LC-MS分析埃塞那肽的肽图

华西药学杂志

W C J ・P S

　2009,24(5)ζ544～545

作者简介:付金香,河北沧州,正攻读微生物与生化药学的硕士学位。Email:fujinxiang1314@ 3通讯作者(Corres pondent author ),Email:yikong668@s ohu .com

LC -MS 分析艾塞那肽的肽图

付金香,霍建丽,田　垒,刘玉雪,孔　毅

3

(中国药科大学生命科学与技术学院生物制药教研室,江苏南京210009)

摘要:目的　用液质联用技术(LC -M S )分析艾塞那肽的肽图。方法　用胰蛋白酶切RP -HP LC 肽图法测定艾塞那肽肽图,用ESI -LC /M S 技术分析肽段的精确相对分子量。结果　根据肽段的色谱保留时间、相对分子质量归属出肽图中各肽段所在的色谱峰。结论　LC -MS 是验证和分析蛋白质结构的高效准确方法。

关键词:肽图谱分析;艾塞那肽;胰蛋白酶切RP -HP LC 肽图法;液相色谱-质谱联用中图分类号:R917　

文献标识码:A

　文章编号:1006-0103(2009)05-0544-02

Pepti de mapp i n g ana lysis of Exena ti de by LC -M S spectrom etry

F U J in -xiang,HUO J ian -li,TI A N Lei,L IU Yu -xue,K ON

G Yi

3

(D epart m ent of B iophar m acy,School of L ife Science and Technology,China Phar m aceutical U niversity,N anjing,J iangsu,210009

P .R.China )

Abstract:O BJECT I VE To analyze the pep tide mapp ing of Exenatide by LC /MS .M ETHOD S The pep tide mapp ing was analyzed by tryp sin digesti on and RP -HP LC analysis .The relative molecular weight of the pep tide frag ments was measured by ESI -LC /M S .RESUL TS The pep tide frag ments of Exenatide in the pep tide mapp ing were assigned by analyzing the retain ti m e and relative molec 2ular weight .CO NCL US I O N The study p r oves that LC -M S is a good method t o analyze pep tide mapp ing of p r otein with the advan 2tage of sensitivity,high s peed and accuracy .

Key words:Pep tide mapp ing analysis;Exenatide;Tryp sin digesti on and RP -HP LC analysis;LC -MS CLC nu m ber:R917

D ocu m en t code :A

　Arti cle I D :1006-0103(2009)05-0544-02

肽图谱(pep tide mapp ing )分析是通过蛋白酶或化学物质裂解蛋白质后,鉴定蛋白质一级结构完整

性和准确性的方法[1]

。胰蛋白酶切RP -HP LC 法具有较高的分辨率及检测灵敏度。胰蛋白酶能在37℃、pH8.0左右的碱性条件下水解多肽中赖氨酸(Lys )或精氨酸(A rg )C 末端的肽键[2]。采用电喷雾电解质谱LC -MS 在线检测HP LC 分离出的每一肽段的相对分子质量,确定洗脱峰代表的蛋白质中

的肽段[3]

。为了更准确地研究多肽的一级结构,近年来各种新技术也被应用到多肽肽图的分析中,可提高分析的准确度和灵敏度。

艾塞那肽(Exenatide,商品名Byetta )是美国Amylin 公司和L illy 公司研制的首个化学全合成的肠促胰岛素类似物,可降低2型糖尿病患者的空腹和餐后血糖。为此,特采用胰蛋白酶切RP -HP LC 法对艾塞那肽产品进行了肽图的测定,并用LC -MS 确认了每一个肽段。

1　实验部分

1.1　仪器与试剂

LC -MS D -Trap -S L 质谱仪系统(美国Agi 2

lent );pHS -2C 型精密酸度计(上海大普仪器有限公司)。TPCK -胰蛋白酶(美国Sig ma );乙腈为色

谱纯;其余试剂为分析纯;水为超纯水。

112　方法与结果

1.2.1　色谱条件和质谱条件　色谱柱为Shi m -pack VP -ODS (150mm ×4.6mm ,5μm );流动相A 为0.1%甲酸,流动相B 为CH 3CN (含0.1%甲酸),线性梯度为0～70%B;梯度时间70m in ;流速

1m l ・m in -1

;柱温30℃±5℃。采用电喷雾电离源

(ESI );色谱柱后0.2m l ・m in -1

分流进入质谱仪,Q1正离子扫描;扫描质量范围为50～1800m /z ;高纯氮

气流量9.0L ・m in -1

;扫描时间75m in 。

1.2.2　溶液的制备　精密称取1g 碳酸氢铵,置150m l 烧杯中,加95m l 超纯水溶解,用氨水调pH8.5,转入100m l 量瓶中,用超纯水定容,制成1%碳酸氢铵溶液;精密称取TPCK -胰蛋白酶适

量,用超纯水配制成1mg ・m in -1

的TPCK -胰蛋白酶溶液;反相制备的艾塞那肽标准品用1%碳酸氢

铵溶液配制成1mg ・m in -1

的样品溶液。以上溶液均保存在4℃冰箱中备用。

1.2.3　酶切反应　取200μl 1mg ・m in -1

的样品,