巨噬细胞吞噬功能检测

巨噬细胞吞噬功能测定

【实验原理】

巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。当鸡红细胞被注入小鼠腹腔时，会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。取小鼠腹腔液涂片、染色，在显微镜下可见到鸡红细胞被吞噬的现象。计算吞噬百分率和吞噬指数，可判断吞噬细胞的吞噬功能。

【试剂和器材】

1. 动物体重20-25g的健康小鼠。

2. 1%鸡红细胞（CRBC）悬液自鸡液静脉或心脏采血，放Alsever液中保存（鸡血与Alsever 液1：5混合），置4℃可有效保存1个月，临用前用生理盐水将CRBC洗3次，按红细胞压积配成1%CRBC悬液。

3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g，混匀，置100℃水浴煮沸消毒。

4. 其他试剂瑞氏（Wright）染液、生理盐水等。

5. 器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。

【步骤和方法】

1.试验前3天，于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。

2.于试验当天，小鼠腹腔注入1%CRBC悬液0.5ml，并轻轻揉腹。

3.30min后小鼠颈椎脱臼处死，取腹腔液涂片，自然干燥后瑞氏染色，用油镜观察。

【结果判定】

镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。呈油镜下随机观察100个巨噬细胞，计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数。

吞噬百分率= (吞噬CRBC的巨噬细胞数/100)*100%

吞噬指数= 吞噬细胞吞噬的CRBC总数/100

【注意事项】

1.涂片的薄厚要适当，否则影响计数。

2.小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。

3.如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。

4.剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。

5.被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。

阿氏液配方：葡萄糖2.05克柠檬酸钠0.8克柠檬酸0.055克氯化钠

0.42克加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，经过69千帕，15分

钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。