野生猕猴桃根水煎液对人胃癌细胞的抑制作用及机制
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培养 液传 代 培养 ， 对 数 生 长 期 细胞 进 行 实 验 。将 取 野生 猕猴 桃根 ５ ０ｇ加 １ 蒸馏 水 浸泡 ３ ｎ 武 ０倍 ０ｍｉ后
火 煮 沸 ， 火 煎 １ｈ ４层 纱 布过 滤 。滤渣 加 ６倍 水 ， 文 ，
的变 化
药物 作 用 细胞 ４ ８ｈ后 分 别 收 集各 组 胃癌
（ ）＝克 隆数／ ％ 接种 细胞 数 ×１０ ， 落 形 成 抑 制 ０％ 集 率 （ ）＝（ 克 隆数／ 照组克 隆数 ）×１０ 。 ％ １一 对 ０％
１２ ４ Ｗｅｔｒ．ｌｔｎ 检 测 ｃｓａｅ３活 性 片段 ． ． ｓ ｎｂｏ ｉｇ ｅ ｔ ａｐ ｓ．
１２ １ 细胞 培养与 药物制备 将 胃癌细胞置 ３ ．． ７ ｏ ５ Ｃ 条 件 下 ， 含 １ ％ 小 牛 血 清 的 Ｄ Ｍ Ｃ、 ％ Ｏ 用 ０ ＭＥ
源兔 抗 人 ＩＧ） 二 抗 （ ｇ 、 羊抗 兔 ＩＧ辣 根过 氧 化 物 酶 ｇ
标 记 ） 购 于博 士德生 物制 品公 司 。 均
１ ２ 方法 ．
染色 ， 镜下计数每孔 ＞ ０个细胞 以上 的集落数 目， ５ 计算 集 落 形 成 率 及 集 落 形 成 抑 制 率 ： 落 形 成 率 集
细胞 ， 提取 总蛋 白 ， 上 样缓 冲液 煮 沸 变性 后 ， 加 进行
１％ 的 Ｓ ＳＰ Ｇ 转 移 至 Ｎ ２ Ｄ Ａ Ｅ； Ｃ膜 ； 适 量 Ｗｅｔ ｎ 加 ｓ ｒ— ｅ
武 火 煮沸 ， 文火 煎 ４ ｉ， ０ｍｎ４层纱 布 过 滤 。合并 ２次
滤液 １ ２层 纱布 及滤 纸过 滤 ， 缩 至 １ｇ ｍ ３０ ０ ｇ 浓 ／ Ｌ， ０
对人 胃癌 细胞 有抑制作用 ， 该抑制作用 可能与介 导 ｃｓａｅ ａｐｓ一 白的表 达有关 。 ３蛋
关键 词 ： 胃肿瘤 ； 野生猕 猴桃根 ；￣ｐ ｓ・ 白 ｃ ａｅ３蛋 中图分 类号 ： ７５ ２ Ｒ ３ ． 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ：０ ２２ ６ ２ １ ） １ ０ ７ １０ －６ Ｘ（０ ２ ０ － ３ ￣２ ０
取 ６孔
乡 ， 贵 阳 中 医学 院 鉴 定 ） 经 。人 胃癌 细 胞 Ｂ Ｃ８ ３ Ｇ 一２
（ 阳医 学 院病 理 教 研 室 赠 送 ） 二 甲基 亚 砜 （ Ｍ— 贵 ， Ｄ
Ｓ 北 京 化学试 剂 厂 ） 标 准 小 牛 血 清 （ Ｏ， ， 四季 春生 物
制 品公 司 ） Ｄ Ｍ（ ｉｃ ， ＭＥ Ｇｂ ｏ公 司 ） 。一 抗 （ 克 隆 来 多
过 检测 凋亡 相 关 重 要 蛋 白 ｃｓａｅ ａｐ ｓ－ ３活性 片段 的 表
达， 探讨 该抑 制作 用 与细胞 凋亡 的关 系 。
１ 材 料 与方 法
１ １ 材料 ．
野 生 中华 猕 猴 桃 Leabharlann Baidu （ 于 紫 云县 杨 武 购
１２３ 集 落形 成 法 … 检测 细 胞 抑 制 情况 ．．
板３ ， 块 每孔接种 ２０个 胃癌细胞 ， ０ 培养 ２ ４ｈ后弃 培养 液 ， 空 白组 、 设 低剂 量 、 中剂量 、 高剂 量药 物组 各 ４孔 。分别加 入 含 ０５ １ 、５ｍｇｍ 、、０２ ／ Ｌ野生猕 猴 桃 根
水煎 液 的培养 液 。继 续 培 养 ７ｄ 甲醛 固定 ， ｉ ｓ ， Ｇｅ ａ ｍ
山东 医药 ２ １ ０２年第 ５ ２卷第 １ 期
野 生猕 猴 桃 根 水 煎 液 对 人 胃癌 细 胞 的 抑 制 作 用 及 机 制
饶 敏 吴 宁 李红梅 王筑婷 雷霆雯 ， ， ， 。 （ １西藏 自治 区人 民 医院 ， 萨 ８００ ２贵 阳 医学院生物 化 学与 分子 生物 学教研 室） 拉 ５００；
猕 猴桃 属猕 猴桃 科 落叶木 质藤 本 。近 年来多 见
培 养箱 中培 养 ２ ４ｈ后 ， 培 养 液 ， 空 白组 和 低 剂 弃 设 量、 中剂 量 、 高剂 量药 物 组 各 ８孔 ， 别 加入 终 浓 度 分 为 ０５ １ ２ ／ Ｌ的野 生 猕猴 桃 根 水煎 液 ， 续 、、０、５ｍｇｍ 继 培 养 。每 天 取 出 １块 培 养 板 ， 孔 加 人 ５ ｍ ／ 每 ｇｍＬ ＭＴ＂ ０ Ｌ反 应 ４ｈ 弃 上 清 液 ， 入 Ｄ Ｏ充 分 溶 Ｉ１ ， 加 ＭＳ 解 细胞 ， 用酶 标仪 在 ４０ｎ 波 长处 测定 吸光 度 ， ９ ｍ 连 续 ７ｄ 。然后 以培 养时 间为横 轴 、 吸收值 为纵轴 绘 光
摘要： 目的
研究野生 中华猕猴桃根水 煎液对 人 胃癌 细胞 Ｂ Ｃ８ ３的抑制 作用 ， Ｇ －２ 并探讨 其作用 机理。方法
以 Ｍ ｒ比色法和集落形成法观察细胞生 长增殖情 况 ， Ｗｅｔｒ—ｌｔｎ Ｔ 用 ｓ ｎ ｂｏ ｉ ｅ ｔ ｇ检测 ｃｓ￣ｅ３活性 片段 的表达。结果 ａｐ 一
细胞生长 曲线 、 集落形成实验显示野生猕猴桃根水煎 液对人 胃癌细胞的生长 、 增殖 均有较好抑 制作用 ， 且有一定 的 浓度依赖性 ； 随着药物浓度 的增加 ，ａｐｓ一 ｃｓａｅ３活性 片段蛋 白的表 达水平增 加 。结论 野生 猕猴桃 根水煎 液在体 外
制 生长 曲线 。
猕 猴桃 根抗 肿瘤 作 用 的 报 道 ， 多采 用 有 机 溶 剂 提 但 取 成分 ， 于其水 煎 液是 否有抗 肿瘤 作用 少见 报道 。 关 ２０ ０６年 １ １月 一 ０７年 ９月 ， 们 观 察 了野 生猕 猴 ２０ 我 桃 根水 煎液 对人 胃癌 细 胞在 体 外 的抑 制作 用 ， 通 并
ｂｏｔ ｇ 闭液 ， ｌｉ 封 ｔｎ 室温 ， 回旋 振摇 ０５ｈ 加入 ｃｓａｅ ． ； ａｐｓ一 ３兔抗 人 ＩＧ抗体 （：０ ） 温反应 ２ｈ 洗 膜 ３次 ， ｇ １２０ 室 ；
离 心 １ ｉ 上 清微孔 滤膜 过滤 。 ５ｒｎ取 ａ １２ ２ ＭＴ＂ ．． Ｉ比色 法 制 生 长 曲线 向 ９ ６孔 细 胞 培 养 板 中 每 孔 加 入 １×１ 个 细 胞 。３ ０ ７℃ 、 ％ Ｃ ， ５ Ｏ
火 煮 沸 ， 火 煎 １ｈ ４层 纱 布过 滤 。滤渣 加 ６倍 水 ， 文 ，
的变 化
药物 作 用 细胞 ４ ８ｈ后 分 别 收 集各 组 胃癌
（ ）＝克 隆数／ ％ 接种 细胞 数 ×１０ ， 落 形 成 抑 制 ０％ 集 率 （ ）＝（ 克 隆数／ 照组克 隆数 ）×１０ 。 ％ １一 对 ０％
１２ ４ Ｗｅｔｒ．ｌｔｎ 检 测 ｃｓａｅ３活 性 片段 ． ． ｓ ｎｂｏ ｉｇ ｅ ｔ ａｐ ｓ．
１２ １ 细胞 培养与 药物制备 将 胃癌细胞置 ３ ．． ７ ｏ ５ Ｃ 条 件 下 ， 含 １ ％ 小 牛 血 清 的 Ｄ Ｍ Ｃ、 ％ Ｏ 用 ０ ＭＥ
源兔 抗 人 ＩＧ） 二 抗 （ ｇ 、 羊抗 兔 ＩＧ辣 根过 氧 化 物 酶 ｇ
标 记 ） 购 于博 士德生 物制 品公 司 。 均
１ ２ 方法 ．
染色 ， 镜下计数每孔 ＞ ０个细胞 以上 的集落数 目， ５ 计算 集 落 形 成 率 及 集 落 形 成 抑 制 率 ： 落 形 成 率 集
细胞 ， 提取 总蛋 白 ， 上 样缓 冲液 煮 沸 变性 后 ， 加 进行
１％ 的 Ｓ ＳＰ Ｇ 转 移 至 Ｎ ２ Ｄ Ａ Ｅ； Ｃ膜 ； 适 量 Ｗｅｔ ｎ 加 ｓ ｒ— ｅ
武 火 煮沸 ， 文火 煎 ４ ｉ， ０ｍｎ４层纱 布 过 滤 。合并 ２次
滤液 １ ２层 纱布 及滤 纸过 滤 ， 缩 至 １ｇ ｍ ３０ ０ ｇ 浓 ／ Ｌ， ０
对人 胃癌 细胞 有抑制作用 ， 该抑制作用 可能与介 导 ｃｓａｅ ａｐｓ一 白的表 达有关 。 ３蛋
关键 词 ： 胃肿瘤 ； 野生猕 猴桃根 ；￣ｐ ｓ・ 白 ｃ ａｅ３蛋 中图分 类号 ： ７５ ２ Ｒ ３ ． 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ：０ ２２ ６ ２ １ ） １ ０ ７ １０ －６ Ｘ（０ ２ ０ － ３ ￣２ ０
取 ６孔
乡 ， 贵 阳 中 医学 院 鉴 定 ） 经 。人 胃癌 细 胞 Ｂ Ｃ８ ３ Ｇ 一２
（ 阳医 学 院病 理 教 研 室 赠 送 ） 二 甲基 亚 砜 （ Ｍ— 贵 ， Ｄ
Ｓ 北 京 化学试 剂 厂 ） 标 准 小 牛 血 清 （ Ｏ， ， 四季 春生 物
制 品公 司 ） Ｄ Ｍ（ ｉｃ ， ＭＥ Ｇｂ ｏ公 司 ） 。一 抗 （ 克 隆 来 多
过 检测 凋亡 相 关 重 要 蛋 白 ｃｓａｅ ａｐ ｓ－ ３活性 片段 的 表
达， 探讨 该抑 制作 用 与细胞 凋亡 的关 系 。
１ 材 料 与方 法
１ １ 材料 ．
野 生 中华 猕 猴 桃 Leabharlann Baidu （ 于 紫 云县 杨 武 购
１２３ 集 落形 成 法 … 检测 细 胞 抑 制 情况 ．．
板３ ， 块 每孔接种 ２０个 胃癌细胞 ， ０ 培养 ２ ４ｈ后弃 培养 液 ， 空 白组 、 设 低剂 量 、 中剂量 、 高剂 量药 物组 各 ４孔 。分别加 入 含 ０５ １ 、５ｍｇｍ 、、０２ ／ Ｌ野生猕 猴 桃 根
水煎 液 的培养 液 。继 续 培 养 ７ｄ 甲醛 固定 ， ｉ ｓ ， Ｇｅ ａ ｍ
山东 医药 ２ １ ０２年第 ５ ２卷第 １ 期
野 生猕 猴 桃 根 水 煎 液 对 人 胃癌 细 胞 的 抑 制 作 用 及 机 制
饶 敏 吴 宁 李红梅 王筑婷 雷霆雯 ， ， ， 。 （ １西藏 自治 区人 民 医院 ， 萨 ８００ ２贵 阳 医学院生物 化 学与 分子 生物 学教研 室） 拉 ５００；
猕 猴桃 属猕 猴桃 科 落叶木 质藤 本 。近 年来多 见
培 养箱 中培 养 ２ ４ｈ后 ， 培 养 液 ， 空 白组 和 低 剂 弃 设 量、 中剂 量 、 高剂 量药 物 组 各 ８孔 ， 别 加入 终 浓 度 分 为 ０５ １ ２ ／ Ｌ的野 生 猕猴 桃 根 水煎 液 ， 续 、、０、５ｍｇｍ 继 培 养 。每 天 取 出 １块 培 养 板 ， 孔 加 人 ５ ｍ ／ 每 ｇｍＬ ＭＴ＂ ０ Ｌ反 应 ４ｈ 弃 上 清 液 ， 入 Ｄ Ｏ充 分 溶 Ｉ１ ， 加 ＭＳ 解 细胞 ， 用酶 标仪 在 ４０ｎ 波 长处 测定 吸光 度 ， ９ ｍ 连 续 ７ｄ 。然后 以培 养时 间为横 轴 、 吸收值 为纵轴 绘 光
摘要： 目的
研究野生 中华猕猴桃根水 煎液对 人 胃癌 细胞 Ｂ Ｃ８ ３的抑制 作用 ， Ｇ －２ 并探讨 其作用 机理。方法
以 Ｍ ｒ比色法和集落形成法观察细胞生 长增殖情 况 ， Ｗｅｔｒ—ｌｔｎ Ｔ 用 ｓ ｎ ｂｏ ｉ ｅ ｔ ｇ检测 ｃｓ￣ｅ３活性 片段 的表达。结果 ａｐ 一
细胞生长 曲线 、 集落形成实验显示野生猕猴桃根水煎 液对人 胃癌细胞的生长 、 增殖 均有较好抑 制作用 ， 且有一定 的 浓度依赖性 ； 随着药物浓度 的增加 ，ａｐｓ一 ｃｓａｅ３活性 片段蛋 白的表 达水平增 加 。结论 野生 猕猴桃 根水煎 液在体 外
制 生长 曲线 。
猕 猴桃 根抗 肿瘤 作 用 的 报 道 ， 多采 用 有 机 溶 剂 提 但 取 成分 ， 于其水 煎 液是 否有抗 肿瘤 作用 少见 报道 。 关 ２０ ０６年 １ １月 一 ０７年 ９月 ， 们 观 察 了野 生猕 猴 ２０ 我 桃 根水 煎液 对人 胃癌 细 胞在 体 外 的抑 制作 用 ， 通 并
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离 心 １ ｉ 上 清微孔 滤膜 过滤 。 ５ｒｎ取 ａ １２ ２ ＭＴ＂ ．． Ｉ比色 法 制 生 长 曲线 向 ９ ６孔 细 胞 培 养 板 中 每 孔 加 入 １×１ 个 细 胞 。３ ０ ７℃ 、 ％ Ｃ ， ５ Ｏ