碱水提取斑蝥药材中斑蝥素的研究

高于药典方法检验的结果，有必要加大样品量进行复核。 2.3 结果
新工艺条件为：斑蝥药材粗粉 4 g，加纯化水 32 mL（8倍）， 用 40%氢氧化钠调 pH=14，超声 15 min，浸泡过夜；浸泡液超 声 30 min，倾出液体Ⅰ；沉 淀 加 20 mL 水 （5 倍 ），40%氢 氧化 钠调 pH=14，超声 15 min，倾出液体Ⅱ；沉淀加 20 mL 水（5倍）， 40%氢氧化钠调 pH=14，超声 15 min，倾出液体Ⅲ；合并液体 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ离 心 15 min，得 混 合 液 体 约 70 mL；提 取 液 用 纯 化 水 70 mL 稀 释 ，加 氨 水 10 mL，用 10%硫 酸 调 pH，至 出 现 大 量沉淀、溶液澄清为止（pH 约为 3～5），离心的提取液约 150 mL 即得。 3 讨论
斑蝥为芫青科昆虫南方大斑蝥或黑黄小斑蝥的干燥体。 斑蝥中含斑蝥素（2010 版药典规定不少于 0.35%），并含有含 量约为斑蝥素含量 1/2～1/3 的羟基斑蝥胺， 另外还含 12%的 油脂、树脂、乙酸、色素及多种微量元素。 斑蝥体内含有 17 种 微量元素，总量为 10.53 mg/g，其中与抗癌作用有关的锰和镁 的含量较高[1]。 斑蝥素化学名为：六氢-3a，7a-二甲基-4，7-环 氧异 苯 并 呋 喃-1，3-二 酮 ；分 子 式 及 分 子 量 ：C10H12O4，196；物 理性质：为斜方形鳞状晶体，难溶于水，易溶于丙酮、氯仿、乙 醚及醋酸乙酯； 斑蝥素与氢氧化钠可水解成半合成衍生物， 使斑蝥素的溶解性增大，而且这种反应是可逆的，为碱水提 取斑蝥素提供理论依据[2]。 传统工艺用盐酸酸化虫体，用丙酮 浸泡， 浓缩物用无水乙醇和石油醚混合洗去脂溶性杂质，此 方法对斑蝥素提取较为合理，但药材中的大量矿物元素是无 法提出的[3]。 本研究利用斑蝥素可在碱性条件下可水解成可 溶性的物质的原理，通过皂化反应去除油脂等杂质，能大量 提 取 出 斑 蝥 素 和 可 能 提 出 矿 物 元 素 [4]。 1 材料与试药 1.1 仪器
· 药品鉴定 ·
2012 年 5 月第 19 卷第 13 期
碱水提取斑蝥药材中斑蝥素的研究
彭晓敏 贾志伟 麻明亮 山东正邦制药有限公司质量部，山东菏泽 274000
[摘要] 目的 建立碱性水溶液提取斑蝥药材中斑蝥素的提取方法，摆脱传统工艺中大量使用有机溶剂的限制，减少
生产成本，降低环境污染。 方法 以斑蝥素的收率为考察目标，对碱水的浸泡次数及除杂时氨水的用量进行考察。 结
果 采用气相色谱法测定提取液斑蝥素的含量。 用碱水（8、5、5 倍）3 次处理斑蝥药材，药材提取液在用相当于斑蝥药
材 2.5 倍的氨水碱化后去杂，提取澄明度较好，含量较高。 结论 通过实验比对，碱水药材提取率比药典方法检测率
高，而且方法简便易行，实用价值高，为大生产提供依据。
[关键词] 碱水法；斑蝥；斑蝥素；含量测定
通过实验结果分析，斑蝥素在斑蝥体内可能以游离状态 和结合状态等多种状态存在的可能性较大[5]。 药典规定的斑 蝥检验方法存在不足，提取方法欠妥，不能测出结合状态的 斑蝥素，不能测出斑蝥素的真实含量[6-7]。 从而一旦斑蝥作为 药品原料， 再经过各制药企业不同的生产工艺提取后的影 响，同一批药材斑蝥素的提取率就会不同，而一般制药企业 对于斑蝥药材中斑蝥素的含量测定都依据药典方法，所以用 药典方法检验后斑蝥素的含量很难用来指导生产， 鉴于此， 制药企业应当建立适合自己产品要求的斑蝥药材含量检验
66 中国当代医药 CHINA MODERN MEDICINE
2012 年 5 月第 19 卷第 13 期
· 药品鉴定 ·
淀加 20 mL 水 （5 倍 ），40%氢 氧 化 钠 调 pH=14，超 声 15 min， 倾出液体Ⅲ；合并液体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ离 心 15 min，得 混 合 液 体 约 70 mL（①、②2 份）。 2.2.2 含量测定 2.2.2.1 样品 1 取①提取剩余残渣，用 1 d 盐酸酸化，用适量 丙酮溶解，超声 15 min，滤液浓缩，移至 5 mL 量瓶中，气相检验。 2.2.2.2 样品 2 取①提取液 70 mL，加氨水 0.8 mL，用 10%硫 酸调 pH 至出现大量沉淀 、溶液澄清为止 ，离心 10 min，得澄 清液体 54 mL，量取 2.7 mL 稀释至 100 mL（依处方量稀释成 得力生注射液）按得力生注射液方法检验。 2.2.2.3 样 品 3 量 取②提 取 液 3.5 mL，稀 释 至 100 mL（依 处 方量稀释成得力生注射液），按得力生注射液方法检验。 2.2.2.4 样品 4 量取②提取液 30 mL，用 30 mL 纯化水稀释， 加 氨 水 2.5 mL，用 10%硫 酸 调 pH 至 出 现 大 量 沉 淀 、溶 液 澄 清 为 止 ，离 心 10 min，得 澄 清 液 体 55 mL，量 取 5.5 mL 加 水 80 mL（依处方量稀释成得力生注射液）按得力生注射液方法 检验。 2.2.2.5 样品 5 量取②提取液 30 mL，用 30 mL 纯化水稀释， 加氨水 5 mL，用 10%硫 酸 调 pH 至 出 现 大 量 沉 淀 、溶 液 澄清 为止，离心 10 min，得澄清液体 65 mL，量取 6.5 mL 加水 79 mL （依处方量稀释成得力生注射液）按得力生注射液方法检验。 2.2.2.6 样品 6 按 2010 版 药 典 对 斑 蝥 药 材 进 行 药 材 含 量 测 定。 2.2.2.7 样品 7 按 2005 版 药 典 对 斑 蝥 药 材 进 行 药 材 含 量 测 定。 2.2.3 实验结果
称 取 斑 蝥 药 材 4 g×2 份 （①：4.001 4 g；②：4.040 0 g）加 纯化水 32 mL（8 倍），用 40%氢氧化钠调 pH=14，超声 15 min， 浸泡过夜；浸泡液超声 30 min，倾出液体Ⅰ；沉淀加 20 mL 水 （5 倍），40%氢氧化钠调 pH=14，超声 15 min，倾出液体Ⅱ；沉
色 谱 条 件 与 系 统 适 用 性 ：以 甲 基 硅 橡 胶 （DB-1）为 固 定 液，涂布浓度为 3.5%；柱温为（165±10）℃；理论板数按斑蝥素 峰计算应不低于 2 500。 检验依据得力生注射液及斑蝥提取 液检验方法进行检验，检验方法已进行方法学验证。 2.2 实验 2.2.1 提取液制备
[中图分类号] R286.0
[文献标识码] A
Hale Waihona Puke Baidu
[文章编号] 1674-4721（2012）05（a）-0066-02
The study of extracting cantharidin from Mylabris phalerata Pallas by alkaline
PENG Xiaomin JIA Zhiwei MA Mingliang Quality Department, Shandong Zhengbang Pharmaceutical Co., Ltd. , Heze 274000, China [Abstract] Objective To establishment of the extract methods of using alkaline aqueous solution to extract cantharidin from Mylabris phalerata Pallas. To get rid of the limit of extensive use of organic solvents in the traditional process, reduce costs of production and environmental pollution. Methods Aiming to inspecting the yield of cantharidin and inspecting the alkaline soaking times and the amount of ammonia in the impurity removal. Results GC was used for the determination of the extract cantharidin content. The results showed that alkaline water (8, 5, 5 times) three processing Mylabris phalerata Pallas. Extracted liquid was alkalized with the ammonia equaled 2.5 times of the weight of Mylabris phalerata Pallas and the extraction has better clarity and higher yield. Conclusion Through the comparison of experiment, alkaline extract yield is higher than pharmacopoeia method and the method is simple, valuable and also provides the basis for large-scale pro duction. [Key words] Alkali water method; Cantharidin; Mylabris phalerata pallas; Determination of content
具体见表 1。
样品 样品 1 样品 2 样品 3 样品 4 样品 5 样品 6 样品 7
表 1 实验结果比对表
提取液体积（ mL）
斑 蝥 素 占 药 材 百 分 比 （%）
-
未检出
54
0.52
-
0.72
55
0.52
65
0.73
-
0.41
-
0.51
根据表 1，得知样品 1 中经过 3 次提取后斑蝥素已提取 完全，碱水提取斑蝥素方法较为合理、简单易行，而且提取率
1.2 试药 斑蝥素对照品 （中国药品生物制品检定所； 批号：
110783-200503）， 斑 蝥 药 材 （ 产 地 ：安 国 市 伊 康 药 业 有 限 公 司；品种：南方大斑蝥），氨水（厂家：国药集团化学有限公司； 批 号 ：T20100118）， 硫 酸 （ 厂 家 ： 北 京 化 工 厂 ； 批 号 ： 20080210），氢 氧 化 钠 （厂 家：国 药 集 团 化 学 有 限 公 司 ；批 号 ： F20090212），三 氯 甲 烷 （厂 家 ：南 京 化 学 试 剂 有 限 公 司 ；批 号 ： 11012710115）， 甲 醇 （ 色 谱 纯 ， 厂 家 ：CNW； 批 号 ： 0000282717）， 乙 腈 （ 厂 家 ： 西 陇 化 工 股 份 有 限 公 司 ； 批 号 ： 100401）。 2 方法与结果 2.1 检验方法
安捷伦 7890A 气相色谱仪，安捷伦 1260 液相色谱仪，电 子 天 平 （厂 家 ：沈 阳 龙 腾 电 子 有 限 公 司 型 号 ：ESJ182-4），离 心机 （厂 家 ：金 坛 市 大 地 自 动 仪 器 厂 ；型 号 ：800 型 ），超 声 波 清 洗 机 （厂 家 ：天 津 东 科 食 品 有 限 公 司 ；型 号 ：HS3120 ）。
方法，以达到产品中斑蝥素和药材中斑蝥素的合理匹配。 再 者，斑蝥中具有药用价值的除了斑蝥素外，其他一些大量的 矿物元素，碱水提取法能否有效提出，这些矿物元素的药用 价 值 和 提 取 方 法 有 待 进 一 步 研 究 [8]。
[参考文献]
[1] 郭常燊. 斑蝥的抗癌作用及临床应用[J]. 丹东医药，2002，4：45-47. [2] 刘 沁 ， 陈 建 伟 ，李 祥 ，等. HPLC 法 测 定 5 个 产 地 斑 蝥 药 材 中 斑 蝥 素