肝组织匀浆的制备方法
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如何制备肝脏组织匀浆液
各位园子里的XDJM,小妹想做一个有关药物的代谢动力学实验,需要测定肝组织的药物浓度,需要制备肝脏组织匀浆液和血液的药物浓度,想请教一下匀浆液的具体制备方法及如何保存。还有血液离心数及如何保存。先谢谢了。呵呵!
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肝脏称重后加一定量的生理盐水(如1:3就是药物浓度稀释了三倍)用匀浆器匀好后-20度保存.血液14000rpm
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取出肝脏,用生理盐水洗2~3次,除去血液,剥掉表面的结缔组织的脂肪。剪碎,用生理盐水反复洗涤至无血色止,然后再加生理盐水少许,用组织捣碎机或匀浆器作成匀浆。将肝匀浆装入离心管内(1/3左右),交换地用2~3倍量生理盐水和丙酮反复洗涤各三次,至上清无血色止,每次完毕先用2000r/min离心沉淀15 min后,再除去上清液。-20度冰箱保存。
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你可以参考别人做的关于细胞色素P450的文献制备肝微粒体的步骤进行,注意一定要是低温下进行
求助于各位,有谁知道大鼠肝组织匀浆的制备方法的吗?急用!
匀浆的方式有多种,可根据实际情况选择。相对于肺、肠等组织,肝组织匀浆还是比较容易制备的。
(1)手工匀浆:
称取肝组织*mg,将其放入玻璃匀浆管口剪碎,加入9倍体积(mL)的匀浆介质或冷生理盐水进行匀浆。左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中保持低温状态,右手将捣杵垂直插入套管中,上下转动研磨十次(6-8分钟),充分研碎,使组织匀浆化,看不到纤维状物质为止。
(2)机器匀浆:
用组织捣碎机10000-15000r/min上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3-5次,冰水中进行。
(3)超生粉碎:
用超生粉碎机进行粉碎,可用Soniprep150型超生发生器以振幅14微米超生处理30秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用400安培,5秒/次间隙10秒反复3-5次。
谢谢,我是做肝匀浆的甘油三脂的检测,我想问一下这种肝匀浆 的制备是怎样的?如果是手工制作的话需要加什么匀浆液吗?
可以参考第一种方法,均浆液用生理盐水即可。