农药生物测定

▪ 基本原理：将供试药剂附着在载玻片上或其它平面上，然后将供试 病菌孢子悬浮液滴在上面（或将孢子悬浮液与药液混合后滴在玻片 上），在保温、保湿条件下培养一定时间后镜检以孢子萌发力判断 杀菌剂毒力。
▪ 优点：快速、试验当天即可得结果
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法 ▪ 1、萌发表面的处理 ▪ 萌发表面是孢子萌发的场所，必须符合以下条件： ▪ A.对孢子的萌发即无抑制作用又无促进作用； ▪ B.能使承受的液滴展布面积一致。
菌，以病菌的生长进度快慢来判定药剂毒力的大小。
▪ 病菌生长速度表示方法
▪ （1）药剂达到一定大小所需时间；
▪ （2）一定时间药剂直径的大小。
▪ 优点：操作比较简单；重现性好；病菌易于培养。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定
（二）含毒介质培养法
▪ 2、生长速率法
▪ 步骤：
▪ 1、配制药液
▪ 2、制备带毒培养基
▪ 3、打制菌饼
▪ 4、移菌饼
▪ 5、培养（定时间或定半径）
▪ 6、结果检查
对照的菌落直径－处理的菌落直径
生长抑制率（%）＝
对照菌落直径
×100
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
一、杀菌剂皿内生物测定
（一）孢子萌发法 ▪ 4、高温、保湿培养
▪ 温度、湿度、pH、氧气
▪ 5、结果检查及表示
▪ 一定时间后检查孢子萌发率，一般在低倍镜下，随机检查200个孢子 ▪ 标准：孢子芽管大于孢子的短半径时，即算萌发，否则不算萌芽
对照孢子萌发率－处理孢子萌发率
抑制孢子萌发率（%）＝
对照萌发率
▪ 优点：精确度高，操作简单，很快可得到结果。 ▪ 缺点：测定结果受药剂溶解后和扩散能力影响很大，有一定局限性，
另外，对严格的寄生菌不适合。
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第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （二）含毒介质培养法 ▪ 2、生长速率法 ▪ 基本原理：将不同浓度的药液和培养基混合，用这种培养基培育病
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法 ▪ 1、萌发表面的处理 ▪ ③使用凹玻片 ▪ 适于：宜滴加孢子悬浮液和杀菌剂的混合液，后再加孢子悬浮液。 ▪ 不适于：喷粉或喷雾，造成药剂在凹处较多的沉积
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定
（一）பைடு நூலகம்子萌发法
▪ 3、孢子悬浮液的准备
菌种 无菌水，搅匀 菌种悬浮液 二层纱布过滤
离心 无菌水洗 洗净的孢子
除去菌丝体及破碎培养基
调至浓度5000个/mL（10×10倍，35个孢子）
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第三节 杀菌剂的生物测定方法
2、生长速率法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定
（二）含毒介质培养法
▪ 3、最低抑制浓度法 ▪ 基本原理：药剂按等比或等差数列配制成系列浓度，与培养基混合
后接入供试菌，培养一段时间，找出终点浓度（明显抑制供试菌生长 发育的稀释倍数，即最低浓度） ，即为最低抑制浓度。
×100
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第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （二）含毒介质培养法 ▪ 1、水平扩散法（又叫抑菌圈法或平面法）
▪ 基本原理：病菌先接于培养基表面，再使用多种方法使药剂和培养基 接触，定量培养一定时间，因药剂的渗透扩散作用，施药部位病菌被 杀死或生长受到抑制，从而产生了抑菌圈。
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第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定
（一）孢子萌发法
▪ 1、萌发表面的处理
▪ ②火棉胶薄膜法
5%火棉胶
无水乙醚 0.25%火棉胶
▪ 方法：用镊子夹取清洁干燥的玻片浸入火棉胶乙醚溶液后立即取出， 待多余的流去，无尘条件下室温干燥10h以上。
▪ 特点：处理过的玻片上覆盖一层透明均匀膜，滴上的孢子悬浮液滴在 玻板上展布较大的面积，而且面积大小比较均匀。
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第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法 ▪ 3、孢子悬浮液的准备
▪ 菌种应是标准菌种，供试菌种应符合以下条件： ▪ ①菌种纯粹，在一般培养基上易大量产生孢子； ▪ ②多代繁殖不易产生变异； ▪ ③孢子个体较大，易于在显微镜下观察萌发情况； ▪ ④在分类上有一定的代表性，而且是重要的植物病害病原菌。
的毒力往往偏高。
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第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定
（一）孢子萌发法 ▪ 2、药剂在玻片上的附着 ▪ ②定量滴加药液与载玻片上
▪ 保持药膜上药量的均匀一致。因此在干燥过程中，玻片应尽量水平。 ▪ A.蒸馏水稀释 ▪ B.溶剂，必须考虑 ▪ a对孢子萌发是否有影响； ▪ b有机溶剂可注火棉胶； ▪ c有机溶剂表面能力小，展布面积大而不规则，使附着药量不均匀
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定
（一）孢子萌发法
▪ 1、萌发表面的处理
▪ ①普通的载玻片
洗液10min 自来水冲洗干净
蒸馏水洗
防尘条件下干燥
供试验用
▪ 缺点：供试菌的孢子悬浮液（或与药剂混合后）滴在载玻片上形成的 液滴展布面积很小，呈球状，作“悬滴”时易失落，此外，液滴间的 展布面积相差较大，试验误差也较大。
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法 ▪ 2、药剂在玻片上的附着
▪ ①药液与孢子悬浮液混合后定量置于玻片上 ▪ 水溶性药剂、乳油稀释液或稳定的悬浮液（胶悬剂的稀释液）可用此
法，而WP由于是悬浮性差，不宜采用。
▪ 优点：操作简单迅速，无需特殊设备 ▪ 缺点：药剂和孢子始终充分接触，与病害防治的实际相差很大，测得
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 二、杀菌剂温室植株测定方法 三、植物病毒防治剂药效测定方法 四、杀线虫剂的生物测定
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
▪ 是历史最悠久而被广泛利用的杀菌剂毒力测定方法。