发酵液中提取胞外多糖

方法1 (桦褐孔菌发酵胞外多糖的提取)

（1）用抽滤方法将发酵液和菌丝体分离

（2）真空浓缩至原来体积的1/ 5

（3）加入4倍体积的95%乙醇，玻璃棒搅拌使多糖充分沉淀

（4）沉淀放置4℃冰箱过夜

（5）为除去掺杂的还原糖和小分子杂质，用95%乙醇和无水丙酮反复冲洗

（6）8000r/min离心6min

（7）冷冻干燥，储存于干燥罐中备用

[1]杜秀菊,徐伟,穆红梅,彭向前,冯玮. 桦褐孔菌多糖的药理活性与化学结构研究进展[J]. 食用菌学报,2012,01:100-104.

方法2（金花茶粗多糖的初步分离）

（1）乙醇沉淀

150mL 浓缩液，缓慢加入3倍体积的95％乙醇溶液（边加边搅拌），4℃静置24h，4000r/min 离心10min，得到粗多糖沉淀

（2）透析

少量蒸馏水溶解沉淀，透析（可截留分子量6000～8000）48h；透析内液冷冻干燥得到粗多糖。

[1]林华娟,田晓春,秦小明,路垚,杨基柱. 金花茶多糖单一成分的化学结构特征解析[J]. 食品科学,2013,03:141-146.

方法大同小异

乙醇的体积选择：单因素测试不同体积乙醇的提取率

乙醇的浓度选择：同体积，但一般看到都是95%

单因素测试的还有沉淀时间，浸提温度、时间、次数，料液比

然后在单因素测试的前提下正交实验，选择最佳条件

以水提液中水溶性多糖的产量为标准，选择影响提取菌丝体多糖产量的三个

主要因素：水提时间、提取次数、浸提比（质量比）。每个因素设3 个水平，选

用L9(33)正交表（见表 3.1）。每次取脱脂后的菌丝体25g，提取温度100℃，按

照试验设计进行，提取后过滤，合并滤液，浓缩，醇沉，常规干燥。

[1]李霞. 黑盖木层孔菌多糖化学结构和生物活性研究[D].东北师范大学,2008.

透析袋（d = 44, 32, 24mm，可截留分子量6000～8000，U.S.A）。