铁皮石斛组织培养
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养.
铁皮石斛组织培养研究进展1、1 种子萌发1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。
曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。
罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。
1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。
2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。
6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。
KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。
ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。
1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。
1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。
曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2 原球茎增殖2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。
铁皮石斛种苗组培实施方案
铁皮石斛种苗组培实施方案铁皮石斛（Dendrobium）是一种重要的兰科植物，具有多种药用价值，被广泛用于中药材生产和养生保健。
其种苗组培是一种快速繁殖的方法，可以大大提高植物的繁殖效率和质量。
下面将介绍铁皮石斛种苗组培的实施方案。
一、材料准备1. 无菌种子：选择外观完整、无病害的铁皮石斛种子。
2. 培养基：配制适合铁皮石斛生长的培养基，包括营养物质、植物生长调节物质等。
3. 器具：培养瓶、无菌操作台、无菌手套、无菌培养室等。
二、种子消毒1. 将铁皮石斛种子浸泡于75%酒精中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗3次。
2. 将种子浸泡于含有0.1%过氧化氢的无菌水中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗3次。
3. 最后将种子浸泡于含有0.1%漂白粉的无菌水中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗3次。
三、组培操作1. 在无菌操作台上进行操作，先将培养瓶中的培养基加热至121摄氏度，压力15磅，持续20分钟，使其无菌化。
2. 将消毒处理好的种子移入无菌培养瓶中，每瓶放入适量的种子。
3. 将培养瓶密封，放入无菌培养室中，温度控制在25-28摄氏度，光照强度控制在3000-5000勒克斯，光照时间为12小时。
四、生长管理1. 定期观察种苗生长情况，发现有病虫害立即进行处理。
2. 每隔一周更换一次培养基，保持培养基的新鲜和养分充足。
3. 控制培养室的温度、湿度和光照，提供良好的生长环境。
五、移栽1. 当种苗长到一定高度时，可以进行移栽。
将种苗移入含有适量营养物质的培养基中，继续进行培养。
2. 移栽后继续进行生长管理，直至种苗长成成熟植株。
通过以上实施方案，可以实现铁皮石斛种苗的组培繁殖，提高植物繁殖效率，为铁皮石斛的种植生产提供了可行的技术方案。
希望这些内容对您有所帮助。
铁皮石斛
• 进行栽种，效果较好。试管苗栽后 宜放在荫棚内，荫蔽度要求60％～ 80％。石斛喜湿润，怕积水。积水 会使根茎腐烂，叶片脱落而死。当 移栽苗根伸长后，每月用MS大量 元素1000倍稀释液喷施追肥，促 进生长发育。
在国内，石斛组织培养的研究相对其它植 物来说起步较晚，与国外相比还有一定的 距离，但无论是在国内还是国外，石斛花 药培养，原生质体培养等尚未见报道。可 喜的是国内的组织培养技术已相当成熟， 这为石斛组织培养的研究提供了很好的技 术保证。国内有不少人研究石斛的组织培 养，此间重要的是解决组培苗的栽培问题， 使石斛组织培养技术更好地为生产服务。
实验过程
• 将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件下切 成至少带有一个茎节地茎段，接种于诱导 培养基中诱导出芽，将芽再诱导出原球茎， 原球茎再分化，再壮苗，便可将生长健壮 地植株移植
培养基
选择适宜的培养基对石斛的分化至关重要， 常用的培养基为MS。 （1）芽增殖培养基：MS＋NAA0.1～0.5毫 克／升＋BA0.5～2.0毫克／升；（2）壮苗 培养基：MS无激素培养基；（3）生根培养 基：1/2MS+IBA0.1毫克／升
• 出管取苗要小心操作，不能折断根部。从 试管取出的苗须洗净附着在其根部的琼脂， 然后3～5株一丛种植。石斛苗具有群体抗 性作用，丛栽比单株栽培效果好。春季气 温逐渐回升，有利于试管苗适应自然环境， 最宜移栽试管苗。
石斛试管苗可直接栽在树干或岩石 上，也可以盆栽。在阴凉潮湿、长 有苔藓的树干和岩石上，栽种石斛 成活率高。盆栽选用木屑、吸水石、 砂岩、片麻岩等作基质，5℃ ，光照强度2000lx ，光照时 间10h/d
生根培养
• 将增殖培养产生的2 cm以上的小苗放在生 根培养基中进行生根培养，以长成完整植 株
铁皮石斛组织培养课件
根据培养的材料和目的，组织培养可以分为胚胎培养、 愈伤组织培养、器官培养和细胞培养等类型。
组织培养技术的发展历程
01 19世纪中期
植物组织培养的萌芽期，科学家开始尝试将植物 组织放在人工控制的条件下进行培养。
02 20世纪初
植物组织培养技术的初步形成，科学家发现植物 细胞具有全能性，能够发育成完整的植株。
开花时，铁皮石斛会形成黄绿色的花朵，并散发 03 出淡淡的香气。
铁皮石斛的生长环境
铁皮石斛主要生长在温暖湿润的环境中，如热带 01
雨林、季雨林等。
它需要附生于树木或岩石上，并需要较高的空气 02
湿度和适度的光照。
02 适宜的生长温度为15-25℃，且需要保持一定的 空气流通，以斛具有滋阴清热、生津止渴的功效，常用 于治疗热病伤津、口渴咽干等症状。
它还具有益胃生津、滋阴清热的功效，对于胃脘 痛、上腹胀痛等症状也有一定的疗效。
此外，铁皮石斛还具有一定的抗肿瘤、抗氧化、 增强免疫力等作用。
组织培养技术概述
组织培养的定义与分类
组织培养的定义
组织培养是一种在人工控制的条件下，将植物的细胞、 组织或器官进行离体培养，使其生长、发育的技术。
02
快速繁殖
通过组织培养技术可以实现铁皮石斛的快速繁殖， 提高种苗质量和产量，满足市场需求。
铁皮石斛组织培养的实践操 作
实验材料与设备
实验材料
铁皮石斛幼苗、培养基质（如珍珠岩、 蛭石等）、活性炭、植物生长调节剂 等。
实验设备
超净工作台、培养皿、玻璃瓶、烧杯、 量筒、天平、灭菌锅、PH试纸等。
实验操作流程
培养条件
将接种好的培养皿放入恒温培养箱 中，设定适宜的温度和光照时间， 保持一定的湿度。
铁皮石斛组织培养培训材料
技术要求高、成本较高、可能存在变 异和遗传稳定性问题等。
02
铁皮石斛组织培养基本流程
外植体的选择与处理
外植体的选择
选择健康、无病虫害的铁皮石斛植株作为外植体，如茎尖、 叶片等。
外植体的处理
对外植体进行清洗、消毒、切割等处理，以去除表面污垢和 微生物。
无菌操作技术
01
02
03
无菌操作环境
在无菌操作室内进行组织 培养操作，确保环境清洁 无菌。
光照与温度控制
总结词
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要环境因素。
详细描述
适宜的光照强度、光照时间和温度能够促进铁皮石斛组织的生长和分化。在不同的生长阶段，需要调整光照和温 度条件，以满足铁皮石斛生长的需求。
激素的种类与浓度
总结词
激素的种类和浓度是调控铁皮石斛组织培养的关键因素。
详细描述
在铁皮石斛组织培养过程中，需要添加适量的激素，如生长素和细胞分裂素，以促进细胞的分裂和生 长。同时，激素的种类和浓度也需要根据实验需求进行选择和调整，以达到最佳的组培效果。
4. 将接种好的培养皿 放置在适宜的温度和 湿度条件下进行培养。
实验操作步骤与注意事项
注意事项 1. 在操作过程中要保持无菌环境，避免交叉污染。
2. 取材时要选择健康、无病虫害的植株，并确保取下的组织健康无病。
实验操作步骤与注意事项
01
3. 培养基的成分和pH值要适宜， 以保证组织的正常生长。
02
病虫害防治
总结词
病虫害是影响铁皮石斛组织培养的重要 因素，防治病虫害是组培过程中的重要 环节。
VS
详细描述
在铁皮石斛组织培养过程中，可能会受到 细菌、真菌等病原体的侵害，以及害虫的 侵害。为了防治病虫害，需要定期检查组 培苗的生长情况，及时发现并处理病虫害 ，同时采取生物、化学、物理等多种防治 方法进行综合防治。
铁皮石斛的组织培植
铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。
由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。
本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。
材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。
2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。
- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。
过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。
使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。
2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。
3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。
4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。
每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。
结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。
在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。
值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。
培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。
同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。
结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。
通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。
这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。
铁皮石斛的组织培养技术
铁皮石斛的组织培养技术简介铁皮石斛（Scientific name: Dendrobium officinale），是一种珍贵的药用植物，在中医药中有着悠久的历史和广泛应用。
铁皮石斛的组织培养技术是指利用无菌培养方法，通过细胞分裂和再生，培育大量优质的植株，以满足人们对铁皮石斛的需求。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养技术的基本步骤和注意事项。
步骤1. 选择合适的外植体材料：铁皮石斛的外植体材料通常选取新鲜的茎段、叶片或花轴，并确保这些材料来自无病虫害的植株。
2. 表面消毒处理：将收集到的外植体材料进行表面消毒处理，常用的消毒剂包括漂白粉和酒精。
消毒时间和浓度应根据不同的外植体材料进行调整。
3. 建立无菌培养基：制备含有适当激素和营养物质的无菌培养基。
常用的基本培养基是MS培养基和B5培养基。
可以根据实验需要调整培养基的成分和浓度。
4. 培养和增殖：将表面消毒后的外植体材料放入含有适当培养基的培养瓶中，并置于暗室或恒温箱中进行培养。
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要因素，应根据植物的生长性进行调控。
5. 分化和再生：通过植物激素的投入和适当调控培养条件，促使外植体材料分化和再生成优质的铁皮石斛植株。
这一步骤往往需要持续几个月到数年的时间。
注意事项1. 保持无菌条件：组织培养需要在无菌条件下进行，以避免外源病原微生物的污染。
实验器具、培养基和操作环境必须经过严格的消毒和无菌处理。
2. 控制培养基成分和浓度：培养基的成分和浓度对植物的生长和分化起着重要的影响，需要根据不同的外植体材料和培养阶段进行合理的调整。
3. 确保适当的光照和温度：铁皮石斛对光照和温度有一定的要求，光照不足或温度过高都会影响植物的生长和分化。
应根据植物的生理特性，设置合适的光照和温度条件。
4. 定期检查和处理：组织培养过程中，应定期检查植株的生长状态和培养基的污染情况，并采取适当的措施处理。
需要及时除去培养瓶内的污染物，以保证植株的健康生长。
铁皮石斛组织培养
铁皮石斛的组织培养技术路线
外植体
培养基
丛生芽
生根发育
完整植株
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初代培养基的设计 诱导培养基
MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】
MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液：
BA10ml,NAA5ml
取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： NAA2~5ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g
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生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在 生根培养基中于适宜条件下培养，约1~2 周后即生根，以长成完整植株。
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用洗洁剂 清洗后置 流水下冲 20~30 min。
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在超净工作台上 用75%的酒精消 30s0.1%HgCl2 灭菌5min后，用 无菌水冲洗5~6 次，放入垫有干 无菌滤纸的培养 皿中，以吸去多 余水分，茎段两 端各切 0.2~0.3cm。
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接种实验
一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养
铁皮石斛 组织培养
B1小组准备素材
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铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生
于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上， 喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。 一般均能耐－5℃的低温。石斛可分为黄草、 金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极 品，它因表皮呈铁绿色而得名。
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铁皮石斛的组织培育
铁皮石斛的组织培育简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种常见的地生兰花，被广泛用于中药材的生产和兰花观赏。
由于其极高的药用价值和观赏价值，铁皮石斛的组织培育技术日益受到关注。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养原理、培育步骤以及培育过程中需要注意的问题。
组织培育原理铁皮石斛的组织培育是通过体细胞分裂和再生的方法，通过悬浮培养、离体培养和液体培养等技术手段，将铁皮石斛的一部分组织或细胞培养繁殖，获得大量的无性繁殖植株。
组织培育的原理基于植物的细胞分化和再生能力，通过合适的培养基和生长因子的添加来促进细胞分裂和再生。
组织培育步骤1. 选择合适的母株：选择生长旺盛、健康无病虫害的铁皮石斛母株作为组织培育的起始材料。
2. 材料消毒：将选取的铁皮石斛茎段进行表面消毒，以防止外来病菌的污染。
3. 切割茎段：将消毒后的茎段切割成1.5-2.0厘米的小段，保证每个小段都有叶鞘和芽。
4. 建立悬浮培养：将切割好的茎段转移到含有适量植物生长因子的悬浮培养基中，使其暴露在光照下，利用悬浮培养的方式促进茎段细胞分裂和再生。
5. 培养条件控制：控制培养温度在25-30摄氏度，光照强度在2000-3000勒克斯，通风和湿度适宜。
6. 培养时间：一般培养时间为6-8周，待茎段上出现新芽后再进行下一步操作。
7. 幼苗分离：将培养好的茎段转移到含有植物生长调节剂的培养基中，促进幼芽的生长，待幼苗生长到一定程度后进行分株。
注意事项- 消毒环节非常重要，一定要保证茎段的无菌状态，以防止病菌和病毒的感染。
- 培养环境的温湿度要适宜，过高或过低的温度、过干或过湿的环境都会影响铁皮石斛的组织培育效果。
- 选择合适的培养基和生长调节剂，可以促进茎段的细胞分裂和再生，提高组织培育的成功率。
- 铁皮石斛的组织培育需要耐心和细心，注意观察幼嫩茎段的生长情况，及时调整培养环境和添加必要的营养物质。
结论铁皮石斛的组织培育是一种有效的繁殖方法，它可以大幅提升植物繁殖速度和质量。
铁皮石斛组培讲义
培养基附加物： 培养基附加物： （1）天然添加物
在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、绿豆芽汁、 在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、绿豆芽汁、 苹果汁仁、 苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系 的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。 的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。
（2）炭源
铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的 生长，能使根系长得更加粗壮闭。 生长，能使根系长得更加粗壮闭。唐桂香等认为在培养 基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率， 基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的 根数和根长影响小。 根数和根长影响小。
②材料二次消毒灭菌
将上述完成后的材料带到无菌室超净工作 台上，进行二次消毒灭菌: 将茎段腋芽的苞叶 拨去。 70% 的酒精速浸25s， 用0.1%的升汞 溶液浸泡10min， 用无菌水冲洗5 次， 灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，以 去掉表面药物残留。
③接种
•将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件 下切成至少带有一个茎节地茎段，接 种于事先准备好的诱导芽培养基中诱 导出芽。 • 从茎尖或茎段培养得到的小苗，大多 数是无根小苗，需转入1／2MS加马铃 薯进行生根和壮苗培养，才能出管移 栽。
石斛试管苗可直接栽在树干或岩石上， 也可以盆栽。在阴凉潮湿、长有苔藓的树干 和岩石上，栽种石斛成活率高。盆栽选用木 屑、吸水石、砂岩、片麻岩等作基质，然后 覆上苔藓或青杠树树皮粉进行栽种，效果较 好。试管苗栽后宜放在荫棚内，荫蔽度要求 60％～80％。石斛喜湿润，怕积水。积水会 使根茎腐烂，叶片脱落而死。当移栽苗根伸 长后，每月用MS大量元素1000倍稀释液喷施 追肥，促进生长发育。
通常由种子离体培养产生 的胚性组织称原球茎 (protocorm)，而外植体 叶尖、基尖等诱导形成的 胚性组织称为拟原球茎 (protocorm like bodies) 即PLBs。原球茎或拟原球 茎转入不含任何激素或生 长素的培养基(如MS)便可 再生出完整小植株。
铁皮石斛 组培
移栽时不同基质选择的效果
市场现状： 全国中药资源普查显示， 铁皮石斛鲜品的市场年需求 量在万吨左右，且每年递增 15%。鲜品收购价每公斤在 1000元以上，加工成铁皮枫 斗后每公斤销售价达18000元， 是石斛属植物中最名贵的物 种。但铁皮石斛自然繁殖能 力极低，疯狂的采挖导致野 生资源日见稀少，被国家列 为二级濒危保护植物。目前， 人工繁育种植技术趋于成熟， 但主要集中在少数企业运作， 投资成本高，种植面积少， 其产量难以满足市场需求， 混淆品充斥市场。
灭菌 1培养基灭菌 1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全 阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防 事故发生； 2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均 匀地扭紧螺丝； 3）打开电源和排气阀，调节电压至220V； 4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀； 5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持 20min； 6）关闭电源，使之自动降温至0℃。10min后，打开排 气阀和锅盖； 7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
铁皮石斛的用途： 铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo），为 兰科石斛属多年生草本植物，分布于气候温润的南方山区， 附生在半山腰阴湿岩缝、老树表皮，生存温度为–5℃～36℃， 生长温度为15～30℃。其茎枝富含石斛多糖、甘露糖、氨基 酸、微量元素、菲类化合物等成分，具有提高免疫、增强记 忆、延缓衰老、防治眼病、保护嗓子、降压降糖、防癌抗癌、 抑制血栓形成等作用。铁皮石斛口感清香、淡甜、细滑，耐 人寻味，人们往往直接嚼食、泡茶饮用、烹调美味滋补药膳。 现阶段被制成口服液、颗粒剂、软胶囊等服食。铁皮石斛枝 叶奇特、花型秀美，极具观赏价值。道家经典《道藏》把铁 皮石斛、天山雪莲、三两重人参、百二十年首乌、花甲之茯 苓、苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草列为中华九大仙 草，而铁皮石斛被冠以九大仙草之首，因而成为历代宫廷贡 品，为历年版《中华人民共和国药典》所收载。
铁皮石斛组织培养PPT课件
02
组织培养技术概述
组织培养的定义与分类
组织培养是指在人工控制的条件下，将植物的离体组织或细胞培 养在人工配置的培养基上，使其生长、发育、繁殖并产生次生代 谢产物的技术。
根据培养的植物材料不同，组织培养可以分为器官培养、胚胎培 养、细胞培养、原生质体培养等。
组织培养技术的发展历程
19世纪中期
植物细胞全能性的发现，为组织培养奠定了理论 基础。
利用组织培养技术，可以对铁皮 石斛进行深入研究，探索其生长 、发育和代谢机制等。
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参考文献
参考文献
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根
铁皮石斛的根为须根，呈白色 或灰白色，较为细长。
茎
铁皮石斛的茎为圆柱形，多节 ，表面有纵纹，呈黄绿色或紫 红色。
叶
铁皮石斛的叶为革质，呈长圆 形或椭圆形，表面光滑，有光 泽。
花
铁皮石斛的花为白色或淡黄色 ，呈单生于叶腋间，花瓣为6 片。
铁皮石斛的药用价值
滋阴清热
铁皮石斛具有滋阴清热的功效，可用于治疗热病伤 津、口渴咽干等症状。
以防止污染。
选择适宜的培养基
根据实验需求选择适宜的培养 基配方，以保证铁皮石斛的正
常生长。
控制培养环境
保持恒定的温度、湿度和光照 条件，以满足铁皮石斛的生长
需求。
定期观察与记录
对培养中的铁皮石斛进行定期 观察，记录生长情况，以便及
时发现问题。
实验问题及其解决方案
污染问题
若发现培养基中出现菌落， 应立即弃去污染的培养基， 并检查操作过程，确保无菌 操作。
铁皮石斛组培技术
铁皮石斛组培技术-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII铁皮石斛的组织培养研究专业班级：姓名：学号：课程：植物组织培养目录摘要 (4)Abstract (5)前言 (6)1.培养基 (7)1.1配方 (7)1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） (7)1.3灭菌 (9)2.转接 (10)2.1转接前准备 (10)2.2转接 (10)2.3培养 (10)3.炼苗 (11)3.1炼苗目的 (11)3.2炼苗方法 (11)4.移栽 (12)4.1基质选择 (12)4.2移栽技术要求 (12)5.结论与分析 (13)参考文献 (14)摘要铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。
铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。
铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。
铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。
为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。
关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖AbstractDendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green epidermis.As a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ，clear away heat ,and so on.The main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune modulators.When mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural reproduction.In order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique .key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue cultureculture medium adapter rapid propagation前言多年生草本，具有气生根。
铁皮石斛组织培养
小苗可以用苔藓或水苔!中苗就要树皮石子加苔藓!大苗可用石子树皮等!至于用来培养组织苗的培养基属难告知恩，这个我知道，我就想出了MS培养基，没有其他适合的了吗？培养基也属于商业秘密啊？很多好一些的营养基都是商业密秘!我会去给你找个适合石斛的营养基.只能给你个普通的!希望你喜欢石斛较常见的培养基配方,花宝三克,百分之十到百分之二十的萍果汁一千毫升,蔗糖浓度百分之三点五.琼脂十五克.蒸溜水一千克氢离子浓度调节到一万纳摩/升(PH5.0)常规铁皮石斛开花后采用人工方法授粉，将其种子接种在１／２ＭＳ液体培养基中非共生萌发培养时，再转入含有０．０１％Ｏｒｙｚａｌｉｎ＋０．０１％秋水仙碱的１／２ＭＳ液体培养基中进行诱变处理，然后转入１／２ＭＳ固体培养基上，光照；取新生长的根尖固定，用压片法制备染色体标本，卡宝品红染色液染色，染色体数目为２ｎ＝７６的幼苗为四倍体铁皮石斛，按通常方法进行栽培管理。
现在大部分采用松树皮发孝后来种的！铁皮石斛组织培养的培养基用到的主要基本培养基是MS培养基，也不只是这一种，其它的WV、winte等都可以用，但是一般多用MS培养基，也可以用1/2MS培养基，大量元素减半，其它元素不变。
除此之外，还有加一些生长素（如IAA、IBA、NAA等），细胞分裂素（如6-BA等）。
但是不同的培养时期也不同的激素配合。
如诱导愈伤组织时，要两种激素的配合。
增殖传代时也要两种激素的配合，但生长素为主；分化时以分裂素为主，壮苗和生根以生长素不主。
一般用量都是0.1-10mg/L这个范围里。
此外，还有的加了什么香蕉素，椰看你是用什么外植体，或是想诱导什么先了，一般如果是茎段的话，用一般的MS+0.3mg/L NAA+5mg/L 6-BA做诱导培养基就好，但是如果你要用根茎做外植体诱导原球茎的话，最号用1/2MS加上水解乳蛋白和激动素和6-BA 就好,量看你外植体了，不同的类型不同乳等。
一般NAA：6-BA是10：1，即2：0.2mg/L（一）繁殖技术石斛的繁殖方法分为有性繁殖和无性繁殖两大类，目前生产上主要采用无性繁殖方法。
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛组培技术
• • • • • • • • • • • 一 茎段培养 必要的培养条件 取材与消毒 诱导培养 增殖培养 生根培养 出瓶苗的过渡管理 二 种子培养（胚培养） 三 茎尖培养 四 原球茎培养 五 根尖培养
石斛生产基地
实训时，我们看到的批量的铁皮石斛的生产，以及 工作人员正在上盆，移栽石斛。由此，我们了解到 铁皮石斛生长缓慢，周期长。
组织培养的流程
培养基的流程
培养基配制 灭菌 接种 培养 驯化移栽
灭菌
•接种前我们应该做的灭菌工作： 1.在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫 外线灯； 2.接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿 拖鞋等； 3.上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然 后搽拭工作台面； 4.先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾 过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；
铁皮石斛的组织培养
园艺3133 王冬玲 12号
目录
一 组织培养的概念 五 驯化移栽
二
组织培养的流程
六
铁皮石斛简介
三
灭菌
七
ห้องสมุดไป่ตู้
铁皮石斛的组培技术
四
接种
八
石斛生产基地
组织培养的概念
• 植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分 离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无 菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植 株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
接种
无菌接种的具体步骤： •将初步洗涤及切割的材料放入烧杯， 带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用 无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放 置在灭过菌的纱布上或滤纸上。 •．材料吸干后，一手拿镊子、一手 拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的 切割。 •用灼烧消毒过的器械将切割好的外 植体插植或放置到培养基上。
铁皮石斛组培PPT课件
能够快速大量繁殖优质种苗，满足市场需求。
品质一致性
通过标准化生产流程，确保种苗品质的一致性。
铁皮石斛组培技术的优势和局限性
• 抗病抗逆性：通过选择特定培养条件，提高种苗的抗病和抗逆性。
铁皮石斛组培技术的优势和局限性
成本高
需要专业的实验室设备和熟练的技术人员，导致生 产成本较高。
技术难度大
当根系生长良好时，进行移栽操作， 将铁皮石斛植株移植到适当的生长环 境中。
观察记录根系的生长情况，确保根系 健康且发达。
04
组培过程中常见问题及解决方案
外植体污染问题及解决方案
外植体污染
在组培过程中，外植体可能受到细菌、霉菌等污染，导致培 养失败。
解决方案
对外植体进行严格消毒，使用无菌操作技术，定期检查培养 基的pH值和营养成分，及时处理污染的外植体。
05
铁皮石斛组培技术的前景与展望
组培技术在铁皮石斛产业中的应用前景
快速繁殖
通过组培技术，可以快速大量 繁殖铁皮石斛种苗，满足市场 需求。
品种改良
利用组培技术进行基因编辑， 培育出抗病、抗虫、抗逆性更 强的新品种。
保护资源
通过组培技术，可以保存和复 壮珍稀、濒危的铁皮石斛种质 资源。
组培技术在铁皮石斛品种改良中的作用
根据外植体的生长需求，控制适宜的培养温度、光照和湿度，保持恒定的环境条件，以促进外植体的正常生长。
诱导分化困难问题及解决方案
诱导分化困难
在组培过程中，有时难以诱导外植体分化成所需的组织或器官。
解决方案
采用不同的诱导因子或添加物，如植物激素、化学物质等，以促进外植体的分化。同时，优化培养条 件，提高外植体的分化率。
观察记录生长情况，及时发现 并处理异常情况。
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术铁皮石斛是一种珍贵的中草药材，具有极高的市场价值和药用价值。
为了满足市场需求，提高铁皮石斛的生产量和品质，组培苗驯化移栽技术成为关键。
一、组培苗繁殖技术组培是指从植物的体细胞、组织或器官中，在无菌环境下培养成植株的一种技术。
组培苗有良好的一致性和规格性，便于发扬遗传育种作用，提高植物生产效益。
1. 选取无病、无虫、无害虫危害的铁皮石斛茎段或赘生物作为组织培养的材料，并在无菌条件下进行处理。
2. 将茎段或赘生物表皮去除，切成约0.5cm的小段，经无菌条件下的壮苗培养、增殖培养后得到一定量的快速增殖组织。
3. 将增殖组织移入悬浮液或凝胶中，经愈伤组织诱导、悬浮培养、分化培养，得到大量组培苗成活率达80%以上。
组培苗的快速生长对于移栽是非常有利的，但过快的生长也会造成苗期管理难度和移栽后的生长不良。
因此，必须对组培苗的生长进行调控。
1. 光照与照明光照充足有利于组培苗的生长，但过强光照会使组培苗叶片掉水、老化，影响其生长。
组培苗生长需要提供人工光源，照明应充分使用光照周期，例如12/12小时的光照。
2. 适宜温度不同植物对温度的适应性不同。
在组培苗培养中，应根据铁皮石斛生长喜好选择适宜的温度。
保持适宜温度是组培苗健康生长的基本保证。
3. 营养素供应组培苗营养充足是快速增长的重要保障。
组培苗生长需要提供适宜的培养基及养分配制。
可以通过添加植物生长调节剂、有机氮肥等方式，为组培苗提供充足的营养。
组培苗移栽是组培苗技术的最后一步，也是最关键的一步。
组培苗经过一系列处理的苗木，笔者建议采用“半雾化法”移栽。
1. 前期准备准备约5mm*5mm的生石灰渣团作为基质，以铁皮石斛为例，将铁皮石斛盆栽移于干燥通风处进行3天预养。
2. 操作步骤(1) 取出组培苗，将培养基从根部彻底洗掉，将根露出，除去老化和畸形部分，形成整齐鲜活、外形正常、完整的组培苗。
(2) 取适量的生石灰渣，加入适量的水，混合均匀，使其平均含水率达到60%~70%。
铁皮石斛组培技术
铁皮石斛组培技术-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII铁皮石斛的组织培养研究专业班级：姓名：学号：课程：植物组织培养目录摘要 (4)Abstract (5)前言 (6)1.培养基 (7)1.1配方 (7)1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） (7)1.3灭菌 (9)2.转接 (10)2.1转接前准备 (10)2.2转接 (10)2.3培养 (10)3.炼苗 (11)3.1炼苗目的 (11)3.2炼苗方法 (11)4.移栽 (12)4.1基质选择 (12)4.2移栽技术要求 (12)5.结论与分析 (13)参考文献 (14)摘要铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。
铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。
铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。
铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。
为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。
关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖AbstractDendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green epidermis.As a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ，clear away heat ,and so on.The main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune modulators.When mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural reproduction.In order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique .key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue cultureculture medium adapter rapid propagation前言多年生草本，具有气生根。
铁皮石斛组织培养
铁皮石斛组织培养铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。
从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。
铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。
《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。
现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。
由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。
为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。
1 种子萌发1.1 胚龄:不同种龄的种子萌发率不一样。
叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。
2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2 周后开始萌发，萌发率为87 % ;4 一6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为95 ％。
1.2 基本培养基:铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。
1.3 激素:在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。
2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。
6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。
KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。
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铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。
从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。
铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。
《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。
现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。
由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。
为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。
1 种子萌发1.1 胚龄不同种龄的种子萌发率不一样。
叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。
2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2 周后开始萌发，萌发率为87 % ; 4 一6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为95 ％。
曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良N6培养基中进行组织培养，亦得到相似的结论，幼胚胚龄在60d 以下时，萌发率极低，随着胚龄的增长，其萌发期逐渐缩短，萌发率逐渐升高，成苗率也逐渐升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。
1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。
曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。
罗吉凤等比较了MS 、l / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。
1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。
2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。
6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。
KT 、IAA 对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。
ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L 为最佳。
1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。
1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人 2 ％蔗糖。
曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2 原球茎增殖2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。
张治国等研究了6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明，l /2 MS 是原球茎增殖的适宜培养基。
2.2 激素适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。
唐桂香等以1 / 2 MS 为基本培养基，发现BA 1.0mg/L和NAAO.lmg/L 有利于原球茎诱导增殖。
蒋林等叫研究表明，l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L比较适合嗓球茎的增殖。
蒋波等以1 / 2MS 为基本培养基.添加BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L或6 一BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L的激素，原球茎的增殖系数较大。
陈兆贵等认为原球茎增殖以MS + NAA1.0mg/L + 6 一BA1.0mg/L + KT1.0mg/L为最佳，35d 增殖倍数达到5 倍。
2.3 天然添加物椰子汁、苹果汁对原球茎的增殖有较好的效果，但香蕉汁对原球茎的增殖有抑制作用。
张治国等认为原球茎增殖时最好不添加任何天然提取物。
2.4 炭源添加活性炭能使原球茎的增殖量显著增加，这可能是活性炭吸附了某种不利于原球茎增殖的物质，蔗糖浓度0.5 ％~0.3 ％。
周根余等比较了不同炭源对铁皮石斛原球茎生长的影响，发现原球茎在蔗糖中生长最快，浓度3 % ，葡萄糖中其次，而乳糖中最慢。
3 原球茎分化3.1 基本培养基铁皮石斛原球茎分化可以1 / 2 MS，MS 等作为基本培养基。
张治国等比较了VW 、N6、l / 2MS 、B5、KC 等6 种基本培养基对原球茎分化的影响，发现6 种基本培养基附加马铃薯提取液和植物激素后，原球茎均可分化，但以1 /2MS 培养基作为原球茎分化的基本培养基最适宜，叶色浓绿，出苗整齐，这与刘瑞驹等困的报道一致。
3.2 激素培养基中添加BA 和NAA 后可加快原球茎分化的进程。
张治国等报道了BA 和NAA 不同的组合及浓度对原球茎分化的影响，在分化前期（40d ) ，高浓度的BA 和低浓度NAA 组合，加快原球茎分化进程，1 一2 片叶的分化苗占50 ％以上，以2mg/L BA 和0.2mg/L NAA 组合最好。
培养到60d 后NAA 浓度高的组合，分化苗整齐．尤其是0.2mg/LBA 和2mg/LNAA 组合，小苗生长发育快。
蒋波等报道以1 /2 MS 为基本培养基，添加BA2.O mg/L + NAAO.2 mg/L或BA3.Omg/L十NAAO.2mg/L的激素，有利于原球茎的分化。
陈兆贵等以MS + NAA1.Omg/L + 6 一BAmg/L + KT1.0mg/L为培养基，45d 原球茎分化率达84 ％。
罗吉凤等认为原球茎分化适宜的培养基为1 / 2MS 十BA2mg/L+ NAA 0.2mg/L十IBAO.1mg/L＋蔗糖3%。
唐桂香等研究发现，BA 对原球茎诱导芽影响大，而NAA 对原球茎诱导芽影响小。
3.3 天然添加物土豆汁、马铃薯提取液能有效促进原球茎的分化，香蕉汁对原球茎的分化有抑制作用。
3.4 炭源培养基中加人活性炭能促进原球茎的分化际。
张治国等研究了蔗糖浓度对原球茎分化的影响，发现蔗糖为2 ％时，分化率为100 % ，此时原球茎的增殖率达最高，当蔗糖为 3 ％时，原球茎不再分化，且增殖率随蔗糖浓度的增高而下降。
这可能是因为培养基的渗透压过高，抑制了原球茎的分化和生长。
故在原球茎分化中，蔗糖浓度以3 ％为分化的临界值，而蔗糖2 ％为原球茎分化的适宜浓度。
4 生根与壮苗4.1 基本培养基铁皮石斛试管苗生根壮苗常用的基本培养基有1/2 MS、MS、B5、N6等。
赵天榜等研究N6、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚苗生长的影响，以从最好，SH 、MS 次之，1 / 2MS 、1 / 2VW 最差。
张玲等比较了MS 、B5、N6 、KC 四种培养基对幼苗生长的影响，发现N6培养基最有利于幼苗的生长，其株高和根数都比其它培养基好，B5次之。
刘弊等比较了1 / 2 MS 、B5、VW 、KC 等4 种基本培养基对试管苗生长的影响，发现培养到120d 时，残培养基上的小苗生长最好，其次为l /2MS 培养基，而KC 和VW 培养基上的试管苗生长明显不如B5和1 / 2 MS 。
4.2 激素在基本培养基中添加NAA、IAA、IBA等激素有助于试管苗生根壮苗。
赵天榜等在1 / 2N6培养基内添加2mg/L或lmg/L NAA ，可提高石斛种胚苗分桑率6 . 00 一7.14 倍。
唐桂香等研究了不同NAA 含量对铁皮石斛苗成活率和生根的影响，结果表明NAA 有助于试管苗的生根，以0.5mg/L试管苗平均根数最多和平均根长最长。
4.3 天然添加物在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、孽葬汁、绿豆芽汁、苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。
4.4 炭源铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的生长，能使根系长得更加粗壮闭。
唐桂香等认为在培养基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的根数和根长影响小。
5 其他外植体的离体培养除种子作外植体外，以铁皮石斛的茎尖、茎段、幼叶、种胚苗、幼根为外植体，均可培育出组培苗。
以茎尖、茎段为外植体，培养途径为茎尖、茎段一诱导形成不定芽～不定芽增殖～不定芽分化～生根壮苗，形成完整试管苗。
5.1 不定芽诱导曾宋君等比较N6、MS 、KS 、VW 、KC 等培养基，以MS 为基本培养基效果较好。
朱艳等比较1 / 2 MS 、B5、改良N6 、KC 等4 种培养基对茎段分化丛生芽的影响，结果表明以1 / 2 MS 诱导丛生芽效果最好。
张伟等比较N6、MS 、1 / 2N6、1 / 2 MS 等培养基对试管苗生长的影响，结果表明，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以改良N6 最佳，MS 次之。
张启香等比较l / 2MS 、MS 、VW 等培养基，结果表明以1 / 2MS 诱导效果最好。
周俊辉等比较N6、B5、MS 、KC 等4 种基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的影响，以B5效果最好。
NAA、6 - BA、KT、IBA、LH在不定芽诱导过程中具有良好的促进作用，NAA 浓度通常0.1~0.5mg/L, 6 一BA 浓度通常0.5 一2.0mg/L。
5.2 不定芽增殖将丛生芽切割后继续在此培养基上培养，可增殖产生大量丛生芽。
在不定芽增殖培养中可添加香蕉汁、土豆汁、椰子汁等天然附加物，周俊辉等认为添加椰子汁对芽的增殖效果最好。
5.3 生根壮苗生根壮苗适宜的培养基有N6＋10 ％香蕉汁，1 / 2 MS 十IBAO.lmg/L，l / 2MS 十10 ％香蕉汁十0.5 % AC，改良N6十0.2mg/L NAA + 10 ％香蕉汁，MS + NAAO.05 mg/L , + KTO.1mg/L,＋叶酸2.0mg/L+ La稀土10mg/L，1 / 2 MS + NAAO.7mg/L等。
在生根培养基中通常加入香蕉汁、蔗糖可促进生根壮苗。
6 讨论与展望6.1 菌根技术和试管苗移栽关于铁皮石斛组织培养的研究目前已取得一定的进展，成功培育出试管苗，但有关试管苗移栽方面的报道还很少，目前普遍存在移栽成活率低，苗期管理困难的问题。