铁皮石斛茎段组织培养技术研究

铁皮石斛茎段组织培养技术研究

作者：戚华沙潘梅黄赛王景飞吕德任姜殿强

来源：《安徽农学通报》2013年第13期

摘要：以铁皮石斛丛生芽作为外植体，通过研究影响铁皮石斛生长的主要因素，筛选铁皮石斛茎段组培快繁的适宜培养基，总结实用的快繁方法。结果表明，以MS培养基+6-BA 0.5mg/L+ NAA 0.2mg/L+30g/L糖+6.5g/L琼脂+0.5g/L活性炭，添加10%的香蕉泥作为天然附加物，pH值5.8，是铁皮石斛丛生芽增殖的最佳培养基；以MS+IBA 1.5mg/L+NAA 1.5mg/L为铁皮石斛生根诱导的最佳培养基。通过实验总结出铁皮石斛茎段组培快繁技术，为铁皮石斛的资源保护和应用推广提供重要的科学依据。

关键词：铁皮石斛；组织繁殖；增殖分化；壮苗生根

中图分类号 S567.239 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）13-32-03

Study on Tissue Culture Techniques for Stem Segment of Dendrobium officinale

Qi Huasha et al.

（Garden Flower Research Institute of Hainan Academy of Agricultural Sciences，Haikou 571100，China）

Abstract：The regeneration methods of bud clumps was adopted to establish a rapid technique system of propagation in Dendrobium officinale in this experiment. The result showed that the best multiplication medium is MS+ 6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+30g/L sugar+6.5g/L agar+0.5g/L activated carbon，add 10% banana mud，pH5.8.And MS+IBA 1.5mg/L+NAA 1.5mg/L for the best rooting medium of Dendrobium candidum. This techniques of tissue culture for Dendrobium officinale provided an important scientific basis for resource protection and application.

Key words：Dendrobium officinale；Tissue culture；Proliferation；Rooting

鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）为兰科多年生附生草本植物，长于海拔达1 600m的山地半阴湿的岩石上，并常与苔藓植物伴生，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，一般在-5℃以下的低温停止生长[1-2]。铁皮石斛具有极高的药用价值和经济价值，其新鲜茎或干燥茎均可入药，是我国最常用传统药材与中成药的原料药。其味甘淡，性微寒，用于治疗阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚弱，目暗不明等症，为中国十大仙草之一。现代药理研究表明，铁皮石斛具有降血糖、增强抵抗力的功效[3]。由于生长条件特殊和分布局限，以及长期采挖，铁皮石斛的自然资源濒临枯竭，供应紧缺，目前铁皮石斛已被列为国家重点保护药用植物、中国珍稀濒危二级保护植物和世界二类保护植物[4]。铁皮石斛自然繁殖率很低，采用传统的分株繁殖法，繁殖速度比较慢，且植株生长不一致，抗病虫害能力差[5]，利

用组培快繁技术繁殖试管苗，不仅是解决铁皮石斛野生资源紧缺的有效方法，也对该物种的种质资源保护起到积极的作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料本实验用的铁皮石斛采自于海南省五指山市五指山山上，采回后栽种在海南省农业科学院兰圃实验园用于实验。

1.2 方法

1.2.1 灭菌及接种方法选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株，用刀片切取长为3～5cm的顶芽，剥去节上叶片，放置于洗洁精溶液中摇荡2min，再用自来水冲洗；沥干水后，在超净工作台上，先用75%的乙醇浸泡15s，无菌水冲洗3次，再用0.1%升汞浸泡14min，用无菌水冲洗5次。每次取一块茎段，切除两边顶端，将茎段放置诱导培养基上，诱导分化产生丛生芽，取丛生芽做以下实验。

1.2.2 培养条件本实验的各个培养阶段中，培养物均置于培养光照强度为1 500～2 000lx 日光灯照明条件下，培养温度为25℃，每天光照10～12h[6]。

1.2.3 培养基配制方法本实验中所采用的各种培养基均按照植物培养的常规方法配制和灭菌。

1.3 试验设计

1.3.1 不同浓度的6-BA+NAA0.2mg/L对铁皮石斛丛生芽增殖的影响本试验在MS基本培养基中分别添加6-BA0.1、0.5、1.0、1.5、

2.0、2.5、

3.0mg/L和NAA0.2mg/L，选取长势一致的丛生芽接入上述7种培养基，每个处理20袋，每袋8株，即每个处理160株，50d统计增殖系数，观察生长状况。

1.3.2 天然附加物对铁皮石斛丛生芽增殖的影响在MS基本培养基中分别加入椰子水、香蕉泥、马铃薯泥（香蕉泥用新鲜果实打浆而成，马铃薯泥用新鲜块茎去皮打浆而成）各10%，切取丛生芽接种到继代培养基上进行继代培养，每个处理20袋，每袋8株，即每个处理160株，50d统计增殖系数，观察生长状况。

1.3.3 不同浓度的活性炭对铁皮石斛丛生芽的增殖影响本实验在MS+6-

BA2mg/L+NAA0.2mg/L+10%香蕉泥的基本培养基中分别添加0.3g/L、0.5g/L、1.0g/L、

1.5g/L、

2.0g/L的活性炭，选取长势一致的丛生芽接入上述5种培养基及对照组，每个处理20袋，每袋8株，即每个处理160株，50d统计增殖系数，观察生长状况。

1.3.4 不同生长素对铁皮石斛生根诱导的影响以植株高达2～3cm的无根袋苗转接到生根培养基上作为生根培养，培养条件同上。选择不同配比浓度的两种生长素作为铁皮石斛生根培