抗黄瓜灰霉病的枯草芽孢杆菌筛选及其抑菌活性的初步研究
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抑 菌率 ＝（ 照 处 ） 照×１ ０ ｄ对 — 理 ／ ｄ对 Ｏ％
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ． １１１ 寄主植 物 ．．
黄 瓜 为 津 优 黄 瓜 一 号 ， 湖 州 市 种 子 市 场 上 由
购买 ．
１ ． 枯草 芽孢 杆 菌对黄瓜 灰 霉病 的 防治效 果 ．６ ２ 选择 １ 片真 叶期 长势 一致 的盆栽 黄瓜 苗 ， 药剂 喷 雾处 理 （ 以叶片滴 下液滴 为 准） 自然 晾干 ２ ， 个 后 ４ 每 ｈ
有 显著 的抗 菌活性 和极 强 的抗 逆能 力 ， 有利 于生 防菌
好 、 虫 害 不 易 产 生抗 性 等 优 点 ｌ．因此 ， 用 生 物 病 １ Ｊ 使 农 药是 克服 化学 防治 造成 环境 污染 、 破坏 生态 平衡 的
剂 的生产 、 １和储 存 ， 加 是一 种 理 想 的生 防 细 菌 ． 近 年 来 ， 内外 学 者在枯 草芽孢 杆 菌防治 植物 病害 方 面
处 理 ４个 重 复．用镊 子 将菌 块接 种 在 叶片 中央 ， 菌 有
１１ 菌株 ．． ２
４ １株枯 草 芽 孢杆 菌 （ａ ｉｕ ｕ ｔｉ ， Ｂ ｃ ｌｓｓ ｂｉ） 由浙 江东 ｌ ｌ
丝 的一 面接贴 于 叶面 ． 然后 将 黄瓜苗 放 在不 同 的湿 盒
中 ， ５℃下黑 暗保 湿２ ， 维持 相对 湿度 ９ ％左 右 、 ２ ４ 再 ｈ ０
抗黄瓜灰霉病 的枯草芽孢杆菌筛选及 其 抑菌活性 的初 步研 究
李丽梅 ，高丙利 ，柳 东 ，李兴林
（．Ｔ业 发酵微生物教育部重点实验室 ，天津科技大学生物Ｔ程学院 ，天津 ３ ０ ５ ； １ ０ ４ ７ ２ 浙江东奇生物科技有限公 司 ，湖州 ３ ３０ ） ． １０ ０
摘
要 ：结合涂布平板法和温室盆栽植株 法， 测定 了 ４ １株枯 草芽孢杆 菌发酵液对灰霉病病原 菌及黄瓜灰霉病的抑制
。ｌ １・
进行 了大量研 究 ， 已开 发 出多种 商 品化菌 剂应 用 于 并 农业 生产 ［． ３ Ｊ 然 而 枯 草芽 孢 杆 菌 的主 要 防治 对 象 是 水 稻 纹枯 病 、 麦纹 枯病 、 小 番茄 叶霉 病 、 类根 腐病 、 豆 苹果 霉心 病 、 花 立 枯 病 、 花枯 萎 病 等 ． 于 防治 灰 霉病 的 棉 棉 用 枯草 芽孢 杆 菌还很 少 ， 主要 集 中在番 茄 和草莓 上 的 且 灰霉 病 防治 上 ， 因此 用于 防治 黄瓜 灰霉 病 的枯 草芽孢 杆 菌 的 研 究 就 更 少 ． 研 究 的 目的是 筛 选 出 能够 抑 本 制黄 瓜 上灰霉 病 菌 的枯 草 芽孢 杆菌 菌株 ， 开发 防治 为 黄瓜 灰 霉病 的微 生物杀 菌 剂奠定 基 础．
Ｐｒ ｌ ｎ ｒ ｔ ｄ ｅ ｆ ｔ ｎ ｉ ｉ ｏ ｔ ｉ ｅ ｅｉ ｍｉ ａ ｙ Ｓ ｕ ｉｓｏ ｓ ｈ ｂ ｔ ｎ Ａｃ ｉ ｔ ｓ ｉ Ｉ ｉ ｖ ｉ
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奇 生 物 科 技 有 限 公 司 提 供 ．病 原 指示 菌 为 黄瓜 灰 霉 病病 原 菌 （ｏｒｔ ｉｅｅ） 由浙 江 化工 院有 限公 司 Ｂ ｔ ｉ ｃ ｒａ ， ｙｓ ｎ 生物 测试 中心 提供 ．
收稿 日期 ：２ １－ ２ ；修 回 日期 ：２ １－ ２ ０ ０１ｌ １ ０ ２ ０ ８ 作者简 介 ：李丽梅 （ ９ ５ ），女 ，河北邢台人 ，硕士研究生 ；通信作者 ：李兴林 ，副教授 ，ｌｌ ｆ ｕｔ ｄ ． １８ ～ ｘｓ ＠ｔｓｅ ｕｃ ｚ ． ｎ
２１年 ６ ０２ 月
李丽梅，等：抗黄瓜灰霉痘 草芽孢杆菌篮垫及基地堕适丝 生盟窒
ａ ｐ ａ ｅ ａ ｅｂ ｔ ｒ ｆｅ ｔ Ｔｈ ｏ ｔ ｌ ｇ ｅ ｃ ｃ ｆＢＳ ３ ｉ — ｉｏ ｌａ ｓａ ｖ ａｅ ａ ｅｃ ｌ ｓ ｓ ｅ ｓｏ ｉｐ ａ ｅ ｐ ｅ ｒ ｄ ｔ ｈ ｖ ｅ ｔ ｃ ． ｅｃ ｎ ｒ ｉ ｆ ａ ｙ ｏ ０ ｎ ｖｖ ｆａ ｓ ｙ ｒ ｅ ｌ ｄｔ ｔ ｈ ｅ ｌ ｕ ｐ ｎ ｉ ｎ ｄ ｓ ｌｙ ｄ ａ ｏ ｅｅ ｏ ｎ ｉ ｅ ｅ ｈ ｔ ｈ ｇ ｅ ｏ ｔｏ ｆ ｃ ｃ ａ ｕ ｅ ｔ ｎ ． ｈ ｅｌ ｕ ｐ ｎ ｉ ｎｗａ ｓ ｄｏ ｕ ｕ ｅ ａ ｅ ． ｔ ｒ ｗｏ ｄ ｙ ，ｈ ａｈ ｇ ｎ ｗａ ｉ ｈ ｒ ｎ ｒ ｌ ｉ ａ ｙ ｔ ｎ ｓ ｐ ｍａａ ｔ Ｔ ｅｃ ｌ ｓ ｓ ｅ ｓ ｓｕ ｅ ｎ ｃ ｃ ｍｂ ｒ ｅ ｖ ｓ Ａｆ ａ ｓ ｔ ｅ ｐ ｔ ｏ ｅ ｓ ｃ ｅ ｈ ｏ ｌ ｅｔ ｉ ｏ ｕ ａ ｅ ａ ｄ ｔ ｅｉ ｈ ｂ ｔ ｎ ａ ｔ ｉ ｓ ｈ ｎ ｔ ｅｈ ｇ ｅ ｔ ｎ ｃ ｌｔｄ， ｎ ｉ ｉ ｏ ｃ ｉ ｔ ｗａ ｅ ｉ ｈ ｓ ． ｈ ｎ ｉ ｖｙ ｔ ｈ Ｋｅ ｒ ｓ ｇ ａ ｌ ｙ ｗｏ ｄ ： ｒ ｙ ｍｏ ｄ；ｂ ｏ ｅ ｔ ｉｅ ； Ｂ ｃｌ ｓｓ ｂ ｉ ｓ ｉ ｐ ｓｉ ｄ ｓ ｃ ａ ｉ ｕ ｕ ｔ ｉ ｌ ｌ
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第 ２ ７卷
第 ３ 期
天 津科 技 大 学 学报
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ ｉｎｉ ｉｅｓ ｙｏ ｃ ｎ ｅ＆ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｏ ｒａ ａｊｎＵｎｖｒｉ ｆ ｉ ｃ ｏＴ ｔ Ｓｅ ｅｈ ｏｏ ｙ
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２１ ０ ２年 ６月
中 图分 类 号 ：Ｑ９９９ ３ ．６ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文章 编 号 ： １７ —５ ０ ２ １） ３０ １－５ ６ ２６ １ （０２ ０—０ Ｏ０
Ｓｃ ｅ ｎ ｎｇＢａ ｉｌ ｓｓ ｂ ｉｉ ｇ ｉ ｔＢｏ ｒ ｔｓｃｎｅ ｅ ｎ ｒ ｅ ｉ ｃｌｕ ｕ ｔｌ ａ ａｎｓ ｔｙ ｉ ｉ ｒ ａ ｏ Ｃｕｃ ｍ ｂｅ ｎｄ ｓ ｕ ｒａ
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左右的 Ｐ Ａ 培养基加入培养皿 ， Ｄ 制成 Ｐ Ａ 平板． Ｄ 放 置 ２ ４ ｈ后 ， 在平板中央接种灰霉菌菌丝 ， ２℃培养 ２ ４ ． 已长好 的灰霉菌平皿 中， 在 ｄ 用直径 ０ 打孔 ．ｃ ５ｍ 器在菌落边缘切取菌落 圆块 ， 备用．
１ ． 枯草 芽孢 杆 菌对灰 霉 菌的抑 制作 用 ．５ ２ 用 无菌 水稀 释发 酵液 至 菌体浓 度 为 １ ｍＬ ×１ ０ 的稀释 液 ， 中枯草 芽孢 杆菌 计数 法采 用 的是 显微 直 其 接计 数 法．向放 置 ｌ ｄ的 Ｐ Ａ 平板 中加 入 １０ Ｄ ０ 的 枯 草芽 孢 杆 菌发 酵 稀 释液 ， 涂 布器 涂 匀 ， 个处 理 用 每 ３个 重复 ． 将切 取 的灰霉 菌 菌块接 种在 涂好 的平 板 中 央 ， 菌 丝 的一 面接 触平 板 ． ５℃培养 ４ｄ后 ， 直 有 ２ 用 尺 “ 字 交 叉 法 ” 测 量 灰 霉 菌 菌 落 直 径 （ 位 为 十 单 ｃ ， 果取 其平 均值 ． ｍ） 结
植 物 真 菌病 害每 年 给粮 食 和 蔬 菜 的生 产 造 成 巨 大 的损失 ．目前 ， 遍 采用 化 学 农 药 防治植 物 病 害 ． 普 化 学农 药毒 害非 靶标 生物 、 污染 环境 并使 有 害生物 产 生 抗 药性 ．而生 物 农 药具 有 选 择性 高 、 于 降解 、 易 不
效果 ， 以此筛选 出针 对灰 霉病 的生防菌株． 结果表 明， 菌效果最好的枯草 芽孢杆菌为 Ｂ ０ 抑 Ｓ １和 Ｂ ０ ． Ｓ ３ 采用涂布平板
法研 究了菌株 Ｂ ０ Ｓ １和 Ｂ ０ Ｓ ３抑 菌活性 ， 结果表明 ， 菌效果均 为 ５ ％时 ， Ｓ ３比 Ｂ ０ 抑 ０ Ｂ０ Ｓ １的菌体浓度低 ， 得到抑 菌效 果 最好 的菌株 Ｂ ０ ． Ｓ ３ 采用温室盆栽植株 法测试 了菌株 Ｂ ０ 的抑 菌活性 ， Ｓ３ 结果表 明， 菌悬液 比发酵滤液的抑 菌效果好 ， 并且在 菌悬液 处理黄瓜苗后的第 ３天抑菌活性 最高． 关键词 ：灰霉病 ；生物防治 ；枯草芽孢杆菌
易积累 、 量少 、 用 污染 小 、 对人 畜毒 性小 、 环境兼 容 性
wenku.baidu.com
有效 途径 之一 ． ｊ
枯 草 芽孢 杆 菌 是 目前 生 物农 药 中研 究 相对 较 多 的一种 细菌 类 微生 物 ． 该类 菌 在 自然 界 中广泛 存 在 ，
是植物体内常见的内生细菌 ， 对人畜无 明显毒害 ， 具
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ． １１１ 寄主植 物 ．．
黄 瓜 为 津 优 黄 瓜 一 号 ， 湖 州 市 种 子 市 场 上 由
购买 ．
１ ． 枯草 芽孢 杆 菌对黄瓜 灰 霉病 的 防治效 果 ．６ ２ 选择 １ 片真 叶期 长势 一致 的盆栽 黄瓜 苗 ， 药剂 喷 雾处 理 （ 以叶片滴 下液滴 为 准） 自然 晾干 ２ ， 个 后 ４ 每 ｈ
有 显著 的抗 菌活性 和极 强 的抗 逆能 力 ， 有利 于生 防菌
好 、 虫 害 不 易 产 生抗 性 等 优 点 ｌ．因此 ， 用 生 物 病 １ Ｊ 使 农 药是 克服 化学 防治 造成 环境 污染 、 破坏 生态 平衡 的
剂 的生产 、 １和储 存 ， 加 是一 种 理 想 的生 防 细 菌 ． 近 年 来 ， 内外 学 者在枯 草芽孢 杆 菌防治 植物 病害 方 面
处 理 ４个 重 复．用镊 子 将菌 块接 种 在 叶片 中央 ， 菌 有
１１ 菌株 ．． ２
４ １株枯 草 芽 孢杆 菌 （ａ ｉｕ ｕ ｔｉ ， Ｂ ｃ ｌｓｓ ｂｉ） 由浙 江东 ｌ ｌ
丝 的一 面接贴 于 叶面 ． 然后 将 黄瓜苗 放 在不 同 的湿 盒
中 ， ５℃下黑 暗保 湿２ ， 维持 相对 湿度 ９ ％左 右 、 ２ ４ 再 ｈ ０
抗黄瓜灰霉病 的枯草芽孢杆菌筛选及 其 抑菌活性 的初 步研 究
李丽梅 ，高丙利 ，柳 东 ，李兴林
（．Ｔ业 发酵微生物教育部重点实验室 ，天津科技大学生物Ｔ程学院 ，天津 ３ ０ ５ ； １ ０ ４ ７ ２ 浙江东奇生物科技有限公 司 ，湖州 ３ ３０ ） ． １０ ０
摘
要 ：结合涂布平板法和温室盆栽植株 法， 测定 了 ４ １株枯 草芽孢杆 菌发酵液对灰霉病病原 菌及黄瓜灰霉病的抑制
。ｌ １・
进行 了大量研 究 ， 已开 发 出多种 商 品化菌 剂应 用 于 并 农业 生产 ［． ３ Ｊ 然 而 枯 草芽 孢 杆 菌 的主 要 防治 对 象 是 水 稻 纹枯 病 、 麦纹 枯病 、 小 番茄 叶霉 病 、 类根 腐病 、 豆 苹果 霉心 病 、 花 立 枯 病 、 花枯 萎 病 等 ． 于 防治 灰 霉病 的 棉 棉 用 枯草 芽孢 杆 菌还很 少 ， 主要 集 中在番 茄 和草莓 上 的 且 灰霉 病 防治 上 ， 因此 用于 防治 黄瓜 灰霉 病 的枯 草芽孢 杆 菌 的 研 究 就 更 少 ． 研 究 的 目的是 筛 选 出 能够 抑 本 制黄 瓜 上灰霉 病 菌 的枯 草 芽孢 杆菌 菌株 ， 开发 防治 为 黄瓜 灰 霉病 的微 生物杀 菌 剂奠定 基 础．
Ｐｒ ｌ ｎ ｒ ｔ ｄ ｅ ｆ ｔ ｎ ｉ ｉ ｏ ｔ ｉ ｅ ｅｉ ｍｉ ａ ｙ Ｓ ｕ ｉｓｏ ｓ ｈ ｂ ｔ ｎ Ａｃ ｉ ｔ ｓ ｉ Ｉ ｉ ｖ ｉ
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收稿 日期 ：２ １－ ２ ；修 回 日期 ：２ １－ ２ ０ ０１ｌ １ ０ ２ ０ ８ 作者简 介 ：李丽梅 （ ９ ５ ），女 ，河北邢台人 ，硕士研究生 ；通信作者 ：李兴林 ，副教授 ，ｌｌ ｆ ｕｔ ｄ ． １８ ～ ｘｓ ＠ｔｓｅ ｕｃ ｚ ． ｎ
２１年 ６ ０２ 月
李丽梅，等：抗黄瓜灰霉痘 草芽孢杆菌篮垫及基地堕适丝 生盟窒
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第 ２ ７卷
第 ３ 期
天 津科 技 大 学 学报
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ ｉｎｉ ｉｅｓ ｙｏ ｃ ｎ ｅ＆ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｏ ｒａ ａｊｎＵｎｖｒｉ ｆ ｉ ｃ ｏＴ ｔ Ｓｅ ｅｈ ｏｏ ｙ
、ｏ ． ＮＯ．３ ，１ ２７ Ｊ ｎ． ｕ ２０ｌ ２
２１ ０ ２年 ６月
中 图分 类 号 ：Ｑ９９９ ３ ．６ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文章 编 号 ： １７ —５ ０ ２ １） ３０ １－５ ６ ２６ １ （０２ ０—０ Ｏ０
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左右的 Ｐ Ａ 培养基加入培养皿 ， Ｄ 制成 Ｐ Ａ 平板． Ｄ 放 置 ２ ４ ｈ后 ， 在平板中央接种灰霉菌菌丝 ， ２℃培养 ２ ４ ． 已长好 的灰霉菌平皿 中， 在 ｄ 用直径 ０ 打孔 ．ｃ ５ｍ 器在菌落边缘切取菌落 圆块 ， 备用．
１ ． 枯草 芽孢 杆 菌对灰 霉 菌的抑 制作 用 ．５ ２ 用 无菌 水稀 释发 酵液 至 菌体浓 度 为 １ ｍＬ ×１ ０ 的稀释 液 ， 中枯草 芽孢 杆菌 计数 法采 用 的是 显微 直 其 接计 数 法．向放 置 ｌ ｄ的 Ｐ Ａ 平板 中加 入 １０ Ｄ ０ 的 枯 草芽 孢 杆 菌发 酵 稀 释液 ， 涂 布器 涂 匀 ， 个处 理 用 每 ３个 重复 ． 将切 取 的灰霉 菌 菌块接 种在 涂好 的平 板 中 央 ， 菌 丝 的一 面接 触平 板 ． ５℃培养 ４ｄ后 ， 直 有 ２ 用 尺 “ 字 交 叉 法 ” 测 量 灰 霉 菌 菌 落 直 径 （ 位 为 十 单 ｃ ， 果取 其平 均值 ． ｍ） 结
植 物 真 菌病 害每 年 给粮 食 和 蔬 菜 的生 产 造 成 巨 大 的损失 ．目前 ， 遍 采用 化 学 农 药 防治植 物 病 害 ． 普 化 学农 药毒 害非 靶标 生物 、 污染 环境 并使 有 害生物 产 生 抗 药性 ．而生 物 农 药具 有 选 择性 高 、 于 降解 、 易 不
效果 ， 以此筛选 出针 对灰 霉病 的生防菌株． 结果表 明， 菌效果最好的枯草 芽孢杆菌为 Ｂ ０ 抑 Ｓ １和 Ｂ ０ ． Ｓ ３ 采用涂布平板
法研 究了菌株 Ｂ ０ Ｓ １和 Ｂ ０ Ｓ ３抑 菌活性 ， 结果表明 ， 菌效果均 为 ５ ％时 ， Ｓ ３比 Ｂ ０ 抑 ０ Ｂ０ Ｓ １的菌体浓度低 ， 得到抑 菌效 果 最好 的菌株 Ｂ ０ ． Ｓ ３ 采用温室盆栽植株 法测试 了菌株 Ｂ ０ 的抑 菌活性 ， Ｓ３ 结果表 明， 菌悬液 比发酵滤液的抑 菌效果好 ， 并且在 菌悬液 处理黄瓜苗后的第 ３天抑菌活性 最高． 关键词 ：灰霉病 ；生物防治 ；枯草芽孢杆菌
易积累 、 量少 、 用 污染 小 、 对人 畜毒 性小 、 环境兼 容 性
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有效 途径 之一 ． ｊ
枯 草 芽孢 杆 菌 是 目前 生 物农 药 中研 究 相对 较 多 的一种 细菌 类 微生 物 ． 该类 菌 在 自然 界 中广泛 存 在 ，
是植物体内常见的内生细菌 ， 对人畜无 明显毒害 ， 具