医学硕士毕业答辩PPT
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共表达siRNA-Stat3与GRIM-19质粒对甲状腺 癌细胞的抑制效应及机理探讨
2020/5/24
一、研究背景
➢甲状腺癌 ➢癌基因Stat3 ➢促凋亡因子GRIM-19
➢ 甲状腺癌
1. 内分泌系统最常见肿瘤 2. 近年发病率上升 3. 约15%恶性度较高 4. 复发后再次手术难度大
➢ 癌基因Stat3
(*P<0.01 versus Mock and pSi-Scramble ; # P<0.01 versus pGRIM-19)
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6. 各组细胞侵袭能力
(* P<0.01 versus Mock and pSi-Scramble; # P<0.01 versus psi-Stat3 and pGRIM-19 )
18
五 、结 论
➢ 质粒的作用
1. psi-Stat3可抑制SW579细胞增殖与侵袭、促进 凋亡
2. pGRIM-19可抑制SW579细胞增殖促进凋亡
3. pGS有明显的协同作用
19
➢ 可能的作用机制
1. RNAi使STAT3蛋白表达下降
2. GRIM-19表达增强抑制了STAT3的转录激活功 能，间接抑制了MMP9和Bcl-2基因表达
1. 公认的癌基因 2. 抗凋亡、促进增殖转化 3. 已作为抗肿瘤靶基因
➢ 促凋亡因子GRIM-19
1. 促凋亡因子 2. 抑制STAT3转录激活功能 3. 肿瘤中低表达
二、研究目的
➢ 观察协同抑制效应 ➢ 探讨作用机制
哺乳动物细胞RNAi不能完全阻断基因表达： （1） 异常高表达的基因 （2） siRNA同源序列的选择 （3） siRNA表达量及稳定性 （4） 残余mRNA所翻译蛋白抑制RNAi
21
感谢各位老师百忙之中抽出时间参加论 文答辩，请批评指正。
STAT3信号传导通路
GRIM-19对STAT3的抑制机制
三、方法路线
➢真核表达质粒 ➢实验流程及方法
四种真核表达质粒结构图
mock组 psi-Scramble组 psi-Stat3组 pGRIM-19组
pGS组
转染细胞
显微镜
RT-PCRຫໍສະໝຸດ 观察 Western blot
细胞形态 检测基因表达
3. 两者协同抑制Stat3, 致使细胞增殖、侵袭和迁移 能力下降
致谢
衷心感谢我的导师XXX老师！感谢您三年来 的辛勤培养与耐心指导，感谢您在学习和生活 上的关心与照顾。您严谨的治学作风，不倦的 敬业精神是我学习的楷模，在事业上激励我不 断进取。
衷心感谢XX外科XX主任、XX教授、XX教 授等各位老师与同学在学习与生活上的教育支 持 与帮助。 衷心感谢基础医学院XX教授与XX教 授的精心培养严格要求与无私帮助。
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3. 各组细胞Stat3、GRIM-19 mRNA表达水平
1:mock; 2: pSi-Scramble;3:pSi-Stat3; 4: pGRIM-19; 5: pGS (*P<0.01 versus Mock and psi-Scramble;ΔP<0.01
versus pSi-Stat3 and pGRIM-19 )
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1:mock; 2: pSi-Scramble;3:pSi-Stat3; 4: pGRIM-19; 5: pGS (*P<0.01 versus Mock and pSi-Scramble ;ΔP<0.05 versus psi-Stat3
and pGRIM-19 )
5 . 各组细胞迁移能力
MTT实验 检测细胞 增殖活性
划痕实验 Transwell实验
检测细胞 侵袭迁移能力
Transwell小室
四、实验结果
1. 各组SW579细胞形态及增殖情况
13
2. 各组细胞增殖能力（48h）
(*P<0.05 versus Mock and pSi-Scramble;#P<0.05 versus pGRIM-19 and pSi-Stat3)
2020/5/24
一、研究背景
➢甲状腺癌 ➢癌基因Stat3 ➢促凋亡因子GRIM-19
➢ 甲状腺癌
1. 内分泌系统最常见肿瘤 2. 近年发病率上升 3. 约15%恶性度较高 4. 复发后再次手术难度大
➢ 癌基因Stat3
(*P<0.01 versus Mock and pSi-Scramble ; # P<0.01 versus pGRIM-19)
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6. 各组细胞侵袭能力
(* P<0.01 versus Mock and pSi-Scramble; # P<0.01 versus psi-Stat3 and pGRIM-19 )
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五 、结 论
➢ 质粒的作用
1. psi-Stat3可抑制SW579细胞增殖与侵袭、促进 凋亡
2. pGRIM-19可抑制SW579细胞增殖促进凋亡
3. pGS有明显的协同作用
19
➢ 可能的作用机制
1. RNAi使STAT3蛋白表达下降
2. GRIM-19表达增强抑制了STAT3的转录激活功 能，间接抑制了MMP9和Bcl-2基因表达
1. 公认的癌基因 2. 抗凋亡、促进增殖转化 3. 已作为抗肿瘤靶基因
➢ 促凋亡因子GRIM-19
1. 促凋亡因子 2. 抑制STAT3转录激活功能 3. 肿瘤中低表达
二、研究目的
➢ 观察协同抑制效应 ➢ 探讨作用机制
哺乳动物细胞RNAi不能完全阻断基因表达： （1） 异常高表达的基因 （2） siRNA同源序列的选择 （3） siRNA表达量及稳定性 （4） 残余mRNA所翻译蛋白抑制RNAi
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感谢各位老师百忙之中抽出时间参加论 文答辩，请批评指正。
STAT3信号传导通路
GRIM-19对STAT3的抑制机制
三、方法路线
➢真核表达质粒 ➢实验流程及方法
四种真核表达质粒结构图
mock组 psi-Scramble组 psi-Stat3组 pGRIM-19组
pGS组
转染细胞
显微镜
RT-PCRຫໍສະໝຸດ 观察 Western blot
细胞形态 检测基因表达
3. 两者协同抑制Stat3, 致使细胞增殖、侵袭和迁移 能力下降
致谢
衷心感谢我的导师XXX老师！感谢您三年来 的辛勤培养与耐心指导，感谢您在学习和生活 上的关心与照顾。您严谨的治学作风，不倦的 敬业精神是我学习的楷模，在事业上激励我不 断进取。
衷心感谢XX外科XX主任、XX教授、XX教 授等各位老师与同学在学习与生活上的教育支 持 与帮助。 衷心感谢基础医学院XX教授与XX教 授的精心培养严格要求与无私帮助。
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3. 各组细胞Stat3、GRIM-19 mRNA表达水平
1:mock; 2: pSi-Scramble;3:pSi-Stat3; 4: pGRIM-19; 5: pGS (*P<0.01 versus Mock and psi-Scramble;ΔP<0.01
versus pSi-Stat3 and pGRIM-19 )
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1:mock; 2: pSi-Scramble;3:pSi-Stat3; 4: pGRIM-19; 5: pGS (*P<0.01 versus Mock and pSi-Scramble ;ΔP<0.05 versus psi-Stat3
and pGRIM-19 )
5 . 各组细胞迁移能力
MTT实验 检测细胞 增殖活性
划痕实验 Transwell实验
检测细胞 侵袭迁移能力
Transwell小室
四、实验结果
1. 各组SW579细胞形态及增殖情况
13
2. 各组细胞增殖能力（48h）
(*P<0.05 versus Mock and pSi-Scramble;#P<0.05 versus pGRIM-19 and pSi-Stat3)