病理学技术

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形态计量学(morphometry)含义较广,包括平面测量学和 体视学。体视学(stereology)是应用几何学等数学方法通过二 维平面计算出细胞或组织立体性质三维结构的方法,又称立体 计量学。传统的组织计量学是应用组织细胞的照片、投影图像, 或用目镜标线直接测量特定面积中某组织或有形结构的面积、 比例等,可以统称为图像分析(image anaysis)
2 活体组织检查
即用局部切取、钳取、细针穿刺、搔刮和摘取等手术方法,从 活体内获取病变组织进行病理诊断。
3 细胞学检查 通过采集病变处的细胞,涂片染色后进行诊
断。
(二)实验病理学研究方法
1 动物实验
运用动物实验的方法,可在适宜动物身上复制出某些人类 疾病的动物模型。通过疾病复制过程可以研究疾病的病因 学、发病学、病理改变及疾病的转归。
免疫组织化学
免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合反应来检测和定 位组织或细胞种某种化学物质的一门技术。
常用各类肿瘤的抗原标记物
上皮源性肿瘤标记物 角蛋白(keratin) 上皮膜抗原(EMA) 癌胚抗原(CEA) 桥粒蛋白(desmoplankin) 前列腺特异性抗原(PSA) 甲胎蛋白(AFP)
2
将某种组织或单细胞用适宜的培养基在体外培养,可研究 在各种因子作用下细胞、组织病变的发生和发展。
现代技术病理学
组织化学(特殊染色)
通过应用某些能与组织细胞化学特异性结合的显色试剂,定位 地显示病变组织细胞的特殊化学成分(蛋白质、酶、核酸、糖、 脂),同时又能保存原有的形态改变,达到形态与代谢的结合。
T细胞(CD45RO,UCHL-1)
CD15
CD30
κ链
λ链
细胞外基质抗原 胶原蛋白(collagen) Ⅰ ⅡⅢⅣⅤ 层粘连蛋白(laminin LN) 纤维连接蛋白(FN)
免疫组织化学的作用及其意义 对“未分化”恶性肿瘤的分类 决定转移瘤的原发部位 对不同器官与组织交界处肿瘤进一步分类 对恶性间皮瘤的鉴别 对白血病和淋巴瘤分类 有助于发现微小转移灶 与治疗和预后有关的免疫组化标记物 免疫组化的局限性
随着电镜技术的不断发展,以及与其它方法的综合使用,还出 现了免疫电镜、电镜细胞化学技术、电镜图像分析技术及全息显微 技术等新技术的应用。
肿瘤组织新生血管的扫描电镜观察 箭头指向新生的血管内皮细胞
组织计量学与图像分析
组织计量学(histometry)是用以测量组织的面积及各种 组分如细胞核、细胞浆、血管、纤维组织、骨组织、骨组织形 态比例的方法。
特殊染色在病理诊断工作中的有其独特的作用,诸如鉴定特殊 化学成分、协助肿瘤分类等方面。由于科学技术的不断发展,特殊 染色的种类和方法也在不断提高和发展。尽管目前病理学新技术层 出不穷,并已逐步开展与应用,但很多特殊染色方法如网状纤维染 色、PAS/AB和脂肪染色等在病理诊断工作中仍发挥着重要的作用。
内分泌肿瘤标记物
垂体激素
促肾上腺皮质激素(ACTH)
生长激素(GH)
泌乳素(LH)
促甲状腺激素(TSH)
甲状腺球蛋白降钙素
胰岛细胞相关激素及胃肠道激素
胰岛素、胃泌素生长抑素等
血清素(serotonin)
睾丸酮
人类绒毛膜促性腺激素(hCG)
淋巴、造பைடு நூலகம்系统肿瘤标记物
白细胞共同抗原(LCA)
B细胞(CD19,CD20)
病理学技术进展
病理学的发展经历了大体器官病理学,细胞病理学,超微 病理学,免疫病理学和分子病理学的发展阶段,正在向信息病 理学前进。
国际著名病理学家Karl Lennert教授有句名言:“技术是 病理学之母”。
回顾过去病理学的重大发展,无一不是新技术的发明与应 用的结果。正如程天民院士指出的那样:“病理学的理论和技 术被视为一辆车的两个车轮,缺一不可,互为依存,互相促进, 两者的结合决定着病理学的发展。”
间叶源性肿瘤标记物
波形蛋白(vimentin) 结蛋白(desmin) 肌红蛋白(myoglobin) 肌动蛋白(myoactin) 第八因子相关抗原(factor) 溶菌酶(lysozyme) α-抗胰蛋白酶 α-抗糜蛋白酶 神经源性肿瘤标记物(包括神经内分泌源性)
胶质原纤维酸性蛋白(GFAP) 神经微丝(neurofilament) S-100蛋白 神经元特异性烯醇化酶(NSE) 嗜铬粒蛋白(Chr) 突触素(Syn)
聚合酶链反应
聚合酶链反应,又称无细胞克隆技术,最早由美国Cetus公司人 类遗传研究室Kary Mullis及同事于1985年发现并研制成功的,他因 此荣获了1993年度诺贝尔化学奖。
原位多聚酶链式反应技术是多聚酶链式反应技术的一部分,
后者是在体外酶促反应将某一特定DNA序列进行高效、快速扩增, 它可将单一拷贝的待测核酸以指数的形式扩增而达到常规方法可检 测的水平,但不能进行组织学定位。原位PCR技术是将PCR的高效 扩增与原位杂交的细胞及组织学定位相结合,在冷冻或石蜡包埋组 织切片,细胞涂片或培养细胞爬片上来检测和定位核酸的技术。
原位分子杂交
原位杂交是将分子杂交与组织化学相结合的一项新技术,也称 杂交组织化学 、细胞杂交或原位杂交组织化学。其原理是,含有互 补顺序的标记DNA、RNA片断,即探针,在适宜的条件下与细胞内 的DNA、RNA形成稳定的杂交体。
病理学技术包括
传统病理学(Formalin固定,石蜡切片,HE染色) 现代技术病理学(PCR,原位杂交,流式细胞仪,生物芯片等)
传统病理学
(一)人体病理学的诊断和研究方法 1 尸体解剖检查
尸检或称尸解是验证死者生前诊断的准确性与治疗效果,阐明 死亡原因,探讨肿瘤的发生发展规律,从而促进肿瘤学发展的 重要研究方法之一。
电子显微镜技术
亚细胞结构病理学,超微结构病理学 电镜技术的应用领域很宽,在生命科学领域可用于胚胎及组织
发生学方面的研究和观察,如通过电镜可以了解肿瘤间质新生血管 芽的发生和形态特点。在临床上可用于多种疾病亚细胞结构病变的 观察和诊断,特别是肾小球肾炎及肌病的诊断,以及一些疑难肿瘤 的组织来源和细胞属性判定,如一些去分化、低分化或多向分化肿 瘤的诊断与鉴别诊断;最早关于细胞调亡的形态学描述也是源于电 镜的观察。
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