《 水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法》 江西省

《水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法》

江西省地方标准编制说明

一、立项背景、意义

孔雀石绿（Malachitegreen，MG）是一种三苯甲烷类化学物，可作为杀菌剂应用于水产养殖业，预防和治疗鱼类或鱼卵的寄生虫、真菌或细菌感染，也可作为商业运输的消毒剂使用。在我国很多地方，尤其是河南、湖北等地的水产养殖业和水产品贩运中，孔雀石绿被普遍使用。但是孔雀石绿具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，在水产体内有明显的残留现象，其残留时间达到100天以上。

欧盟法案2002/675/EC规定，动物源性食品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留总量限制为2 μg/kg。日本肯定列表也明确规定在进口水产品中不得检出孔雀石绿残留。我国农业部于2002年12月24日发布235号公告《动物性食品中兽药残留最高限量》，孔雀石绿被列为禁止使用药物，在动物性食品中不得检出。尽管如此，由于作为抗菌药，孔雀石绿药物具有杀菌能力强、抗菌谱广、价格低廉和疗效好等优点，仍然有养殖户在水产养殖中用于预防和治疗鱼类或鱼卵的寄生虫、真菌或细菌感染，残留超标问题一次次困扰着水产品出口企业。目前，水产品中孔雀石绿药物的残留检测主要是液质联用的分析手段，该方法虽然检测结果精确，但需要的仪器设备昂贵，分析方法前处理繁琐、溶剂消耗量大、检测周期长、检测成本高，不适于对大量样品进行低成本快速筛选、现场判定的需要。快速检测技术相对于传统和经典的化学检测与仪器检测而言，其特点是检测所需时间相对较少，对仪器设备等条件要求不高，能携带到交易（生产）现场实施检测，既快速方便，又节约成本。

免疫胶体金快速检测技术被认为是最具应用价值和发展潜力的快速痕量分析技术之一，是二十世纪九十年代新兴的一种新型免疫学检测技术。其反应所需的原料全部或大部分已整合到试剂中，当待测样品加入到样品膜上后，由于微孔膜的毛细管作用，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，整个反应仅需要８～10分钟，滴样后用肉眼直接判断结果无需特殊仪器设备。但是，水产品中孔雀石绿测定的胶体金免疫层析法目前尚没有相应的国家标准、行业标准和我省地方标准。为规范水产品中孔雀石绿的快速检测技术，准确科学地应用到水产品质量市场监督检测工作中，迫切需要制定水产品中孔雀石绿残留检测-免疫胶体金检测技术标准。制定该类标准并推广应用是加强我省水产品安全监测与管理的当务之急工作。该类标准可以促进提升免疫胶体金快速检测试剂质量，规范检测流程，明确方法灵敏度、精密度、交叉反应率等指标，填补现有检测体系中的空白，对满足生产企业、检测机构、

政府执法的需求，具有十分重要的现实意义。

二、项目的主要内容

1、查阅、收集国内外有关水产品中孔雀石绿的现代检测方法文献和标准，制订实验实施计划。

2、检测条件的优化：水产品中孔雀石绿提取、净化、转化等前处理试验条件的优化。

3、测方法的优化，确定方法准确性、精密性、检测下限、交叉反应率等指标。

4、方法学评价：课题工作组会同3～5家单位对方法检测下限、准确度、交叉反应率、精密度进行验证。

5、课题组将实验数据整理归纳，起草《征求意见稿》发给有关单位广泛征求意见。

6、工作组邀请资深专家和从事食品标准化工作的业内人士，对整理后的征求意见稿（预审稿）进行专题预审。收集与会者提出的修改意见。将预审稿整理为送审稿，提交审查。

三、主要起草人及其分工任务

本标准由江西省水产品质量安全检测中心负责制定工作，具体分工如下：

谢世红：标准编制组主持人。负责项目申报，制定方案试验设计，组织实施，执笔起草标准。

欧阳敏：标准编制组第二主持人，负责标准的研究实验及设计、组织实施，参与起草标准。

桑丽雅：参与标准的研究实验，参与起草标准。

花麒、银旭红、王伟萍、刘文珍：标准编制组成员，参与标准的部分实验工作。

四、项目实施进度安排

2012年12月 制定课题组，确定相应分工，调研、收集资料，确定实施方案。

2013年１～3月，进行相关检测试验，确定孔雀石绿残留胶体金检测标准方法拟包括的主要内容和技术参数。

2013年4月：按GB/T1.1-2000标准要求起草标准征求意见稿，撰写《编制说明》及有关材料。

2013年5月，对主要技术内容进行实验室间试验验证。

2013年5月～8月，发给有关单位征求意见，总结意见，修改标准。

2013年9月，提交标准送审材料，根据审查意见，修改标准，提交标准报批稿。

四、保证措施（技术力量等）

技术力量：江西省水产品质量安全检测中心于2004年通过江西省实验室计量认证以来，已从事大量水产品质量安全检测和评价工作，并积极参与地方标准的制定工作，2005年主持制定了《无公害食品 黄颡鱼》地方标准，2008年主持制订《水产品中炔诺酮残留量的测定 液相色谱法》。近年来还多次参与检测方法标准制定过程中的验证工作，积累了一定的工作经验。

本课题组由有标准制订经验、丰富的检测经验和检测技术研究经验的专业人员组成；实验中心现

有进口的高效液相色谱仪和液相-串联质谱等高档检测仪器；多年从事水产品安全检测工作；并收集了大量的孔雀石绿残留量检测方法国际和国外的资料，为新标准的制定奠定了良好的基础。

项目研究协助单位—杭州南开日新生物技术有限公司，具备多年研制免疫胶体金检测装置的检验，对免疫胶体金检测装置的检验标准具有较深的认识，历年类积极参与标准制定工作，2012年参与起草了水产品氯霉素、呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物残留检测免疫胶体金法杭州市地方标准。

五、检测方法试验内容的确定

5.1 检出限试验

分别取空白草鱼、鳙鱼、鲫鱼、南美白对虾、螃蟹、甲鱼、鳜鱼、黄鳝、鲶鱼样本，添加孔雀石绿、隐性孔雀石绿标准品到各种鱼的空白样本中，添加浓度分别为0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0µg/kg；按快速检测方法进行处理，取免疫胶体金试剂条进行测试，每个浓度测定3个重复，验证试剂条的最低检出限，结果见表1、2。

表1 孔雀石绿免疫胶体金试剂条检出限判定 （单位：µg/kg，“＋”代表阳性，“—”代表阴性）