快繁；
四、离体快繁中的有关问题
• 培养物的增殖方式 • 外源生长调节物质对品种典 型性的影响 • 继代次数与变异
第二节 术
• 怎样脱毒？
植物的组培脱毒技
• 为什么要脱毒？
• 怎样鉴定无病毒植株？
病毒不仅使人患病，同样也侵害植物，使植物出现皱叶、黄 叶、落叶，以致品质变劣、花色变淡、花数减少、产量降低。 多数农作物，特别是无性繁殖作物，都易受到一种或多种病原 菌的周身浸染。病原菌的浸染不一定都会造成植物的死亡，很多病 毒甚至可能不表现任何可见症状。但在植物中病毒的存在会减少作 物的产量和降低作物的品质。
植物无糖组培快繁技术
光照、温度等环境因素对快繁效果的影响及解决方案
光照、温度等环境因素对植物无糖组培快繁效果的影响
光照强度、光照周期、温度等环境因素对植物无糖组培快繁效果具有重要影响。
解决方案
针对不同植物种类和生长阶段，调整光照强度、光照周期、温度等环境因素，以获得最 佳的快繁效果。
病虫害防治及生物安全性问题解决方案
植物材料的保存与运
保存
将植物材料放置在适宜的温度、湿度 和光照条件下保存，定期检查其生长 状况。
运输
在运输过程中，要保证植物材料的包 装完整、防止污染和失水，确保其生 命活动正常。
04
无糖组培快繁技术的操作流程
接种前的准备与消毒工作
01
02
03
设备与器材准备
准备好接种用的培养皿、 培养基、接种工具、酒精 灯等。
THANKS
谢谢您的观看
将配制好的培养基分装到组培瓶 或其他容器中，以备接种使用。
培养基的优化策略与实例
根据植物种类和生长阶段调整激素比例和种类。
输标02入题
根据培养条件和目的添加其他添加物，如活性炭、抗 生素等。
01
03
实例：以某种植物为例，通过实验比较了不同激素配 比和种类对植物生长和繁殖的影响，最终确定了最佳
的激素配方和添加物种类与浓度。
消毒工作
对接种环境进行消毒，包 括空气、台面、手等，确 保无菌操作。
培养基制备
根据植物种类和生长需求 ，制备适合的培养基。
接种操作的方法与技巧
灭菌操作
用酒精棉对手部进行消 毒，再使用紫外灯对接
种环境进行灭菌。
切割与消毒
用消毒过的刀片将植物 材料切割成适合的大小 ，再放入消毒液中浸泡
消毒。
植物组织培养技术：3-任务三 植物组培快繁技术
已离体培养植株 （试管苗）
❖ 多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制 培养的植物材料作为外植体来源，减少培养过程 中的微生物感染概率。同时，生长在控制条件下 的植物可以保持培养料间的一致性，提高实验的 可重复性，也便于培养技术的规范。
❖ 某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长 的植物，就需要尽可能避免使用那些生长过于潮 湿和不洁净环境中的植物。对于培养过程中可能 出现内生菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的 生长点部位作为起始培养的材料。
任务四、植物脱毒技术
植物病毒对园艺植物的危害；脱毒技术； 脱毒苗鉴定；脱毒苗的保存和繁殖。
任务五、常见园艺植物的脱 毒与快速繁殖
马铃薯、苹果、草莓、兰花的脱毒快繁。
主要内容
1. 外植体选择与处理 2. 外植体培养 3. 试管苗驯化移栽 4. 快繁过程中出现的问题及解决办法
回顾知识点： ❖ 什么是外植体？
因此，外植体的采集尽量选用植物体最幼态的组织。
2、材料取材
(4)外植体的大小： 外植体越大，污染率越高，但也不能过小，越小成活率越 低。在通常情况下，叶片、花瓣等的面积约为5mm²，茎段 为0.5cm²，除非是用于去除病毒，否则不宜将外植体切得
过小。
一、外植体选择与处理
（二）外植体处理
1、外植体预处理 首先，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干 净，如用刷子刷洗。 把材料切割成适当大小，以能放入灭菌容器为宜。 置于自来水下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁轻度 为宜。细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。洗时可加入洗衣粉清洗， 然后用自来水清洗洗衣粉水。目的是去除轻度附着在植物表面的污 物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。最理想的清洗物 质是表面活性物质——吐温。
植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术
鉴定方法：
抗原的制备 →→抗血清的采收，分离→→ 把稀释的抗血清与未知的病毒植物的汁液在小 试管内混合→→根据沉淀反应来鉴定病毒种类。
植物无病毒苗的培育
3. 特点：
特异性高（这种抗血清是高度专一 性的试剂），测定速度快，一般几小时甚 至几分钟就可以完成。所以抗血清法成为 植物病毒鉴定中最有用的方法之一。
葡萄扇叶病毒
苹果花叶病毒
（二）茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
植物的去病毒技术，实质上就是采取不含 病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁 殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm） 几乎不含或含病毒很少。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管 系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连 丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
活，并加快分裂和生长。
A
B
C
低 温 生长区
热处理区 高 温
寄主无损伤
病原微生物被消除 寄主被杀死
2、热处理脱毒方法
(1)温汤浸渍处理 (2)热空气处理
（1）. 温汤浸渍处理 适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的
材料
方法：50℃左右的温水中浸渍10min
至数小时
特点：方法简便易行，但易使材料受伤。
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分
②
化
芽、芽丛
切割芽丛 继代培养 试管苗
大量芽丛
愈伤组织培养
已分化细胞
脱分化
具分裂能力的细胞 分 裂
诱导期
分裂期
愈伤组织
继 代
愈伤组织
分化期
愈伤组织诱导
◆ 双子叶植物>单子叶植物和裸子植物
◆ 幼年细胞和组织>成年细胞和组织 ◆ 二倍体细胞>单倍体细胞 ◆ 根据培养目的选取外植体
愈伤组织诱导
◆ 外植体大小一般为0.5cm的圆柱形或
④生根困难的则在培养基中搭滤纸桥或按①
⑤其它方法
生根其它方法
◇延长在增殖培养时间
◇降低增殖倍率，减少CTK用量 ◇对易生根植物，切割粗壮嫩枝在营养钵中 直接生根
◇胚状体发育成小苗不经生根阶段，但需 壮苗生根
（4）培养条件 接种只是完成了离体培养的第一 步，植物离体培养和栽培植物一样， 生长过程中也受到各种环境因素的 影响。培养条件是离体培养能否成 功的关键。在培养基条件适宜的基 础上，影响试管苗生长的主要因素 有光照、温度、湿度、氧气。
自 然 环 境 生 长 植 株
温室控制条件下生长植株
已离体培养植株
在多数情况下，应尽量使用温室或 人工气候室控制培养的植物材料作为 外植体来源，减少培养过程中的微生 物感染概率。同时，生长在控制条件 下的植物可以保持培养材料间的一致 性，提高实验的可重复性，也便于培 养技术的规范。
某些多年生植物或特殊材料，必须取 自自然生长的植物，就需要尽可能避免 使用那些生长过于潮湿和不洁净环境中 的植物。对于培养过程中可能出现内生 菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的 生长点部位作为起始培养的材料。
一般来说，无论何种类型的细胞组 织培养技术，起始阶段均涉及外植体取 材、灭菌与接种培养等基本过程。
外植体来源的环境以及外植体的类型 ，均会影响将来培养的效果，而灭菌、 接种和培养条件的选择与控制，也与外 植体的来源和类型有关。
1、外植体的来源
-生长在自然环境下的植物 -有目的地培育在温室控制条件下生长的 植物 -无菌环境下已经过离体培养的植物 自然环境中生长的植株，一般带有微生 物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植 株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在 培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养 效果。
第三章 植物组培快繁程序
植物快速繁殖就 是应用组织培养技术, 快速繁殖名优特新品 物，使其在较短时间 内繁衍较多的植株。 快繁是当前植物细胞 组织培养中应用最广 泛，又最有效的方法 之一。
主要内容
一、供体植株的培养与取材 二、外植体的灭菌与接种 三、培养
四、驯化移栽
五、组培快繁计划安排与实施
一、供体植株的培养与取材
根茎型
微枝扦插型
丛生芽增殖型Ⅰ
顶芽
腋芽
丛生芽增殖型Ⅱ
顶 芽
初 代
微型扦插
侧 芽
带芽的 茎切段
CTK刺激 接种培养
形成的茎梢节长， 直立向上呈小灌木 丛状
无愈伤组织产生 继 代
茎段培养 继代扩繁 生根培养
试管苗
获得较多嫩茎梢
器官发生型Ⅰ
器官发生型Ⅱ
外 植 体 初 代 继 代
生根培养 脱分化 愈伤组织
②白光促进小花天竺葵愈伤组织 的生长，蓝光则无作用。
3）光照时间
根据植物生物学特性决定； 光照长短对试管内花的形成是个重要影响因 素，一般给予周期性光照比较好。多数植物 8-10小时黑暗为宜。光周期长短因植物种类 而异。在胡萝卜组织培养中随着日照长度的 增加，而促进生长。
温度
1）大多数植物23-32℃，一 般控制在25±2º C。低于 15C或高于35C，对生长 都是不利的。 2）植株种类及外植体的不 同，其最适温度也是不同 的。如百合20℃；月季25 －27℃；番茄28℃。
pH值
1）培养基适宜pH值5-6.5，一般为5.8， 调整用0.1M的NaOH和HCl溶液 。
2）ｐH影响培养基的硬度。 ｐH ＞6.5 培养基会变硬； ｐH ＜5.0 培养基不易凝固。 3）灭菌之前，培养基的pH要比标准提高 0.2－0.3个单位。
气体(必要条件)
1）培养瓶内氧气 的充足与否与封口 材料有关。 可用棉塞或特制的 封口塑料。通气最 好的是棉塞，但棉 塞易使培养基干燥， 夏季易引起污染。
（3）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊 子）可放入70-75%酒精中，使用时需 火焰灼烧灭菌，冷却后使用。
（4）外植体放入超净工作台内，臵 70-75%酒精中5-60 秒，0.1％氯化汞610分钟，或10%的漂白粉上清液中10-15 分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。灭菌 时需进行搅动。
常用灭菌药剂的使用和效果
三、培养
1、培养含义
指把离体植物材料放在培养室(有光照、温度条件) 里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化 成再生植株的过程。
2、培养方法
(1)固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材 料的方法。是现在最常用的方法。虽然 该方法设备简单，易行，但养分分布不 均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒 现象发生。 (2)液体培养法 即用不加固化剂的液体培养基培养 植物材料的方法。由于液体中氧气含量 较少，所以通常需要通过搅动或振动培 养液的方法以确保氧气的供给，采用往 复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速 度一般为50～100r/min，这种定期浸没 的方法，既能使培养基均一，又能保证 氧气的供给。
灭菌剂 次氯酸钠
次氯酸钙 漂 白 粉 氯 化 汞 酒 溴 精 水
使用浓度（%） 9—10
2 饱和浓度 0.1—1 70—75
清除的难易 易
易 易 较难 易
消毒时间 5—30
5—30 5—30 2—10 0.2—2
效 果 很好
很好 很好 最好 好
过氧化氢 硝 酸 银
抗 菌 素
10—12
1—2
最易
易
5—15
石龙芮下胚轴 培养产生胚状 体过程
体细胞胚状体发生型Ⅱ
器 官
外 植 体
游离单细胞
胚 状
小孢子 愈伤组织
试 管 苗
体
胚状体形成植株的特征：
1.具两极性 2.胚状体的维管组织与外植体的维管 组织无解剖结构上的联系 3.胚状体的维管组织的分布是独立的 “Y”形 4.数量多，速度快，结构完整，成苗 率高
2、供体植株的管理
取自室外的外植体材料，供体植株 的管理十分重要，这与外植体培养时的 污染率密切相关。植株管理中应注意：
⑴避免昆虫危害 许多昆虫如蚜虫、 螨类和飞虱是许多植物病虫害的传播媒 介，会引起植物组织的潜在感染。
⑵注意防病 尤其是真菌和细菌病害 的侵染，取自感病植株的外植体，在 培养中的污染率远远高于来自健康植 株的外植体，必要时需使用化学药剂 防治病害。 ⑶控制湿度 给供体植株浇水时应从 根部给水，避免从上部浇水，以免上 部形成易于病原侵染的湿度环境；尽 可能降低温室湿度；取材前尽可能保 持植株干爽。
2—10
好
很好
1
4—50mg/L
较难
中
5—30
30—60
好
较好
3、外植体的接种
（1）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或 解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成 0.5cm见方的小块；茎切成含有一个节的小段。 微茎尖要剥成只含l—2片幼叶的茎尖大小等。在 接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。 （2）解开包口纸，将培养瓶口几乎水平拿着， 避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并 将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。
二、外植体的灭菌与接种
1、预处理 先对植物材料进行修剪整理，去 掉不需要部分，将准备使用的植物材 料（外植体）在流水中冲洗20-60分 钟，备用。如特别不洁的外植体，可 先用加有洗涤剂的水清洗10-15分钟 ，再用流水冲洗干净。
2、表面灭菌 （1）操作人员穿戴灭过菌的工作服、 口罩。进入接种室前双手用洗涤剂清 洗干净，操作前再用70%酒精或消毒 剂擦洗双手。 （2）操作期间双手和台面常用70% 酒精或消毒剂擦拭。超净工作台使用 前必须用紫外灯照射杀菌，然后开启 风机。
外植体成苗途径
根、芽
★
外 植 体
愈伤组织
芽
根
试 管 苗
根
胚状体 原球茎
芽
根、芽
根、芽
类型
方式
事例
丛生芽增殖型 器官发生型 胚状体发生型
原球茎型 球茎芽型 块茎型 鳞茎型 孢子型
腋芽萌发，以芽增殖芽，扩大繁殖系数
甘蔗、香蕉、香石 竹、丝石竹
通过脱分化形成愈伤组织，再分化出苗 烟草、油菜等 从愈伤组织或直接从子叶、下胚轴和花 甘蔗、胡萝卜、石 药培养中产生 刁柏等
光照
1）光强 ★影响外植体细胞的增殖、
组织和器官的分化。一般 培养室的光照强度要求 1000～5000lx。
★愈伤组织的诱导有的在光照下有促进 作用；光照强，幼苗生长健壮；光照弱， 幼苗生长弱小，容易徒长。
2）光质
★不同波长的光对细胞的分裂和器官的 分化有影响。
如：①红光促进杨树愈伤组织的生长， 蓝光阻碍其生长。
（3）壮苗和生根培养
◆壮苗 ◆生根培养基：1／2或1／4MS基本培养基； 不加或少加CTK，适量添加NAA；糖浓度11.5%。 ◆培养条件：增加光强，达3000-10000lx。
◆生根方法与途径 ①新梢基部浸入50或100ppmIBA液4－8h；
②在含IAA类培养基中培养4－6d；
③移入含活性碳的生根培养基培养。
（3）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、 细胞、器官，送入培养容器内，轻轻插入培养基。 若是叶片直接附在培养基上，以放1—3块为宜。接 完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时 盖上瓶盖或封口。 注意： 所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内， 且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交 叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。