Ag染色的应用

网状纤维染色
网状纤维是非常细而短的纤维，大量堆积时则形成致密的网状，故有网状纤维之称。

疏松组织中网状纤维比较少，它多分布在结缔组织与其它组织交界处，如在上皮组织与结缔组织交界处的基膜内，毛细血管周围以及造血器官，内分泌腺的腺细胞团索和外分泌腺的腺末房周围等处均有丰富的网状纤维。

网状纤维的变化，反映了疾病的发生和发展的不同过程，对疾病的诊断有极大意义。

网状纤维的多少、粗细紧密、疏松或断裂，都是病理检验的重要指标，尤其是在临床病理诊断中，可根据其存在和分布来鉴别癌与肉瘤。

而在HE染色标本上，网状纤维不易显色。

所以网状纤维的组织化学染色，在临床病理诊断上占着相当重要的位置。

染色方法：Gordon-Sweet染色法
1．Gordon-Sweet双氨氢氧化银液：
10%硝酸银水溶液5ml于锥形量杯内，逐滴加浓氨水并随时摇荡。

硝酸银遇到氨水后立即产生沉淀，当加到沉淀物被溶解时，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml。

溶液重新产生沉淀，此时再滴加氨水。

当沉淀恰好溶解后加蒸馏水至50ml。

过虑,贮存于棕色瓶中备用。

2．核固红液：核固红0.5 g，5%硫酸铝液，100 ml，加热溶解，冷却后过虑。

Gordon-Sweet染色步骤
（1）蜡切片脱蜡至水。

（2） 0.5%酸化高锰酸钾液5 min。

（3）蒸馏水洗。

（4）2%草酸漂白2min。

（5）流水充分冲洗后蒸馏水洗。

（6）2 %硫酸铁胺液媒染10 min。

（7）蒸馏水洗3次。

（8）双氨氢氧化银液30秒-1 min。

（9）蒸馏水洗3次。

（10）10%甲醛1 min。

（11）流水充分冲洗后蒸馏水洗。

（12）0.2%氯化金液调色 2 min。

（13）蒸馏水洗。

（14）5%硫代硫酸钠液固定 2 min。

（15）流水充分冲洗。

（16）核固红液染10-12 min或1%中性红染5min。

（17）流水冲洗。

（18）95%、无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维灰红色，核呈红色。

应用：
（1）癌与肉瘤的鉴别：在网状纤维染色下可清楚显示出肉瘤每一个细胞周围有网状纤维围绕，或似为团状或巢状的瘤组织，但团巢内仍有破碎的网状纤维，癌显示为明显巢或索状，巢内无网状纤维。

（2）骨基质与浓缩的分泌物、血浆或水肿液的鉴别：骨基质内有网状纤维，而后者无。

（3）炎症细胞与癌细胞的鉴别：在支气管活检中有时挤压较重，一些深染的细胞挤压成团，难以判断是受挤压的炎症细胞。

这种病例染网状纤维有利于鉴别，炎症细胞不成巢，小细胞癌可有巢状或索状结构。

（4）坏死与死后自溶的鉴别：在胰腺是生前坏死还是死后自溶有时很难鉴别，染网状纤维，前者网状纤维支架破坏较严重，结构塌陷，而后者虽然死后自溶严重，但网状纤维支架结构常可保存。

（5）血管性肿瘤的鉴别：有时血管内皮细胞瘤与血管周围细胞瘤常规染色较难鉴别，网状纤维染色，可显示清楚的血管结构，看清肿瘤细胞与血管关系有利于鉴别。

内皮细胞性肿瘤，肿瘤位于血管壁的网状支架内，而外周细胞则围绕着血管壁或与之呈放
射状排列。

（6）肝硬化及慢性肝炎肝细胞碎片状坏死或纤维化的鉴别：a．慢性活动性肝炎坏死灶有时较难辨认，染网状纤维显示局部有网状支架的破坏与崩解，结合HE切片较易判断小灶状坏死。

b．慢性活动性肝炎轻度纤维化，在网状纤维染色下较易判断。

c．慢性淤血性肝硬变有时较难判断，网状纤维较易观察中央静脉及小叶下静脉通道上的网状纤维增生。

增生较明显，有反包围现象，形成假小叶结构，就可诊断淤血性肝硬变。

（7）萎缩性胃炎的诊断：在HE染色胃粘膜有无萎缩较难判断，网状纤维染色可较清楚显示胃粘膜正常结构破坏，间质纤维增生，有助于胃粘膜萎缩的诊断。

（8）有助于癌浸润的诊断，有些上皮性肿瘤是否早期突破基底膜形成浸润，HE染色难以确诊，而网状纤维染色可较清楚显示基底膜，较易确定基底膜有无早期浸润破坏现象。

（9）脑内原发瘤与转移瘤的鉴别：脑内绝大多数肿瘤网状纤维很少，只有血管周围有少量网状纤维，而转移癌及肉瘤都有明显的网状纤维，故有利于鉴别。

（10）非干酪性结核与结节病的鉴别：后者结节内及结节周围较早出现明显的网状纤维，观察此有利于二者鉴别。

（11）淋巴结病变的判断：
a．良性滤泡性反应性增生与滤泡性淋巴瘤鉴别，染网状纤维后显示：后者滤泡间网状纤维减少且有受挤压现象，前者网状纤维
增加且较紊乱。

b．判断淋巴结的正常结构：有时HE切片较难判断正常结构是否完整，染网状纤维。

皮髓质及窦的结构较清楚，若为炎症或肿瘤性破坏则较难辨认。