试 验 结 果 报 告

试验结果报告

申请者奥奈特株式会社

验体臭氧水生成装置[臭氧水浓度4ppm]题目病毒非活性化试验

使用2009年2月6日向日本食品分析中心提供的

上记验体进行的试验结果如下。

本试验报告在用于刊登时，请事前务必征得本中心的同意。

病毒非活性化试验

1申请者

奥奈特株式会社

2验体

臭氧水生成装置[臭氧水浓度4ppm]

3试验目的

使用利用验体制作的臭氧水对流感病毒进行非活性化试验

4试验概要

使用验体由自来水制作试验用臭氧水后，迅速将流感病毒浮游液添加入臭氧水，进行混合。在室温的情况下发生反应1分钟后测定病毒的感染能力值。另外，臭氧水的制作由申请者进行。

5试验结果

结果如表-1所示表

-1病毒感染能力值的测定结果TCID50：median tissue culture infections dose ，50%组织培养感染量

※1洗净液1ml 的TCID 50的对数值

※2使用验体由自来水制作的臭氧水

对照①：自来水（大阪府茨木市）

对照②：精制水

开始时：测定反应后对照②的TCID 50，作为开始值

试验温度：室温

<1.5：未检测出

试验病毒对象Log TCID 50/ml ※1

开始时1分后

流感病毒

验体※27.5＜1.5

对照①对照②7.57.5 6.0

7.0

6试验方法

1）试验病毒

流感病毒A 型（H1N1）

2)使用细胞

MDCK(NBL-2)细胞ATCC CCL-34株[大日本制药株式会社]

3）使用培养壤

①细胞增值培养壤

使用向Eagle MEM 培养壤[日水]①[日水制药株式会社]注入10%的牛胎仔血清。

②细胞维持培养壤

使用以下构成的培养壤。

Eagle MEM 培养壤[日水]①

1000ml 10%NaHCO 3

14ml L-谷氨酰胺(30g/L)

9.8ml 100×MEM 用维他命液

30ml 10%蛋白

20ml 0.25%胰蛋白酶20ml

4）病毒浮游液的制作

①细胞的培养

使用细胞增殖培养壤，在组织培养用三角瓶内单层培养使用细胞。②病毒接种

单层培养后从三角瓶内去除细胞增值培养壤，进行试验病毒接种。然后，加入细胞维持培养壤在温度为37℃±1℃的碳酸瓦斯培养器（CO 2浓度：5%）内培养1-5日。

③病毒浮游液的制作

培养后，使用倒立位相差显微镜观察细胞的形态，确认细胞发生了形态变化（细胞变性效果）。然后，对培养液进行远心分离（3000r/min ，10分）

后的液体作为病毒浮游液进行试验。

财团法人

日本食品分析中心

5)试验操作

使用验体由自来水（大阪府茨木市）制作试验用臭氧水后，迅速将流感病毒浮游液添加入臭氧水，进行混合。在室温的情况下发生反应1分钟后测定病毒的感染能力值。

另外，使用自来水及精制水进行同样的试验，进行对照。但是，对于精制水在开始时也进行了测定。

6）测定病毒的感染能力值

使用细胞增值培养壤，在组织培养用微滴收集板（96穴）内进行

单层培养后，去除细胞增殖培养壤后分别加入0.1ml 的细胞维持壤。然后，每4个穴内用0.1ml 作用液的稀释液进行接种，在温度为37℃±1℃的碳酸瓦斯培养器（CO 2浓度：5%）内培养4-7日。培养后，使用倒立位相差显微镜观察细胞是否有形态变化（细胞变性效果），根据Reed-Muench 法计算出组织培养感染量（TCID 50）换算出作用液1ml 单位病毒感染值。

以上

财团法人

日本食品分析中心

财团法人日本食品分析中心