氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒说明书

氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）说明书【产品名称】
通用名称：氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）
商品名称：氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Requirement for Oxidized Low Density Lipoprotein Detection Kit （ELISA）
【包装规格】
96人份/盒；48人份/盒。

【预期用途】
本品为体外定量检测血液中氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low Density Lipoprotein，OxLDL）含量的试剂。

【检验原理】
本试验采用双抗体夹心直接酶联免疫法。

用抗人OxLDL抗体预包被微孔板，使样品中的OxLDL与固相化在微孔板上的抗人OxLDL抗体结合后，将未反应的组分洗脱，再加入酶标记抗体进行酶底物显色，在450nm波长下测定光吸收值，并根据在同一微孔板内反应的校准品制作的剂量-反应曲线，求得样品中OxLDL的含量。

【主要组成成份】
见表1。

表1 本试剂盒主要组成成份
编号组成规格数量
1 固相抗体微孔板96孔/ 48孔1块
2 OxLDL校准品0，1，2，4，8，16U/ml 各1瓶
3 质控物高、低各1瓶
4 酶标记抗体100μl1支
5 浓缩洗涤液（21×）30ml 1瓶
6 浓缩稀释液（5×）10ml 1瓶
7 样品反应液12ml 1瓶
8 底物液A 6ml 1瓶
9 底物液B 6ml 1瓶
10 终止液6ml 1瓶
【储存条件及有效期】
1、储存条件：2~8℃避光保存。

2、有效期：12个月。

3、试剂复溶及开瓶/开袋后储存条件及有效期见表2。

表2 试剂盒组份复溶、配制及开瓶/开袋后储存条件及有效期
组份效期及储存条件固相抗体微孔板（开袋后未使用板条）1个月，2~8℃，于封口的铝箔袋中OxLDL校准品（复溶后）1周，2~8℃
质控物（复溶后）1周，2~8℃
酶标记抗体（稀释后）1天，2~8℃，避光
洗涤液（1×）1个月，2~8℃
稀释液（1×）1个月，2~8℃
底物液（配制后）新鲜配制后使用
酶标记抗体（未稀释）12个月，2~8℃，避光洗涤液、稀释液（未稀释）12个月，2~8℃
底物液A、B 12个月，2~8℃
样品反应液、终止液12个月，2~8℃
【适用仪器】
1、带有单波长检测能力的酶标仪，有450nm滤光片，增益应小于20。

2、微孔板清洗器。

【样本要求】
采集禁食12小时后空腹血，分离血浆或血清。

如采用血浆样本建议使用EDTA抗凝血浆。

样品在2~8℃可存放一周。

由于冻融对检测结果影响较大，故待测样品不能冻存。

严重溶血和微生物污染的样本不能使用。

【检验方法】
1.试剂配制：
(1) 测定前10分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

(2) 将10ml浓缩稀释液（5×）用40ml纯化水稀释至1×。

(3) 将30ml浓缩洗涤液（21×）用600ml纯化水稀释至1×。

(4) 校准品的复溶：在OxLDL校准品（0、1、2、4、8、16U/ml）及高、低质控物中分别加入1ml纯化水进行复溶，静置3分钟，摇匀。

(5) 酶标记抗体工作液：取适量酶标记抗体，用稀释液做125倍稀释，如取80μl酶标记抗体，加入9920μl稀释液，混匀。

(6) 底物液：取等体积的底物液A和底物液B，充分混匀，临用前配制，如取5ml底物液A加5ml底物液B。

2. 洗板方法：
(1) 自动洗板：要求每孔注入洗涤液350μl，注入与吸出间隔15~30秒。

(2) 手工洗板：倾去孔内液体，每孔加洗涤液350μl，静止30秒后倾去洗涤液，在吸水纸上拍干。

3．测定步骤：
(1) 稀释样品：用稀释液将样品稀释4倍。

(2) 准备微孔板：撕开密封袋，取出微孔板，去除封板胶纸，用洗涤液洗涤3次，备用。

(3) 加样：将校准品、质控物和待测样品加入微孔板，25μl/孔，再加入反应液，100μl/孔，37℃下孵育2小时。

可参考表3所示加样顺序进行加样。

表3 加样顺序示例
孔样品孔样品
1A-B 校准品0 U/ml 3A-B 待测样品
1C-D 校准品1 U/ml 3C-D 待测样品
1E-F 校准品2 U/ml 3E-F 待测样品
1G-H 校准品4 U/ml 3G-H 待测样品
2A-B 校准品8 U/ml 4A-B 待测样品
2C-D 校准品16U/ml 4C-D 待测样品
2E-F 质控物（低）4E-F 待测样品
2G-H 质控物（高）4G-H 待测样品
(4) 洗板5次。

(5) 加入酶标记抗体工作液，100μl/孔，37℃下孵育1小时。

(6) 洗板5次。

(7) 加入底物液，100μl/孔，37℃下避光孵育15分钟。

(8) 加入终止液，50μl/孔。

(9) 测定光吸收值：启动酶标仪，于终止反应后30分钟内读数，测定波长450nm。

4. 试验过程中应注意：
(1) 严格控制反应时间。

(2) 在加入试剂时应沿着孔壁加入，以免外溅。

(3) 配好的底物液要避光。

(4) 酶标记物含有甘油，较粘稠，要小心加入以确保结果精确。

5．质量控制：
每个微孔板上至少采用两个浓度的质控物进行质量控制，以确保每个微孔板测定结果的可靠性。

(1) 0U/ml校准品的光吸收值应≤0.3。

(2) 质控物的测定值在允许范围内。

(3) 重复样本的测定结果变异系数在15%以内。

如不能同时满足上述条件，则该试验结果无效，需重新进行测定。

6. 测定结果的计算
(1) 计算每个校准品、质控物和样品的平均吸光值。

(2) 以0U/ml的校准品为空白对照，校准品、质控物和样品的光吸收值应减去空白对照的光吸收值。

(3) 使用对数线性图纸，以校准品浓度的对数为横轴，光吸收值的对数为纵轴，绘制OxLDL 浓度-光吸收值双对数剂量-反应曲线。

(4) 根据稀释的待测样品光吸收值从剂量-反应曲线上查出稀释样品的OxLDL浓度。

(5) 样品中OxLDL的最终浓度等于稀释样品的浓度乘以稀释倍数。

(6) 如果样品的光吸收值高于16U/ml或低于1U/ml校准品的光吸收值，可适当延长曲线进行计算，外推因子（Extrapolation Factor）不超过2。

(7) 本公司使用BioTek EL800型酶标仪配套的KC4（V ersion #2.0，Rev #17）数据分析系统对试验结果进行分析。

范例如下所示：
表4 校准品和样品测定结果
复孔光吸收值平均光吸收值OxLDL浓度校准品0 0.078 0.079 0U/ml
0.080
校准品1 0.206 0.210 1 U/ml
0.214
校准品2 0.322 0.320 2 U/ml
0.318
校准品3 0.513 0.521 4U/ml
0.529
校准品4 0.917 0.888 8 U/ml
0.859
校准品5 1.542 1.563 16U/ml
1.584
待测样品1 0.462 0.463 稀释样品浓度：3.41 U/ml
(4倍稀释) 0.464 样品终浓度：13.64 U/ml
待测样品2 0.725 0.734 稀释样品浓度：6.28 U/ml
图1 OxLDL校准品剂量-反应曲线
横轴：校准品浓度对数，纵轴：相应光吸收值对数
表4和图1为范例剂量-反应曲线，仅供参考，不应用来计算任何值。

【参考值（参考范围）】
OxLDL正常值参考范围为：≤45.20U/ml。

可疑值范围为：36.90 U/ml~47.80U/ml。

诊断临界点为：≥47.70U/ml。

【检验结果的解释】
样品的保存、试验温度、各步孵育时间等都可能会影响检测结果，故请严格按说明书要求进行控制。

【检验方法的局限性】
通过其他方法测得的OxLDL浓度与本品测定结果不具有直接的可比性。

【产品性能指标】
1. 准确性
试剂盒校准品与相应浓度的企业参考标准品同时进行分析测定，用双对数模型拟合，两条剂量-反应曲线不明显偏离平行（t测验）；以企业标准品为对照品，试剂盒校准品的实测效价与标示效价的比在0.8-1.2范围内。

2. 剂量-反应曲线的线性
在1.0-16.0 U/ml范围内用双对数模型拟合，本品剂量-反应曲线相关系数（R）不低于0.99。

3. 精密性
本品分析内精密性：CV%不高于15%；分析间精密性：CV%不高于20%。

4. 最低检出量
本品最低检出量不高于0.50 U/ml。

5. 质控物测定值
本品质控物（高、低）测定值均在标识值±20%范围内。

【注意事项】
1．本品仅用于体外诊断。

2．不同批号的校准品和质控物不能混用。

3．底物液A、底物液B和配制好的底物液要避光保存与使用。

4．底物液A中含有四甲基联苯胺（Tetramethyibenzidine，TMB）。

含TMB的试剂在实验室使用中会诱发其它反应，应注意防护。

5．终止液中含有2mmol/L的硫酸。

含硫酸的试剂危险，会引起烧伤，注意不要溅到眼睛、皮肤或衣服上，一旦接触应立即用足量的水清洗眼睛和皮肤。

6. OxLDL校准品、质控物主要成分为氧化低密度脂蛋白，为从正常人血浆中提取的低密度脂蛋白，采用过渡金属离子氧化法氧化后制备而成。

应将本品作为具有潜在的传染性试剂处理，按良好的实验室规范以及疾病预防和控制中心（CDC）的有关要求进行防护。

7. 在使用本品过程中产生的废液、废包装材料等应按国家相关规定进行处理。

【生产企业】
生产企业名称：成都华神生物技术有限责任公司
注册地址：成都双流西航港开发区常乐村（锦华路2段3号）
生产地址：成都双流西航港开发区常乐村（锦华路2段3号）
邮政编码：610225
电话号码：86-28-66537310 传真号码：86-28-66537369
网址：
【医疗器械生产企业许可证编号】
川食药监械生产许（2007）第0026号
【医疗器械注册证书编号】
川食药监械(准)字2011第2400039号
【医疗器械注册产品标准编号】
YZB/川0033-2011
【说明书批准及修改日期】
批准日期：2011年4月1日。