三七含量测定

人参皂苷Rg1含量测定

1.材料

1.1仪器

高效液相色谱仪,紫外检测器,Elnpower色谱工作站,0.45um有机微孔滤膜。

1.2试药

双层口腔溃疡膜(自制)，乙睛,甲醇均为色谱纯,甲酸为分析纯,水为纯化水;人参皂苷Rg1对照品

2.方法与结果

2.1色谱条件

PhenomenexCl8柱(4.6rnrnx250rnm,5um),以乙睛(A)和0.05%磷酸水(B)为流动相梯度洗脱,流动相梯度:0min(20%A)~8min(20%A)~40min(30%A)~60min(45%A);流速: 1.0ml/min,柱温:25℃,检测波长:203nm,进样量:10uL,测定人参皂苷Rgl。

2.2对照品溶液的制备

精密称取人参皂昔Rg1对照品4.10mg置10ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得人参皂昔Rgl质量浓度为410ug/mL对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备

取双层口腔溃疡膜40片,剪碎,取约0.5g，精密称定后,置50mL具塞三角瓶中,精密加入甲醇20mL,密塞,称定质量,超声处理1h(功率100W,频率40kHz),放冷,称重,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,0.45um有机微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。

2.2.3阴性对照品溶液的制备

按供试品处方量称取除三七外的其它药品细粉,按照双层口腔溃疡膜制备方法制备缺三七的阴性供试品,取约0.5g,按供试品溶液制备方法制备,即得缺三七的阴性供试品溶液。

2.3系统适用性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10uL,分别注人HPLC仪中,照2.1项下色谱条件测定,记录色谱图,

由色谱图可知,在对照品溶液色谱峰相应的位置上,供试品溶液具有相同色谱峰,峰形良好,且与相邻峰分离较好,阴性对照溶液在此峰位基本无吸收和干扰,方法可行。

2.4方法学考察

2.4.1线性关系

精密称取人参皂昔Rg1对照品4.31mg,置10mL量瓶中,加甲醇溶解定容配制成人参皂昔Rgl质量浓度0.431mg/ml的溶液,精密吸取此溶液2,8,14,20,26,32uL依次注入高效液相色谱仪,照“2.1”项色谱条件下测定,以色谱峰面积为纵坐标,质量浓度(mg/ml)为横坐标,计算回归方程,人参皂昔Rg1; y=327972x一44962 r= 0.9998

由表可见,人参皂昔Rgl进样量在0.862一13.792ug范围内线性关系良好。

2.4.2精密度试验

对照品溶液10ul,按上述色谱条件,重复进样5次,记录峰面积,结果人参皂昔RglRSD为2.92%。

2.4.3稳定性试验

取双层口腔溃疡膜供试品溶液,分别在制备后0,6,12,18,24h测定,结果供试品中人参皂昔Rgl RSD为1.96%，表明供试品溶液制备后在24h内基本稳定。

2.4.4重复性试验

取同一批双层口腔溃疡膜供试品,按2.3项下方法制备供试品溶液5份,照“2.1”项色谱条件进行测定,结果人参皂昔Rgl RSD为2.15%。

2.5样品测定

按照“2.3”项下制备供试品溶液,在“2.1”项条件下各进样3次,记录峰面积并计算含量,