传代神经干细胞体外分化研究
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细胞数量平均 增加 ６ ７倍 （ １ 。培 养 细胞 细胞 免疫 荧光 表 ） 检查细胞质 内表达巢蛋 白 ｎ ｓｎ ｅｔ ，继续培养反复传代 后仍然 ｉ 持 续表达 （ １ 。１ ％胎牛血清诱 导神经干 细胞分 化细胞 图 ） ０
３ 讨 论
图 ２ 分化细胞免疫学显示 Ｎ Ｅ Ｓ
神经 干细胞处 于 未分化 状态 ，在一定 条件 下分 化为 神 经元 、星形胶质细胞 、少 突胶质细胞等神经系统细胞 ，神
２ 临 床 应 用
组治疗前 后血脂 检测水 平有 明显变化 （ Ｐ＜００ ） ． １ ，对照 组 也有 同样 结果 ，但两 组 间变化无 区别 ；两组治 疗 ４周和 治 疗 ８周 比较 临床 总有 效率 及血脂 检测 水平 无明显 差异 。表 明软脉灵具有明显的调脂 作用 。
（ 下转第 ４ ０页）
中 国 民 族 民 间 医 药
・
菊 物 研 究
４０ ・
Ｃ ｉｅｅ ｊｕ ｎ ］ｏ ｔｎ ｍ ｄｅ ｅ ａ ｄ ｅｈ ｏ ｈ ｒ ｅ ｈｎ ｓ ｏ ｒａ ｆ ｅ ｏ ｅ ｉ ｎ ｎ ｔｎ ｐ ａｍａ ｙ ｈ ｉ
衍生物等 ６个部 位 ，对其 进行 了调节 免疫 功能 生物 活性筛 选 ，确定 了茯苓 多糖 降解 产物 、羧 甲基化 衍生 物和茯 苓 乙 酸 乙酯提取 物为主要 有效 部位 。
次 。二抗 室温 ２ ｈ避光 ， Ｂ Ｐ Ｓ洗 ３次。最后蒸馏 水洗掉 Ｐ Ｓ Ｂ，
甘 油封片。荧光 显微镜 下观 察 ，巢蛋 白在 细胞 质表 达 ，呈 现红 色荧光 。Ｇ Ａ Ｆ Ｐ在细胞质和表 面突起 呈现棕 黄色 。Ｎ Ｅ Ｓ 在 分化细胞 胞质 中呈现棕黄色 。
２ 实 验 结 果
中 国 民 族 民 间 医 药
・
药 物 研 究
Ｔｈ ｍｅ ｉ ｉ ｅ ｔ ｄ ｅ ｄ ｃ ｎ ｓｕ ｙ
３８ ・
Ｃ ｉｅｅｊｕ ｜ｏ ｔｎｍ ｄｅ ｅ ａｄ ｅｈｏ ｈｒ ｃ ｈｎｓ ｏｍａ ｆｅｈｏ ｅ ｉｎ ｎ ｔｎｐ ａ ｉ ｍａｙ
传 代 神 经 干 细胞 体 外 分 化 研 究
李淑芳 桑小 军
包头医学院第一附属医院药剂科 ，内蒙古 包头 ０４ １ １０ ０
【 摘
要 】 目的 ：分离 、培养和鉴定 Ｗｉａ大鼠脑部的神经干细胞 ，传代培养 后进行诱 导分化 。方 法 ：分离培养 神经干 细胞 ，传代 ｓｒ ｔ
后进行诱导分化研究 。结果 ：所分离培养 的细胞具有增殖能力和分化潜能 ，表达 ｎｓｎ 白，诱 导分化后经细胞 免疫学证实 为表达 Ｎ Ｅ的 ｅｔ 蛋 ｉ Ｓ
料来源 于武汉博 士德生物工程有限公司 。新生 １日龄 Ｗｉ ａ ｓｒ ｔ 大鼠３ ０只 ，包 头医学院动物 中心提供 。
１ ．２ 细 胞 培 养
无菌处死新 生大 鼠去大 脑 ，加入 胰酶 和 Ｅ Ｔ Ｄ Ａ各 １ ｌ ｍ， 恒温 ３ ℃消化 时间 ８ ｎ ７ ｍｉ，使 组织细胞 分离 ，并且 吸管轻轻 吹打充分分 离细 胞 ，来自百度文库便 于计数 ，计数 完毕后 后稀 释至 以 １ ０ ｍ 接 种细胞 培养 瓶 内，常规 Ｄ Ｅ Ｆ ２和 １ ７以 Ｘ１５／ ｌ Ｍ Ｍ／ １ ｔ ２ 及表皮 细胞 生 长 因子 （ Ｇ ） Ｅ Ｆ 、碱 性成 纤 维细 胞 生长 因子
固定 ２ ｍｎ Ｂ ０ ｉ，Ｐ Ｓ洗 ３次 。 然 后 ０ ２ Ｔｉ ｎＸ 一１０通 透 ． ％ ｒｏ ｔ ０
图 １ 传 代 细胞 中 巢 蛋 白 表 达
１ ｉ ，Ｐ Ｓ洗 ３次 。接 着 与二 抗 相 同 宿 主 的 血 清 封 闭 ０ｍ ｎ Ｂ
３ ｍｉ，Ｐ Ｓ ３次 。一 抗 ４摄 氏 度 湿 盒 内 过 夜 ，Ｐ Ｓ洗 ３ ０ ｎ Ｂ 洗 Ｂ
神经元和表达 ＧＦ Ｐ的星形胶质细胞 。结论 ：神经干细胞具有体外诱导分化为神经元和星形胶质细胞 的能力 。 Ａ
【 关键词 ｌ 神经干细胞 ；诱导分化 【 中图分 类号】Ｒ ２ ． ８ ３ ９ ２ 【 文献标 识码 】Ａ 【 文章编号】１０ ８ １ （０ ２ ２ ０ ３ ０ ０７— ５ ７ ２ １ ）１ — ０ ８— ２
培养 １ｈ 过相差显 微镜 观察 到部分 细胞 增殖 分裂 为 ８通
细胞团块 ，细胞 团块和数 目随时 间而增加 。在 第 ２ ４ ｈ观察
到神经干细胞聚集 ， ８～ ２ ４ ７ ｈ形成球 形团块 ，形态 规则 ，突
起 不明显 。第 ８ ｄ可见数百细胞克隆 团块呈现悬 浮集落 ，部 分 细胞紧贴培养瓶 内壁 ，第 ４周 时细 胞克 隆呈大 小一 致 的 大球形 和小桑椹 状细胞 克隆 。细胞计 数显 示传代 至第 ７代
神经干细胞是神 经系 统里 面有 自我增 殖能 力和 多 向分 化潜能 以及 自我更 新能 力 的多能 干细胞 ，相关 实验证 实可 分化为神经 系统 的细胞… 。本 实验从 新生 大 鼠大脑匀 浆分
进行 Ｈ Ｅ染色 ，镜 下可 见分 化细 胞 多突起 。免疫 学显 示 以 Ｎ Ｅ和 Ｇ Ａ Ｓ Ｆ Ｐ阳性细胞 为主 （ ２ 。 图 ）
表 １ 培养细胞计数
离培养神经干细胞 ，并且在普通血 清 内进行 体外诱导 分化 ， 经证实为星形胶 质细胞 和 神经元 ，为体 内诱导 神经元 和神
经胶质细胞 的增殖修 复神 经组 织探索新的方法 。
１ 材 料 和 方 法 １ １ 材 料 ．
干细胞常规培养基包 含 Ｄ Ｍ Ｆ ２和 Ｂ ７以及 表皮细 ＭＥ ／ １ ２ 胞生长 因子 （ Ｇ ） Ｅ Ｆ 、碱 性 成纤 维 细胞 生长 因子 （ Ｆ Ｆ） ｂＧ 。 ｎｓ ｎ ｅｔ 抗体 ，Ｎ Ｅ，Ｇ Ａ ｉ Ｓ Ｆ Ｐ通 用型 免疫 组化 试剂 盒 ，以上材
（Ｆ Ｆ ｂ Ｇ ）培养。每 ６天传 代 １次 ，根 据显 微镜 下 计数 绘 图
形 成生长曲线。 １ ．３ 细 胞 免 疫 学 鉴 定
对 连续 培养的神经 干细胞 和 分化 细胞进 行细胞 免疫 学 检测 。神经干细 胞检 测指 标 为 ｎｓ ｎ检 测 ，取 出细胞 爬 片 ｅｔ ｉ 放 到 ３ ５ｍｍ细胞培养皿里 ，Ｐ Ｓ洗 ３次。４ Ｂ ％冷 的多聚 甲醛
３ 讨 论
图 ２ 分化细胞免疫学显示 Ｎ Ｅ Ｓ
神经 干细胞处 于 未分化 状态 ，在一定 条件 下分 化为 神 经元 、星形胶质细胞 、少 突胶质细胞等神经系统细胞 ，神
２ 临 床 应 用
组治疗前 后血脂 检测水 平有 明显变化 （ Ｐ＜００ ） ． １ ，对照 组 也有 同样 结果 ，但两 组 间变化无 区别 ；两组治 疗 ４周和 治 疗 ８周 比较 临床 总有 效率 及血脂 检测 水平 无明显 差异 。表 明软脉灵具有明显的调脂 作用 。
（ 下转第 ４ ０页）
中 国 民 族 民 间 医 药
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菊 物 研 究
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Ｃ ｉｅｅ ｊｕ ｎ ］ｏ ｔｎ ｍ ｄｅ ｅ ａ ｄ ｅｈ ｏ ｈ ｒ ｅ ｈｎ ｓ ｏ ｒａ ｆ ｅ ｏ ｅ ｉ ｎ ｎ ｔｎ ｐ ａｍａ ｙ ｈ ｉ
衍生物等 ６个部 位 ，对其 进行 了调节 免疫 功能 生物 活性筛 选 ，确定 了茯苓 多糖 降解 产物 、羧 甲基化 衍生 物和茯 苓 乙 酸 乙酯提取 物为主要 有效 部位 。
次 。二抗 室温 ２ ｈ避光 ， Ｂ Ｐ Ｓ洗 ３次。最后蒸馏 水洗掉 Ｐ Ｓ Ｂ，
甘 油封片。荧光 显微镜 下观 察 ，巢蛋 白在 细胞 质表 达 ，呈 现红 色荧光 。Ｇ Ａ Ｆ Ｐ在细胞质和表 面突起 呈现棕 黄色 。Ｎ Ｅ Ｓ 在 分化细胞 胞质 中呈现棕黄色 。
２ 实 验 结 果
中 国 民 族 民 间 医 药
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药 物 研 究
Ｔｈ ｍｅ ｉ ｉ ｅ ｔ ｄ ｅ ｄ ｃ ｎ ｓｕ ｙ
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传 代 神 经 干 细胞 体 外 分 化 研 究
李淑芳 桑小 军
包头医学院第一附属医院药剂科 ，内蒙古 包头 ０４ １ １０ ０
【 摘
要 】 目的 ：分离 、培养和鉴定 Ｗｉａ大鼠脑部的神经干细胞 ，传代培养 后进行诱 导分化 。方 法 ：分离培养 神经干 细胞 ，传代 ｓｒ ｔ
后进行诱导分化研究 。结果 ：所分离培养 的细胞具有增殖能力和分化潜能 ，表达 ｎｓｎ 白，诱 导分化后经细胞 免疫学证实 为表达 Ｎ Ｅ的 ｅｔ 蛋 ｉ Ｓ
料来源 于武汉博 士德生物工程有限公司 。新生 １日龄 Ｗｉ ａ ｓｒ ｔ 大鼠３ ０只 ，包 头医学院动物 中心提供 。
１ ．２ 细 胞 培 养
无菌处死新 生大 鼠去大 脑 ，加入 胰酶 和 Ｅ Ｔ Ｄ Ａ各 １ ｌ ｍ， 恒温 ３ ℃消化 时间 ８ ｎ ７ ｍｉ，使 组织细胞 分离 ，并且 吸管轻轻 吹打充分分 离细 胞 ，来自百度文库便 于计数 ，计数 完毕后 后稀 释至 以 １ ０ ｍ 接 种细胞 培养 瓶 内，常规 Ｄ Ｅ Ｆ ２和 １ ７以 Ｘ１５／ ｌ Ｍ Ｍ／ １ ｔ ２ 及表皮 细胞 生 长 因子 （ Ｇ ） Ｅ Ｆ 、碱 性成 纤 维细 胞 生长 因子
固定 ２ ｍｎ Ｂ ０ ｉ，Ｐ Ｓ洗 ３次 。 然 后 ０ ２ Ｔｉ ｎＸ 一１０通 透 ． ％ ｒｏ ｔ ０
图 １ 传 代 细胞 中 巢 蛋 白 表 达
１ ｉ ，Ｐ Ｓ洗 ３次 。接 着 与二 抗 相 同 宿 主 的 血 清 封 闭 ０ｍ ｎ Ｂ
３ ｍｉ，Ｐ Ｓ ３次 。一 抗 ４摄 氏 度 湿 盒 内 过 夜 ，Ｐ Ｓ洗 ３ ０ ｎ Ｂ 洗 Ｂ
神经元和表达 ＧＦ Ｐ的星形胶质细胞 。结论 ：神经干细胞具有体外诱导分化为神经元和星形胶质细胞 的能力 。 Ａ
【 关键词 ｌ 神经干细胞 ；诱导分化 【 中图分 类号】Ｒ ２ ． ８ ３ ９ ２ 【 文献标 识码 】Ａ 【 文章编号】１０ ８ １ （０ ２ ２ ０ ３ ０ ０７— ５ ７ ２ １ ）１ — ０ ８— ２
培养 １ｈ 过相差显 微镜 观察 到部分 细胞 增殖 分裂 为 ８通
细胞团块 ，细胞 团块和数 目随时 间而增加 。在 第 ２ ４ ｈ观察
到神经干细胞聚集 ， ８～ ２ ４ ７ ｈ形成球 形团块 ，形态 规则 ，突
起 不明显 。第 ８ ｄ可见数百细胞克隆 团块呈现悬 浮集落 ，部 分 细胞紧贴培养瓶 内壁 ，第 ４周 时细 胞克 隆呈大 小一 致 的 大球形 和小桑椹 状细胞 克隆 。细胞计 数显 示传代 至第 ７代
神经干细胞是神 经系 统里 面有 自我增 殖能 力和 多 向分 化潜能 以及 自我更 新能 力 的多能 干细胞 ，相关 实验证 实可 分化为神经 系统 的细胞… 。本 实验从 新生 大 鼠大脑匀 浆分
进行 Ｈ Ｅ染色 ，镜 下可 见分 化细 胞 多突起 。免疫 学显 示 以 Ｎ Ｅ和 Ｇ Ａ Ｓ Ｆ Ｐ阳性细胞 为主 （ ２ 。 图 ）
表 １ 培养细胞计数
离培养神经干细胞 ，并且在普通血 清 内进行 体外诱导 分化 ， 经证实为星形胶 质细胞 和 神经元 ，为体 内诱导 神经元 和神
经胶质细胞 的增殖修 复神 经组 织探索新的方法 。
１ 材 料 和 方 法 １ １ 材 料 ．
干细胞常规培养基包 含 Ｄ Ｍ Ｆ ２和 Ｂ ７以及 表皮细 ＭＥ ／ １ ２ 胞生长 因子 （ Ｇ ） Ｅ Ｆ 、碱 性 成纤 维 细胞 生长 因子 （ Ｆ Ｆ） ｂＧ 。 ｎｓ ｎ ｅｔ 抗体 ，Ｎ Ｅ，Ｇ Ａ ｉ Ｓ Ｆ Ｐ通 用型 免疫 组化 试剂 盒 ，以上材
（Ｆ Ｆ ｂ Ｇ ）培养。每 ６天传 代 １次 ，根 据显 微镜 下 计数 绘 图
形 成生长曲线。 １ ．３ 细 胞 免 疫 学 鉴 定
对 连续 培养的神经 干细胞 和 分化 细胞进 行细胞 免疫 学 检测 。神经干细 胞检 测指 标 为 ｎｓ ｎ检 测 ，取 出细胞 爬 片 ｅｔ ｉ 放 到 ３ ５ｍｍ细胞培养皿里 ，Ｐ Ｓ洗 ３次。４ Ｂ ％冷 的多聚 甲醛