BD流式细胞仪
目录
简介流式细胞仪 (3)
流式细胞仪的临床检验项目
淋巴细胞亚群分析 (4)
肿瘤细胞DNA检测分析 (5)
白血病及淋巴瘤免疫分型 (6)
残余白血病检测 (6)
网织红细胞计数 (7)
造血干细胞计数 (7)
血小板疾病及活化血小板检测 (8)
HLA-B27检测 (8)
器官移植的配型及免疫状态监控 (9)
AIDS诊断及治疗监控 (9)
流式细胞仪的临床/医学研究 (10)
流式细胞技术的发展及国内现况 (10)
建议流式细胞仪之机型----BD公司FACSCalibur
仪器主要特点 (11)
配套设施（计算机、软件、试剂、样本制备仪、售后服务） (12)
仪器主要技术参数 (15)
BD公司全球及中国业务介绍
BD公司流式细胞仪培训计划
BD公司推荐配置单
BD公司仪器与其他厂家仪器比较表
一、简介流式细胞仪
（一）流式细胞仪概念
流式细胞术（Flow Cytometry ，FCM）是一种对处在液流中的细胞或其它生物微粒（如细菌）逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技术。
简言之，流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质，如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等进行快速测量并可分类收集的高技术，FCM以其快速、灵活、大量、灵敏和定量的特色，广泛应用于基础研究和临床实践各个方面，包括细胞生物学、肿瘤学、血液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等，在各学科领域发挥着重要的作用。
（二）原理
待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷出，形成细胞液柱。当液柱通过检测区，在入射的激光束照射下产生前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC），它们分别反映细胞大小和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分类。经一种或几种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产生的特定荧光，可被光学系统检测并输送到计算机进行分析，得到细胞相应的各种特性。
（三）流式细胞仪检测的细胞特性
二、流式细胞仪的临床检验项目
目前在国内最常见的临床应用有两大类：一为肿瘤细胞的DNA含量析；
另一为细胞表面的表型测定，包括淋巴细胞亚型分析、免疫功能监测、白血病和淋巴瘤免疫分型、残余白血病检测、以及HLA-B27组织抗原检测等等。
1、淋巴细胞亚群分析
淋巴细胞亚群分析可以通过相对计数、绝对计数与率的变化监控疾病状态下的免疫状况（如肿瘤、感染性疾病、免疫性疾病等），以此辅助诊断、追踪病情发展及决定用药时机。
检测原理：利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，再配合多色荧光染料，即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的相对比例。最常检测的亚群包括T细胞（CD3）、B细胞（CD19）、NK细胞（CD16+56）、辅助性T细胞
（CD3+CD4+）和抑制性T细胞（CD3+CD8+）等。
应用实例：S i m u l S E T系统利用C D14/C D45设门技术精确检测淋巴细胞亚群比例。
*其中绿色细胞群体为淋巴细胞，红色为单核细胞，蓝色为粒细胞。
2、DNA分析
肿瘤细胞的DNA倍体分析是流式技术另一重要应用，临床上可对一些恶性肿瘤进行早期诊断，跟踪随访和早期治疗，大大提高一些肿瘤的治愈率和生存率。
检测原理：正常人体细胞的DNA含量是二倍体，细胞群体具有特定的增殖比例。通过检测细胞的DNA含量和增殖比例，可以了解细胞群体的倍体性和增殖能力。具体操作时，先将实体组织制备成单细胞悬液，用固定或去污剂在细胞膜上打孔，使DNA特异的荧光染料如PI（碘化丙啶）导入细胞核，PI和DNA缄基对特异结合后上机检测PI的荧光强度，并进行数据分析。
应用实例：乳腺癌病人的手术标本分析图。
*其中红色群体为二倍体，黄色群体为异倍体。
3、白血病和淋巴瘤免疫分型
正常白细胞在其分化过程中，随着系列的不同、成熟阶段的差异，会在细胞膜表面表达不同的分化抗原。白血病细胞则在癌变的过程中，丧失了正常细胞底系列专一性和分化阶段规律性，在本质上有别于正常骨髓细胞。应用此特点可进行免疫表型分析，以鉴别各种白血病和淋巴瘤，辅助临床诊断、评估疗效和预后。
常用的抗原包括：CD3、CD5、CD7、CD19、CD20、CD22、CD10、HLA-DR、
CD13、CD14、CD33、CD34、GLY-A、MPO等等。
应用实例：利用CD45三色分析急性髓性白血病。
* 左图为正常骨髓，绿色为正常淋巴细胞，深红为单核细胞，玫瑰红为成熟粒细胞，浅蓝为有核红细胞，深蓝为未成熟细胞；右图为急性髓性白血病图形，可见与正常明显的差别。
4、残余白血病检测
残余白血病是指经过适当的治疗、疾病缓解后仍残留在病人血中的极少量白
血病细胞。通常白血病病人经过化疗后的疾病复发率为60-80%，经过自体或异体骨髓移植后的复发率仍偏高（20-50%）。所以如果能早期检测到复发的迹象，即白血病细胞的再增生，则可以提前给予病人及时恰当的治疗。
依照不同的白血病，选用不同的抗体组合（如下表）来检测残余白血病。流式细胞术可在一万个骨髓细胞中检测到一个白血病细胞；尤其是TdT的应用大大提高了检测灵敏度。
白血病种类可选择的抗体组合
T-ALL cyto CD3/TdT
B-ALL CD13/TdT，CD33/TdT
Pre-B-ALL cyto μ/TdT
AML CD13/TdT， CD33/TdT，
CD7/TdT
5、网织红细胞分析
网织红细胞计数是骨髓红细胞造血功能的重要指标。传统手工计数耗时耗力，缺乏准确性。流式细胞仪网织红细胞计数系统由于采用系统试剂与全自动软件，可在短时内分析大量细胞，低水平网织红细胞也可达到统计分析精度，省时省力，结果正确可靠。
* 左图中红色群体为红细胞，右图利用RNA染料噻唑橙（TO）区分成熟红细胞和网织红细胞。
6、造血干祖细胞检测
在治疗恶性血液病时，大剂量化疗或放疗摧毁有病的骨髓后，干细胞移植保证了健康的干祖细胞重建骨髓，产生正常的血细胞，实体肿瘤病人亦可通过干细胞移植抗衡大剂量化疗导致的致死性血液毒性。与大剂量化疗相配合的干细胞移植已在临床大大提高了某些肿瘤病人的长期存活率，如乳腺癌、儿童神经母细胞瘤、卵巢癌等。另外，干细胞移植与再生障碍想贫血、免疫缺隐、血红蛋白病等非恶性造血系统疾病治疗的相关性也正在研究中。
* 上图中红色群体是经过多参数设门后精确设定的CD34阳性细胞群体，绿色部分是进行定量计数的标准微球。
7、血小板疾病及活化血小板检测
通过血小板膜糖蛋白的检测可以诊断先天性或获得性血小板疾病如Bernard-Soulier 综合征（CD42b-42a），血小板无力症（CD41-CD61），免疫性血小板减少等等。
评价血小板活化程度的应用领域包括：缺血性冠状动脉疾病如心绞痛、心肌梗死、血管成形术、心肺旁路术等；缺血性脑血管病如脑梗塞、TIA、脑动脉硬化等；糖尿病；恶性肿瘤；高血压病；高脂蛋白血症；高粘滞血症；抗血小板药物机制研究与疗效监测；吸烟；情绪性应急等。
应用实例：CD61/CD62P/PAC-1三色标记分析血小板活化。
8、HLA-B27检测
由流行病学统计结果显示，HLA-B27基因型阳性的人患数个遗传性免疫疾病的机率，比一般人要高很多，以强直性脊柱炎为例，约为87倍。因此HLA-B27检测可以有效帮助临床鉴别诊断强直性脊柱炎等血清阴性骨关节疾病。其他相关性疾病有：遗传性关节炎如Reiter’s综合征, 反应性关节炎，肠性关节炎等。
检测时选用CD3/HLA-B27双标记抗体，圈定T淋巴细胞亚群，再分析其细胞表面是否表现HLA-B27组织抗原。因为T细胞表面只表达ClassⅠ型HLA抗原，可避免ClassⅡ型HLA抗原引起的误差。应用此法无需分离细胞，比传统的微量细胞毒实验节约时间，且检测结果更敏感、客观、容易判读。
9、器官移植的配型及免疫状态监控
以流式细胞仪进行器官移植前配对（Flow Cytometry Cross Match，FCCM）的优势在于抗体检测的特异性、敏感度以及检测结果和手术成功率之相关一致性。利用多参数测定，可了解受者血中是否有抗供者抗体，此抗体与供者的哪种白细胞反应，以及该抗体是否会造成细胞毒性。移植前的评估包括HLA配型及混合淋巴细胞反应，移植后的评估包括外周血淋巴细胞亚群测定、抗供者抗体检测等等。移植后定期检查外周血淋巴细胞亚群，可以预估排异反应，以及病毒感染等问题。
10、AIDS诊断及治疗监控
由于特定细胞群体的绝对计数在临床诊断与治疗上具有极大意义，如CD4+细胞绝对计数可辅助HIV监控治疗，也可通过定量标准微球得到亚群的绝对数值。
应用实例：检测艾滋病人血中辅助T细胞和抑制T细胞的比例及绝对数。
三、流式细胞仪的临床/医学研究
流式细胞仪应用的灵活性允许临床医生科学家们充分发挥想象，满足他们的临床研究需要：细胞免疫功能、细胞凋亡、胞内细胞因子、胞内Ca2+及 PH值、多药耐药性、寄生虫、细菌、病毒、环境科学等等。
流式细胞仪多参数分析配合细胞分选，可以提供样本的更多有效信息。细胞分选是确认细胞形态、进行后续分子生物学研究(如FISH、PCR等)或细胞功能性研究的理想手段。
四、流式细胞技术应用的发展及国内现况
从1930年，Caspersson 和Thorell以细胞的计数开始，试图寻找研究细胞的新工具，到1973年，BD公司与美国斯坦福大学合作，研制开发并生产了世界第一台商用流式细胞仪FACS I，流式细胞术进入了一个空前飞速发展的时代。进入九十年代，流式细胞术作为一门生物检测技术已经日臻完善，仪器的硬件平台也已达到稳定的技术状态，科学家们、仪器制造商们又纷纷将研究焦点转向荧光染料的开发、单克隆抗体技术、细胞的制备方法和提高电子信号的处理能力上来，以拓展日趋广泛的应用领域。流式细胞技术的强大生命力植根于生物学、医学的各个领域，正是无数日新月异、变化多样的应用项目在全球范围内推动了流式细胞技术的发展。
自1981年，北京师范大学生物系引进中国第一台流式细胞仪（FACS Ⅲ， BDIS）至今，各种型号的流式细胞仪在国内安装使用已超过300台，其中BD公司的流式细胞仪近230台（FACSCalibur已超过140台，详见附录2“BD公司国内流式细胞仪用户名单”）。从仪器引入中国二十年的发展历史来看，最早的流式细胞仪大都应用在纯科研领域。随着流式技术的发展，方法学的成熟，尤其是越来越多的用于临床的试剂推出，流式细胞仪已成为国内各大教学医院和医学中心重要的诊断工具，被广泛地应用于新的临床实验上。
五、建议流式细胞仪之机型----BD公司FACSCalibur：
FDA通过的世界唯一全自动四色台式分选机
FACSCalibur集分析和分选功能为一身，配置灵活，结合自动化的样本处理系统、极宽的试剂选择范围、强大的计算机和软件系统，绝对配合今天高效多能的实验室需要。
FACSCalibur性能卓越，不仅通过其用户友好的整体设计帮助临床医生快速实现常规免疫表型、DNA、网织红细胞、血小板、绝对计数等临床分析，FACSCalibur更以其完美的四色分析和独特的分选功能成为遗传、肿瘤、血液、免疫功能等诸多研究不可或缺的重要工具。
（一）、FACSCalibur仪器主要特点
?完美的四色分析系统
BD专利的立体空间激发系统采用双激光实现4色分析，最大程度地减少荧光信号之间的补偿，提高检测灵敏度；双激光的应用大大扩展了染料的选择范围，相应地扩大了仪器的应用领域。
立体空间激发系统为流式细胞仪多色分析设立了行业标准，并使染料的选择更为自由，避免了染料之间的相互干扰。
?独特的分选及浓缩系统
FACSCalibur是世界上目前唯一的台式分选机。
FACSCalibur采用不同于传统分选方式的“捕获管（catch tuber）”新技术，使整个分选操作极其简便，无需长时间液流稳定，只需设定感兴趣的细胞群体，鼠标轻轻一按就能实现对目标细胞的分选。细胞可分选到试管中，或根据需要直接分选到细胞浓缩系统提供的滤膜或培养皿上。
FACSCalibur分选为全封闭系统，安全性好，可实现无菌分选和细胞培养。
细胞浓缩系统使细胞回收简单方便，减少离心步骤，大大提高细胞回收率。
?自动化程度高
FACSCalibur以用户为中心的系统设计，从自动化样本处理、自动上样，到按钮式液流控制、自动化软件获取和分析，每个环节操作都保证简便快捷, 并提供准确客观的实验结果，重复性极好。
?分析速度快
FACSCalibur荧光检测全部采用大型流式细胞仪国际通用的光电倍增管以保证最快的分析速度10000个细胞/秒，避免了使用----导致的低速度。FACSCalibur是目前世界上分析速度最快的台式机。
DNA分析的解决之道
DDM （Doublet Discrimination Module）双粘体辨别模式
通过FL2-W和FL2-A检测分析区别实体组织标本中的粘连细胞群体，最大程度的减少假阳性，是实体组织标本DNA分析不可缺少的工具之一。
?唯一的双参数阈值设定
最大程度减少无关噪音，增加获取分析速度，从而使含量极微的细胞检测成为可能。
?开机无需等待
开机后即可检测样本。机器无噪音。
设计灵活，提供多种配置供用户选择
第二根激光、分选及其浓缩系统、自动进样系统等都可以由用户根据实际需要和资金情况自由选配。
（二）、配套设施
1、FACStation数据处理系统
采用最先进的Macintoshi苹果计算机系统，用户友好MacOS界面设计，易学易操作；与PC兼容性好，数据可在PC机上分析；网络功能强大，可与Internet和Intranet 连接；不易感染病毒超强图形处理功能，可进行多维多色分析，是处理流式数据最佳的选择。
最新配置Macintosh G4： 512 MRAM；
80GB Hard Disk ；
CD-RW，容量大,为回顾性研究带来方便；
多媒体系统；
17’高分辨率纯平显示器
FACStation提供多种功能强大的自动化软件用于数据获取、分析和报告。
并提供多媒体学习光盘。
主软件CellQUEST具有完成所有流式实验的仪器设置、数据获取和统计分析等功能，设计灵活全面，是流式细胞仪系统不可缺少的全能工具。
全面配合各种临床检验的自动化软件系统包括：
FACSComp 自动校准仪器设置进行质量控制，自动设置流式双色、三色、四色分析条件，并可选择进行样本设置条件的优化。自动存储仪器条件。
SimulSET 双色淋巴细胞自动化分析：CD45/CD14自动淋巴细胞精确设门与分析；软件内一致性检测作为内在质控；可自行定义抗体组合，灵活方便；自动打印
标准化实验室报告、医生报告和总结报告。
MultiSET 三色与四色淋巴细胞自动化分析：提供CD45/SSC淋巴细胞门的手动与自动设置与分析；应用Attractor技术自动检查细胞群体
位置漂移；客户可自定义试剂与抗体组合；绝对值定量简单快速准确；自
动打印标准化实验室报告、医生报告和总结报告。
ProCOUNT 造血干祖细胞自动化分析软件；使用ProCOUNT试剂自动获取分析造血干细胞；与TroCOUNT管组合实现绝对计数；操作简单，快速；降低CD34
计数的变异；自动打印标准化实验室报告、医生报告和总结报告。
HLA-B27 自动分析软件；自动获取分析报告全血HLA-B27结果：支持HLA-B27系统试剂；应用FACSLoader组合可实现自动获取批量分析；配合FACSComp
软件进行自动校正；自动打印标准化实验室报告。
ModFIT 高精度DNA自动分析软件：快速正确DNA分析；强大的批量分析功能；便捷的数据库输出；自动打印标准化实验室报告。
Attractor 多色自动快速批量分析软件：独家专利全自动设门技术可快速
准确圈定客户自定义的目的细胞群；最小群体标色算法便于分辨小群体
ReticCOUNT 网织红细胞计数自动化软件：自动设门分析报告网织红细胞计数，检测重复性好，低水平网织红细胞也可达到可靠的统计精度。
QuantiCALC 标准荧光定量分析：分析获取QuantiBRITE试剂或微球的资料时，FL2轴自动转化为每个细胞上抗体数（ABC）自动进行荧光定量；无限的条带设置
充分满足对所有感兴趣细胞群体的研究；
强大的数据库满足长期研究与大型科研工作需求
Paint-a-gate 相互作用多维资料分析软件：独家专利混色算法可同时分辨与显示多个细胞群体；强大的上色工具为研究复杂资料间相互关系提供帮助。
2、全面的配套试剂
BD公司提供通过FDA标准的体外诊断临床试剂和广泛的科研试剂，并拥有全面的质量控制和质量保证产品线以确保检测结果的可靠性：包括仪器状态、实验方法全程控制、
绝对计数控制以及试剂配套中一致性检测等，如：
CaliBRITE微球配合全自动软件FACSComp可自动进行仪器的灵敏度、补偿等校正，确保仪器正常运行。其设置条件还可用于淋巴细胞分析。
BD Multi-Check 全血质控试剂全程监控免疫表型分析检测结果的准确性。
BD Multi-Check CD4 LOW为艾滋病检测提供标准。
BD Stem Count Control为CD34阳性细胞检测质控物，监控CD34造血干细胞检测结果。
TruCOUNT Control 可确保绝对计数的线性精度。
DNA QC保证DNA 分析的线性与分辨率均达到最佳。
（详见试剂报价单）
另外，PMG、TL、Clontech等BD子公司的涵盖细胞生物和分子生物各领域的试剂供应将满足您多方位的需求。（详见附录2 BD公司全球及中国业务介绍）。
3、样本制备仪
◆免疫样本制备仪
BD FACS Sample Process SP-1采用免洗程序，为细胞免疫表型分析提供自动化样本处理，简单易学，安全性好。
◆DNA样本制备仪
BD公司的Medimachine系统是一套安全的，标准化的样本制备系统，可对植物或动物的实体组织进行自动机械分离，为流式分析、细胞培养、或DNA扩增技术提供高质量的样本，是对各种类型的组织实现标准化的样本处理的最佳选择。
4、售后服务
BD公司深知每一台仪器正常运转的重要性，所以每一台FACSCalibur、每一个软件和每一个试剂背后都有着最及时、最专业的支持。
BD总部率先建立了流式行业第一个在线远程诊断系统，用户通过互联网和BD总部进行实时的网上交流，BD技术支持专家在自己的计算机上看到用户的问题并迅速提出评估和解决方案。
在中国，BD建立了专业资深、经验丰富的工程师队伍和技术支持队伍，为用户提供仪器安装调试、维修保养、技术培训和咨询等服务。另外来自BD、PMG、CLONTECH、Transduction Laboratory等总部科学家们的不遗余力的技术支持也是我们的有力后援。
BDFACS品牌流式细胞仪在中国的二十年发展，拥有由一大批国内知名专家、教授组成的用户群体，他们也成为了BD流式技术在中国推广、发展的主要动力。
BD公司每年召开的用户大会，论文交流和新技术介绍讲座，以及定期出版的Flow Cytometry专业技术杂志保证了用户及时了解最新的技术进展和相互交流。
（三）FACSCalibur仪器主要技术参数：
BD公司全球和中国业务介绍
（一）BD公司全球业务
BD公司成立于1897年，总部设于美国的新泽西州。一百多年来，BD公司已发展成为机构遍布全世界九十多个国家和地区、全球雇员近二万名的跨国公司，由最初发明世界上第一支塑料注射器的家族式企业发展为纽约交易所的上市公司，由产品单一发展成为业务涵盖皮下注射、血液采集、微生物产品、流式细胞仪等诸多领域世界著名的医疗技术综合公司，并且多次荣幸地跻身于美国《财富》杂志五百强之列。在产品质量方面，BD公司上市的所有产品均符合或高于同行业最高质量要求并获得ISO及CE质量认证。在1998年度公司全球销售额为31亿美元,用于研究开发新产品方面资金为2.18亿美元。
BD公司主要产品为：
1、BD生物科学系统（BD Biosciences，BDB）
BDB是BD公司的高科技部分，致力于为生命科学的基础研究和临床应用提供全方位强有力的支持和帮助。BDB由以下世界著名的品牌组成：
BD Immunocytometry Systems（BDIS）
PharMingen （PMG）
Transduction Laboratories（TL）
BD Labware
BD Microbiology Systems （BDMS）
Biometric Imaging （BMI）
Clontech.。
作为流式技术领域的先锋企业，BDIS的使命是通过采用划时代的技术为科学发展提供有诊断意义的解决方案和工具来扩展我们的全球领导地位。目前BD品牌的流式细胞仪占全球同类产品总量的70%，占美国总量的80%,为肿瘤、白血病、爱滋病及其它免疫系统疾病的诊断作出了积极的贡献。
BD公司提供的流式细胞仪包括:
?FACSCalibur: 世界上唯一的自动化四色台式分析和分选机.。提供自动进样系统、分选浓缩系统、自动免疫样本制备仪和DNA样本制备仪等选配功能。常规应用包括免疫表型分析、DNA分析、多色分析等，可广泛应用于临床和科研。
?FACSVantageSE：具有最佳分析灵活性和高速度分选功能，可通过Autosort进行自动化分选。除常规应用外，还可进行高分辨率的染色体分析。
BD公司同时提供FDA批准的体外诊断试剂和研究试剂。通过最优良流式仪器、系统化软件以及试剂的完美配合，BD公司力争在科研和临床，尤其在肿瘤和免疫系统疾病的控制（如HIV）方面竭尽所长。
BD公司始终遵循用户至上，多方位满足用户的需要。几年来BD公司不断壮大，PharMingen、ClonTECH、Transduction Laboratories等高科技公司的加盟无疑进一步巩固了BD公司在细胞生物和分子生物多学科领域的绝对领先地位。
PMG建立在涵盖免疫学、细胞生物学、神经科学、分子生物学/蛋白质表达系统、蛋白质化学等多学科多样化的技术基础上，提供3000多种具领先技术的高质量产品，并继续在细胞因子、信号传导、凋亡、细胞周期调控、神经科学等战略性领域开发最新产品。具体分类如下：
1.抗体：
?CD Antigens and Cell Surface Molecles
?Adhesion Molecules
?Cytokines, Chemokines and Cytokine Receptors
?No Azide/Low Endotoxin (NE/LE) Products for Functional Studies
?Tumor Suppressor/Onco-Proteins
?Signal Transduction Proteins
?Cell Cycle Related Proteins
?Apoptosis-Associated Proteins
?Transcription Factors
?Neuroscience
?2nd Step Reagents
?Isotype Controls
2.分子生物学产品：
?BD BaculoGold Baculovirus Kits, Vectors and Expression Systems
?GST/6x His Purification and Expression Systems
?BD BioColors Green Fluorescent Protein Expression Vectors
?BD RiboQuant Ribonuclease Protection Assay Systems
?Luciferase Assay & Detection System
?DNA Damage & Repair
?Custom Molecular Biology Products
3.重组蛋白质：
?Signal Transduction Proteins
?Cytokines And Chemokines
?Cell Cycle Proteins
BD Transduction Laboratories 正是迅速发展的信号传导研究领域提供高质量的单克隆抗体。成立于1993年，1998年成为BD的有机组成，BD TL 已经从最初的25个产品成长为超过700个产品的专业公司。产品包括：
?Phosphorylation & Dephosphorylation
?Nitric Oxide
?Calcium Signaling
?Apoptosis
?Cell Cycle
?Gene Regulation
? Cell Biology
?Cancer Ressearch
?Neuroscience
?Immunology
?GTPases & Regulators
BD Labware作为BDB的一员，以多种多样的高质量试剂、培养基及其添加物、生物活性细胞外基质等产品为防止和治愈疾病作出贡献。BDL 产品包括：
?BD Falcon: 实验室塑料用品的首选，包括细胞培养、液体操作及其他生命科学应用；
?BD BioCoat Cell Enviroments:全面提供细胞培养用品及细胞外生物活性基质；?Collaborative Biomedical Products: 高质量细胞培养试剂和培养基添加物的革新者和创造者。
Clontech是功能性基因时代的科学家最忠实最有力的支持者。成立于1984年, CLONTECH 一直以迅猛的速度增长．CLONTECH的使命始终是通过提供先锋性的工具辅助科学家们提出超越从前的新问题和新观点,最终加速科学发现的过程.基于强大的Ｒ＆Ｄ计划，CLONTECH 发明了一些划时代的研究技术,如GFP-based (green fluorescent protein) reporters, 用于研究蛋白质相互作用的two-hybrid analysis systems , 用于表达差异分析的gene array technology等等.所有这些产品都以其质量和革新性极大地促进了分子生物研究的进展.
CLONTECH 主要的强项在于:
PCR & PCR-based technologies;
cDNA technologies;
gene analysis;
expression systems including retroviral expression;
two hybrid technologies;
reporter systems;
apoptosis detection;
and nucleic acid chemistry.
2、感染性疾病诊断系统( Infectious Disease Diagnostics)：
3、临床标本采集系统( Sample Collection)
4、注射器产品系列(Injection System)
5、糖尿病及运动保健系统(Diabetic Health Care)
6、静脉输液系统(Infusion Therapy)
在新技术日新月异的今天，BD公司在不断创新，追求产品品质卓越的同时也十分重视中国用户的需求，力争把适合中国市场的一流的产品及服务提供给中国用户。在当今
医疗行业相互联合、兼并以增强竞争力的今天，BD公司以其强大的竞争优势相继收购了Ohmeda、Difico、Pharmingen、Boin等多家公司，使公司的经营规模、市场份额及综合竞争能力有了飞跃性的发展，再次为世界同行所瞩目。
（二）BD公司在中国
1994年BD公司进入中国以来，发展迅猛，已在全国设立北京、上海、广州、哈尔滨等九个代表处，并在苏州兴建了合资厂。展望下一个百年，BD公司提出了“To help all people live healthy lives”（令全人类享有健康生活），力争在全中国、全世界有更好的表现。
BD公司流式细胞仪培训计划
为了使贵院技术人员和临床医生能够迅速掌握流式细胞仪的应用，早日收回投资成本，我们特意制定这份计划书，以供贵院作为采购之参考。
一．技术培训
技术培训的目的是让技术人员迅速掌握标本处理、上机操作和结果分析等操作技术。
装机后技术培训（名额不限）
时间：仪器安装调试完毕后一周内，为期一周。
地点：医院实验室
对象：操作仪器的技术员
内容：
1、流式细胞仪基本原理及结构
2、开机、关机程序及软件使用；
3、自动、手动仪器校正及补偿调节；
4、DNA标本处理及测定；
5、免疫标本处理及测定；
6、仪器维护与保养。
技术提高培训：（名额不限）
时间：仪器使用半年后，根据医院需要决定具体时间
地点：医院实验室
对象：技术人员
内容：
1、白血病分型；
2、微小残留病变检测；
3、PNH诊断；
4、血小板活化测定;
5、CD34检测；
6、HLA-B27检测。
7、细胞内细胞因子检测
8、细胞凋亡检测
二．应用培训
应用培训的目的是让临床医生尽快掌握流式细胞仪在临床上的应用，将流式检测项目应用到自己的临床诊断、鉴别诊断和治疗监测中，迅速提高全院的流式应用水平，同时让医院早日收回投资成本。
全院讲座
时间：装机培训结束后一周内，半天时间
地点：医院安排
对象：全院临床医生
内容：流式细胞仪临床应用及进展
血液科讲座
时间：由医院和科室安排
地点：由医院和科室安排
对象：血液科临床医生
内容：
1、白血病免疫分型
2、白血病和淋巴瘤诊断
3、血小板表面糖蛋白检测与血小板疾病诊断
4、白血病淋巴瘤治疗过程中免疫状态的监测
5、如何阅读流式细胞仪化验报告单
肿瘤科讲座
时间：由医院和科室安排
地点：由医院和科室安排
对象：肿瘤科、外科、放化疗科临床医生
内容：
1、流式细胞仪在肿瘤诊断、病理分级及预后中的应用
2、放化疗过程中免疫状态监测
3、细胞凋亡检测
4、多药耐药检测
5、肿瘤体外药敏测定
免疫相关科室
根据医院要求安排
内容：
1、细胞免疫功能测定与免疫性疾病诊断
2、免疫细胞活化检测
3、细胞内细胞因子检测
4、CD4计数与爱滋病诊断
其它科室
根据医院要求安排时间与内容（如血小板活化等）三．维修培训
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤 一、上样前的准备 FACSCalibu可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。 1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。 3L 70%乙醇（用无菌蒸馏水配制） 5L无菌蒸馏水 5L无菌PBS 2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗 涤。安好鞘液筒。 3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。。 4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。 5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。 6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。 7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。 9、从Acquire menu选择SortSetup。在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。按液流控制 键RUN。 10、在Setup 方框中打叉，点击Acquisition Control 菜单中Acquire。。 11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min ），点击Pause, Abort。 12、再重复上述步骤2次，共需要1h。 13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直 至洗净桶内壁残余乙醇。 14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。安好鞘液筒。 15、在收集管接口处安装2支新的收集管。 16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。 17、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。 18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause Abort。 19、再重复上述步骤2次，共需要1h。 20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L无菌PBS盖紧盖子。安好鞘液筒。 21、在收集管接口处安装2支新的收集管。 22、放上一支装有无菌PBS的进样管。 23、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。 24、第一支收集管（最左）中收集15 mL PBS后取下，使PBS由左至右流入下一收集管。重复 操作至2个管都收集了15 mL PBS为止。点击Pause, Abort。 25、在收集管接口处安装2支新的收集管。若要分选动物细胞，则应用无菌技术，用无菌 PBS4 % BSA缓冲液过夜包被50mL锥型管，将包被好的锥型管安置于收集接口。 26、按下述分选步骤分选样本 二、分选细胞
最新流式细胞仪检测细胞周期操作步骤
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤 取对数生长期的A549细胞，按1×106 cells/ mL以1mL接种于100mm培养皿内 ↓ 24h后，进行所需的处理（比如加药,照射） ↓ 特定时间后终止培养，进行下一步的实验 ↓ 收集原培养液，洗后的PBS和消化后的细胞，将三者混匀放入15ml 离心管中 ↓ 1000rpm离心5min（短时低速离心） ↓ 弃上清，用1.5ml预冷PBS，1000rpm离心5min后去除PBS和细胞 悬液内的细胞碎片 ↓ 加入1.5ml预冷PBS,在涡旋状态下加入3.5ml无水乙醇，混匀后，于4℃固定30min,或-20℃长期保存。 ↓ 1000r/min,离心5min ↓
将乙醇吸除，加PBS清洗混匀 ↓ 1000r/min,5min再离心一遍，将残留在细胞上的乙醇除去 ↓ 吸除离心管内PBS，加入200ul PBS和2ul的RNA酶（0.25mg/ml）(37℃下孵育30min) ↓ 加入0.5ml的50ug/ml的PI溶液室温下避光染色30min ↓ 将离心管内的细胞过滤(300um尼龙网膜)至含有PBS的EP管中（PI 具有很强的粘附性，容易使细胞聚团），标记EP管 ↓ 提前一天网上预约 ↓ 开机（先开仪器后开软件） ↓ 流式细胞仪的结构一般分为5部分：①流动室及液流驱动系统；②激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测、存贮、显示、分析系统；⑤细胞分选系统。 ↓ 检测前先涡旋使细胞混匀悬浮呈单个细胞，然后插入流式细胞仪上
↓ 流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱 ↓ 液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光（488nm激 发光源） ↓ 荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析（荧光染料和细胞DNA分子特异性结合，可以检测出细胞周期各时相细胞比例） ↓ 在用第三方软件分析之前，将流式结果按如下所示导出 结果分析——Modfit软件分析
FACAria流式细胞仪操作程序
、准备工作 1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。 1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。再用干棉签擦干。 2）5ml 注射器吸超纯水，清洗缝隙。用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。 2，鞘液桶加液 3, 喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。用滤纸吸干水分，晾干。 二、开机启动 1, 启动电脑，密码BDIS,点开软件，无密码 2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。 3, 液流启动：Cytometer --- FiuidSetup 1 ）气路（透明管）、液路（蓝色管） ,从乙醇桶上拔下,插到鞘 液桶 2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置,旋转至12 点方向 3）取下闭合喷嘴 4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。 4, 喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---SortSetup --- 70um （选择当前使用的喷嘴大小） 5, 液流调整：
点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。查看是否都处于正常状态：1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。 2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方 3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。 4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。然后关闭主机箱外盖。 调整液流：通过调整振幅来实现。 1）振幅Ampl,数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。 2）频率Freg ，一般不动。 3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。100um时，为10, 、11 、12。 4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。 5）点击StreamSpot ，锁死数值，保持液流稳定。 Dropl :实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。 Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。此视为稳定液流。 三、手动调补偿： 样品：Negative （双阴管），FITC（单阳），PE（单阳）
最详细的流式细胞仪实验方法
流式细胞仪实验方法 一、实验准备 1．标本制备： 2．最小化非特异性结合： 二、凋亡 1．凋亡的检测方法：网站和其它 2．PI染色法 3．Annexin V 法 4．TUNNEL法 三、细胞因子 1．激活的细胞因子 2．CBA 四、血小板 1．活化 2．活化检测 3．网织血小板 五、红细胞 1．网织红细胞 2．PNH 3．胎儿红细胞 六、肿瘤学 1．DNA 细胞周期 2．蛋白 3．多药耐药 4．微小残留白血病
第一部分标本处理 一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。 (二)间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。 二、最小化非特异性结合的方法 1．荧光标记的抗体的浓度应该合适，如果浓度过高，背景会因为非特异性的相互作用的增加而增加。 2．在使用第一抗体之前，将样品与过量的蛋白一起培育，如小牛血清蛋白（BSA），脱脂干奶酪，或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。这个步骤通过阻断第一抗体和细胞表面或胞内结构的非特异性的交互作用来降低背景。 3．在使用第一抗体之后，将样品与5%至10%的来自于同一寄主的正常血清和作为标记的第二抗体一起培育。这个步骤会减少不必要的第二抗体与第一抗体、细胞表面或胞内结构之间的交互作用。 通过用来自于同样的样品的血清稀释标记过的抗体可以略过此步骤。此步骤适用于很多方面，但有时候它也会导致已标记的第二抗体和正常血清中的免疫球蛋白的免疫复合体的形成。这种复合体会优先与一些细胞结构进行结合，或者它们最终会导致期望得到的抗体活性的丢失。 4．使用F(ab’)2片段会使背景决定于第一或第二抗体与FC受体的全分子结合。大多数的第二抗体的F(ab’)2片段容易利用。而第一抗体的F(ab’)2片段一般是不能利用或很难制作。因此，在NaN3存在的条件下，将新鲜组织或
流式细胞仪操作步骤(FACSCalibur)
一、开机程序： 1.检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位 置，可以连续工作3个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足 够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中 气压。 2.依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印 机。 3.气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以 排除管路中气泡。 二、运行FACSComp软件、检查仪器状况 1.制备三色标准微球样本。一般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加入 1滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。 2.机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。选择所需校 正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。 3.在软件界面左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过 程中是否需要清洗样品。 4.上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在“RUN”。 5.仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。 6.FACSComp软件运行完毕，显示结果通过测试。 7.做Set up。 8.打印校正结果，退出FACSComp程序。 备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，一定要用“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。 三、样品分析软件：CellQuest Pro 软件，选择“联机”。 1.
（2）对实验样本进行命名； （3）对实验通道进行预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。 备注：如果界面被关闭，重新调出步骤： 2.调出质控模板。 3.画图 选择画图工具（一般选择散点图），Inspect 界面会自动弹出，对几个常用选项进行设定：将散点图选中（用鼠标点击散点图边框才能够 选中图形），将 更改横纵坐 备注：第一个散点图横坐标为FSC，纵坐标为SSC 。 （1一般获取10000个细胞。 （2 （ 3）将所有补偿调为0 （4）将非 52 （5）FSC和SSC （6 4.上阴性对照 将阴性对照管混匀，上机，功能键设置在“RUN”,散点图出现细胞信 号，第一个图：让细胞信号出现在自己看上去舒服的区域；其他三个 散点图，要将细胞信号调整到阴性区域，即左下角区域。通过移动通
流式细胞仪操作方法
一、样品制备 1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。每个样品至少获取2×104cells， 二、上流式测细胞 1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。如果需要打印，打开打印机电源。打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。 1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。关闭液流抽屉。执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。 2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。选择单参数图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数选择FL2-H 1024(此属于荧光,根据荧光染料的波长范围选择不同的荧光,本实验使用PI作为荧光染料,故选择FL2-H)
流式细胞仪使用方法
流式细胞仪的使用方法及相关资料 仪器名称：流式细胞仪 生产厂家：美国贝克曼库尔特有限公司 使用方法： 一．开机程序 1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。 2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡。 4．如果需要打印，打开打印机电源。 5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。 6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。 7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。 做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。 二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files) 1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。 2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。 3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。 三．用CELLQuest进行仪器的设定和调整 1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。 2．从屏幕上方Acquire指令栏中，选取Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。3．从Cytometer指令栏中，开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status 等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1，2，3，4获得此四个对话框。 4．在Detectors/Amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifier mode)：线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周
流式细胞仪操作方法
一、样品制备 1、取样（大约1×106cells ），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl 的Rnase（GenScript 试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl 的PI染液（GenScript 试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。每个样品至少获取2×104cells ， 二、上流式测细胞 1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3 满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLo）w，拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput ）、变压器电源，稳定5分钟。将FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDB。Y如果需要打印，打开打印机电源。打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。 1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。关闭液流抽屉。执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell 中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。结束后自动STANDB，Y 5 分钟后即可进行试验。 2.1、从苹果画面中选取CELLQues，t 最大化，选散点图标，打开，Plot type 选择Acq-analysis ，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H （选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。选择单参数图标，打开，Plot type 选择Acq-analysis ，X参数选择FL2-H 1024（此属于荧光,根据荧光染料的波长范围选择不同的荧光,本实 验使用PI作为荧光染料,故选择FL2-H）
流式细胞仪操作流程
查看文章 流式细胞仪-细胞凋亡检测Ⅰ 2008-11-01 10:20 一PI单染色法 基本原理 其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面： 1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。 2. 光散射特性：凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。也可用于活细胞的分类。 试剂与仪器 l PBS溶液（配制方法见附录）； l PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。 l 70%乙醇 l 400目筛网 l 流式细胞仪 实验步骤 1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去
BD FACSCalibur流式细胞仪简易操作步骤_corr_ZYH_20140520
电子版本: \\NOVOPUBLIC\NovoBio\流式细胞仪\BD FACSCalibur 流式细胞仪简易操作步骤 _corr_ZYH_20140520 - 1 - BD FACSCalibur 流式细胞仪 简易操作步骤 一、开机 1） 先打开净化交流稳压电源，其次打开110V 稳压输出电源，再次打开流式细胞仪，最后打开计算机。 2） 向前拉开储液箱抽屉，检查鞘液筒、废液筒水量，如需充填鞘液，先将减压阀（红色箭头所示）方向调在VENT 位置（箭头方向），再加入超纯水，保持水位在鞘液桶的3/4左右，加好后拧紧桶盖并将减压阀方向调在RUN 位置。 二、开启CellQuest 软件、编辑实验文件 1） 在屏幕下方点击CELLQuest （第四个图标） 启动软件。桌面会出现一’Untitled’ 实验文件，可点击实验文件的左上角的放大钮（绿色），将实验文件窗口放大。
2）从工具板中点击散点图图示。在实验文件的空白区点击，拖曳对角线至适当大小，然后放开鼠标。出现散点图对话方框（当所要编辑的图窗口被选中时，会在其四角出现四个小黑块）。 3）在出现的散点图对话方框中点击Plot Source，选择Acquisition and Analysis (收取、分析) ，确认X和Y轴参数预设为FSC-H 1024、SSC-H 1024。 4）从屏幕上方Plots菜单中选择Dot Plot功能，可复制一个同样大小的散点图，在出现的对话方框内选择X轴：FL1-H 1024；如果是双标，Y轴选择：FL2-H 1024(根据实验检测样品确定所选通道，本步骤选FL1/FL2来说明)，如果是单标，Y轴选择：SSC-H。 点击OK，FL1/FL2的散点图出现。完成后可将重制图移至原图右方。
BD FACSCalibur流式细胞仪操作手册
BD FACSCalibur流式细胞仪 FACS101 Handbook 本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。如希望进一步了解流式细胞技术应用，请至本公司网站订阅FACSinformation电子报https://www.360docs.net/doc/d418408128.html,/bdb/index.html。如需要本课程手册，欢迎至本公司网站下载https://www.360docs.net/doc/d418408128.html,/bdb/10-5-3-1.html。 如需要免疫荧光染色方法，请至本公司网站下载https://www.360docs.net/doc/d418408128.html,/bdb/10-5-4-1.html。 一、BD FA CSCalibur基本结构 1.1仪器本体： 1. 电源开关：在BD FACSCalibur仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。 2. 光学系统：BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射 以BD FACSCalibur 基本型为例 FSC Diode 只收488 nm波长散射光 SSC PMT 只收488 nm波长散射光 FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿色范围（波长515-545 nm） FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长564-606 nm） FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围（波长 >650 nm）
3. 仪器面板： 仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。 流速控制： LO：样品流速：12 μl /min MED：样品流速：35 μl /min HI: 样品流速：60 μl /min 功能控制： ?RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进入流动室。（正常显示绿色；黄色时表示仪器不正常，请检查是否失压。） ?STANDBY：无样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停止流动，雷射功率自动降低。 ?PRIME：去除流动室中的气泡，流动室施以反向压力，将液流从流动室冲入样品管，持续一定时间后，以鞘液回注满流动室。PRIME 结束，仪器 恢复STANDBY状态。 4. 储液箱抽屉： 在主机左下方之储液箱抽屉。可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter，及空气滤网 Air filter。请注意气路减压阀VENT TOGGLE之位置。
流式细胞仪操作步骤(FACSCalibur)
流式细胞仪操作步骤(FACSCalibur)
一、开机程序： 1.检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位 置，可以连续工作3个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足 够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中 气压。 2.依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印 机。 3.气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以 排除管路中气泡。 二、运行FACSComp软件、检查仪器状况 1.制备三色标准微球样本。一般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加入 1滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。 2.机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。选择所需校 正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。 3.在软件界面左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过 程中是否需要清洗样品。 4.上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在“RUN”。 5.仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。 6.FACSComp软件运行完毕，显示结果通过测试。 7.做Set up。 8.打印校正结果，退出FACSComp程序。 备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，一定要用“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。 三、样品分析软件：CellQuest Pro 1.软件，选择“联机”。 Acq Connect （1）在弹出的界面中的选择数据存储路径（Directory 菜单）；
流式细胞仪原理及操作步骤
流式细胞仪原理及操作步骤 流式细胞仪（FCM）是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起 来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的 研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断， 对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光技术 是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验条件下，活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免疫荧光的结果。 （一）原理一 活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。 （二）操作步骤 制备活性高的细胞悬液（培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用 于本法） 用10% FCS RPMI1640调整细胞浓度为 5X 106?IX 107/ ml 取40卩1细胞悬液加入预先有特异性McAb（5?50卩I） 的小玻璃管或塑料离心管，再加50卩I 1 : 20（用DPBS （或兔抗鼠）荧光标记物，充分振摇 J 4 C 30mi n 用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右 1000rpmx 5mi n J] 加适量固定液（如为FCM制备标本，一般加入1ml固定液，如制片后在荧光 显微镜下观察，视细胞浓度加入100?500 ^1固定液） FCM检测或制片后荧光显微镜下观察 （标本在试管中可保存5?7天） （三）试剂和器材 1. 各种特异性单克隆抗体。 2. 荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。 3. 10% FCS RPMI1640, DPBS、洗涤液、固定液（见附录）。 4. 玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。
流式细胞仪操作方法
流式细胞仪操作方法
一、样品制备 1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。每个样品至少获取2×104cells， 二、上流式测细胞 1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。如果需要打印，打开打印机电源。打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。 1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。关闭液流抽屉。执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。 2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。选择单参数图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X 参数选择FL2-H 1024(此属于荧光,根据荧光染料的波长范围选择不同的荧光,本实验使用PI作为荧光染料,故选择FL2-H)
流式细胞仪操作规范
流式细胞仪操作规范 Prepared on 22 November 2020
流式细胞仪的操作规范 1.CXPCytometer：仪器操控软件，可与机器连线，收取ListModeData，也可 进行简单的Data分析。 2.CXPAnalysis：离线分析软体,可进行较繁复的Data分析,包含等高线图 (ContourPlot)”、密度图(DensityPlot)、岛屿图(SurfacePlot)、透试图 (Tomogram)、叠图(OverlayPlot)的绘制,多档案分析与批次分析。 一、基本开机步骤与软体主画面说明。 1.依常规模式进入Window20000系统。 2.双点桌面上，即可启动机器并进入操作软体。此时您可见到下面的画面： 3.选取您自己的资料夹（请在Password处输入密码），并按下Next继续。接 着您能看到下面的画面： 4.此时您能在左边的视窗选取您即将使用的Protocol，然后按下Finish进入软 体，或不选取任何Protocol，直接按下Finish进入软体，您即可见到软体的工作区（workspace），如下图： 工作区分成三部份： a.工具列（CXPToolbars）: b.档案总管(ResourceExplorer): 利用滑鼠在做切换，让您能够看到您专属资料夹中的Worklists、Panels、Protocols、LMDData和HSTData等档案。若要开启档案总管中的资料时，只需利用滑鼠将这些档案直拖曳至软体的桌面上，便可打开各式档案或分析Data。
c. 工作清单编写区（AcquisitionManager）： 利用工作清单工具列您可以在此处编写您即将要收集的样本内容，包括设定本次实验的染剂名称参数名、 ListModeData存档的模式等等。 二、开关机 开机前之准备：补充PBS（约8~9分满）和Clenzsolution（约8~9分满），并倒去废液瓶中之液体。 开机：依一般程序开启您的电脑，点选桌面上的图示，即可进入软体。 关机： 1、准备一管5%bleach（μmfilter过滤）以及两管diwater。 2、选取这个protocol，并编写一个三管的工作清单。 3、依程序上机清洗（5%bleach→diwater→diwater），各管高速冲洗 300sec（最后一管所冲出之颗粒务必少于15个，若仍然大于15 个，请重复1-3的步骤，或执行Cleanse这个指令后，再重复1-3的 步骤）。 4、按下软件右上角的关闭软体。 5、点选桌面上的图示，您会听到机器关闭的声音。 6、若回到windows作业系统，按荧幕左下方“start”一下，移动滑鼠到 shutdown，再按一下，选择“shutdown”。 7、关闭萤幕电源，电脑主机电源，印表机电源。
FACAria流式细胞仪操作程序
一、准备工作 1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。 1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。再用干棉签擦干。 2）5ml注射器吸超纯水，清洗缝隙。用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。 2，鞘液桶加液 3，喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。用滤纸吸干水分，晾干。 二、开机启动 1，启动电脑，密码BDIS，点开软件，无密码 2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。 3，液流启动：Cytometer----FiuidSetup 1）气路（透明管）、液路（蓝色管），从乙醇桶上拔下，插到鞘液桶 2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置，旋转至12点方向 3）取下闭合喷嘴 4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。 4，喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---SortSetup----70um（选择当前使用的喷嘴大小） 5，液流调整： 点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。查看是否都处于正常状态： 1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。 2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方 3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。 4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。然后关闭主机箱外盖。 调整液流：通过调整振幅来实现。 1）振幅Ampl，数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。 2）频率Freg，一般不动。 3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。100um时，为10,、11、12。 4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。 5）点击StreamSpot，锁死数值，保持液流稳定。 Drop1：实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。 Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。此视为稳定液流。 三、手动调补偿： 样品：Negative（双阴管），FITC（单阳），PE（单阳），Sample（FITC,PE双阳）1，Browser中：建立文件夹（单击folder图标）-----建立文件（单击experiments图标），出现CST新窗口，选择keepcurrentcytomotersetting-----建立样本，单击注射器图标，出现spcimen----点开下面的+号，出现Tube，点成绿色。 以上文件最好都改名，分别右击英文，raname。 2，Inspect对话框中看参数，Cytometer中调参数。
流式细胞仪标本制备的操作步骤与注意事项
流式细胞仪标本制备的操作步骤与注意事项 (一)原理 活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。 (二)操作步骤 制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、 胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法) ↓ 用10％FCS RPMI1640调整细胞浓度为 5×10６～１×10７／ml ↓ 取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl) 的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1∶20(用DPBS 稀释)灭活正常兔血清 ↓4℃30min 用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右 1000rpm×5min ↓ 弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠 (或兔抗鼠)荧光标记物，充分振摇 ↓4℃30min 用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右 1000rpm×5min ↓ 加适量固定液(如为FCM制备标本，一般加入 1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察， 视细胞浓度加入100～500μl固定液) ↓ FCM检测或制片后荧光显微镜下观察 (标本在试管中可保存5～7天) (三)试剂和器材 1.各种特异性单克隆抗体。 2.荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。 3.10％FCS RPMI1640, DPBS、洗涤液、固定液(见附录)。 4.玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。
(四)注意事项 1.整个操作在4℃下进行，洗涤液中加有比常规防腐剂量高10倍的NaNO３，上述实验条件是防止一抗结合细胞膜抗原后发生交联、脱落。 2.洗涤要充分，以避免游离抗体封闭二抗与细胞膜上一抗相结合，出现假阴性。 3.加适量正常兔血清可封闭某些细胞表面免疫球蛋白Fc受体，降低和防止非特异性染色。 4.细胞活性要好，否则易发生非特异性荧光染色。 附: 1. DPBS (×10, 贮存液) NaCl 80g KCl 2g 蒸馏水加至1000ml Na２HPO４11.5g 临用时用蒸馏水1∶10稀释 KH２PO４2g 2.洗涤液 DPBS900ml FCS 50ml (终浓度5％) 4％NaNO３终浓度0.2％) 3.固定液 DPBS1000ml 葡萄糖20g (终浓度2％) 甲醛10ml NaNO３0.2g (终浓度0.02％) 流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。 (二)间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。
流式细胞仪原理及操作步骤
流式细胞仪原理及操作步骤 流式细胞仪(FCM)是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断，对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验条件下，活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免疫荧光的 结果。 (一)原理 活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。 (二)操作步骤 制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、 胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法) ↓ 用10％FCS RPMI1640调整细胞浓度为 5×10６～１×10７／ml ↓ 取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl) 的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1∶20(用DPBS 稀释)灭活正常兔血清 ↓4℃30min 用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右 1000rpm×5min ↓ 弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠 (或兔抗鼠)荧光标记物，充分振摇 ↓4℃30min 用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右 1000rpm×5min ↓ 加适量固定液(如为FCM制备标本，一般加入 1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察， 视细胞浓度加入100～500μl固定液) ↓ FCM检测或制片后荧光显微镜下观察 (标本在试管中可保存5～7天) (三)试剂和器材 1.各种特异性单克隆抗体。 2.荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。 3.10％FCS RPMI1640, DPBS、洗涤液、固定液(见附录)。 4.玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。
流式细胞仪操作流程(单标)
流式细胞仪操作流程(单标) 一、开机(务必按照此顺序开机) 1、打开下面的小门，推上电源 2、打开插线板电源开关 3、开电脑 4、打开流式细胞仪开关 二、软件准备 1、打开软件 2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和 shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen—— new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。 3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方 图。以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。 4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。 三、上机操作 1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data， 此时流式细胞仪开始工作。 2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和 SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。 3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中 出现P1，并且其中的细胞变成红色。 4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图 2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。 5、在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FITC，使其细胞散点图在图2中 处于103以内，直方图的峰值在0－103之间。选择右侧显示屏中的Interval Gate 选项，在图3中点击并选定103数值右侧区域，图中显示P2。调节FITC电压，使P2的百分比值尽量在0.5%以下，并尽量使图3中的图象呈正态分布图。 6、在Acquisition Dashboard中选择stopping gate内的P1，点击record data,机器自动记录数 值。 7、记录完成后，点击remove tube，并将试管取下。 8、放置需要检测的试管，并点击acquire data，机器自动记录数值并在右侧显示屏中显示， 单击record data，记录结果；每一次取下试管前均需点击remove tube，并在出现的进程框未消失前将试管取下。 四、关机 1、实验完成后，点击菜单栏Cytometer内的shutdown选项，在出现的对话框内选择确定， 待系统清洗完毕后在出现的对话框内点击确定。注：每次实验开始时均需要startup,实