仔猪睾丸间质细胞的分离和培养

收集滤液
离心、 弃上清
得沉淀
培养液 溶解 、 吹打
PBS清洗，再离心，弃上清
得沉淀
200目铜网过筛
分散为单细胞
滤液
细胞进行3β-H SD酶活检测
37℃，5%CO2，饱和湿度下培养
稀释至108细胞/mL
胰蛋白酶
（水解细胞间的蛋白质，长时间的胰酶
环境会使细胞受到损伤 ）
酶消化法
I、II、IV型胶原酶 （水解结缔组织中胶原蛋白成分，分离结缔 组织、肌肉组织方面效果较好 ）
影响间质细胞培养的其他因素
培养液的选择、接种密度、培养液的量及 更换、实验操作等 。
仔猪睾丸间质细胞的 分离和培养
睾丸间质细胞(Leydig Cel1s, LCs)是分布于 曲细精管间疏松结缔组织的一种内分泌细 胞，主要生物功能是合成并分泌睾酮。
分离、纯化 1、仔猪睾丸间质细胞的分离和培养
采集3周龄的仔猪睾丸
破碎、消化、过滤
铜网过筛 间质细胞过筛可以获得较好的分离纯化 效果，易贴壁，纯度较高。
活力较低，可能因为铜网过筛对细胞有 一定的机械损伤 。
活力检测
将细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1比例混 匀。计数板计数蓝色的死细胞数和无色透 明的活细胞数，以活细胞率来表示细胞活 力。
台盼蓝可穿过变性的细胞膜进入细胞内，与解体 的DNA结合使其着色，细胞变蓝，即为坏死
纯度检测
3β-HSD染色检测细胞纯度
3β-HSD染色液： A液：DMSO、DHA、NBT. B液：β-NAD、PBS
在睾丸组织中仅睾丸间质细胞内含有3β-羟 类固醇脱氢酶 显微镜下细胞质中有蓝色颗粒的阳性细胞 即为间质细胞
间质细胞形态学观察
培养24h的睾丸间质细胞(×400)
培养48h的睾丸间质细胞(×400)