HPLC-多菌灵等残留量

高效液相色谱法同时测定果蔬中多菌灵、麦穗宁、

甲基硫菌灵和硫菌灵的残留

摘要采用高效液相色谱法测定黄瓜、苹果和西红柿中四种杀虫剂——多菌灵、麦穗宁、甲基硫菌灵和硫菌灵的残留量。样品经过乙腈提取，PSA净化后过滤膜，高效液相色谱分析，以乙腈/水（45/55, v/v）为流动相，在230 nm波长下检测。多菌灵、麦穗宁、甲基硫菌灵和硫菌灵在0.05～10 mg/L范围内的峰面积与其浓度均呈现良好的线性关系，最低检出限分别为5.35、9.85、7.62和13.5 µg/kg。保留时间的日内精密度和日间精密度分别低于0.89%和2.59%，峰面积的日内精密度和日间精密度分别低于 2.59%和7.03%。样品的加标回收率在74.85%～102.3%之间，相对标准偏差在0.47%～6.40%之间。该方法操作简单、快速、灵敏，可用于果蔬中多菌灵、麦穗宁、甲基硫菌灵和硫菌灵的同时检测。

关键字：高效液相色谱；多菌灵；麦穗宁；甲基硫菌灵；硫菌灵

1 引言

苯并咪唑类杀菌剂是以有杀菌活性的苯并咪唑环为母体的一类高效低毒、广谱、内吸性杀菌剂。多菌灵、麦穗宁、甲基硫菌灵和硫菌灵都属于苯并咪唑类杀菌剂[1]，它们广泛应用于果蔬等多种作物的生长期和储存期病害的防治，兼具预防和治疗的作用，与此同时也造成了其在农产品及食品中的残留, 影响了产品的质量和人们的饮食安全。它们能通过叶片、种子渗入农作物体内，也可进入土壤、地表水等人类生存环境，对人、畜产生一定的毒副作用。

联合国粮食及农业组织(FAO) 规定了多菌灵等杀菌剂在农产品中所允许的最高含量: 多菌灵0. 1 mg/kg(花生、甜菜、油菜籽等)、苯菌灵5 mg/kg(西红柿、甘蓝类蔬菜、芥菜等)、甲基硫菌灵2 mg/kg(香豌豆、芹菜、卷心菜)等。中国对农副产品中的多菌灵杀菌剂最终残留限量标准(MRLs)也作出了相应的规定:多菌灵3 mg/kg(梨、葡萄类水果等)、0. 5 mg/kg(黄瓜、西红柿等)[2]。

近年来，随着苯并咪唑类杀菌剂在无公害水果生产中的日益推广，又由于国外严格的农药残留限量标准，因此高效、灵敏、快速的检测方法的研发迫在眉睫。目前，对多菌灵等农药残留的测定主要有薄层色谱法[3]、荧光分光光度法[4]、高

效液相色谱法(HPLC)[5-9]、气相色谱法[10]、毛细管电泳法[11]、免疫学方法和生物法等。在已有的文献等的报道中，对多菌灵和甲基硫菌灵的检测以及这两种农药的同时检测的报道比较多[12]，对麦穗宁的残留检测的报道比较少，麦穗宁和多菌灵一样，也属于苯并咪唑类杀菌剂，如果使用不当，在杀菌杀虫的同时，在农产品中会造成一定的残留，因此，对麦穗宁的残留检测也具有一定的现实意义。另外，对多菌灵、麦穗宁、甲基硫菌灵和硫菌灵四种农药残留的同时检测还未见报道。

本文用高效液相色谱法对多菌灵等四种农药在黄瓜、西红柿和苹果中的残留进行了检测，样品经过乙腈提取，PSA净化后过滤膜，HPLC分析。本文为多菌灵、麦穗宁、甲基硫菌灵和硫菌灵在果蔬中的残留检测提供了一种简单、快速、高效的方法。

2实验部分

2.1仪器与试剂

LC310高效液相色谱仪（江苏天瑞仪器股份有限公司)；TG16-WS台式高速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；HY-4调速多用振荡器（金坛市科析仪器有限公司）；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）。

多菌灵、麦穗宁、硫菌灵和甲基硫菌灵(结构式如图1)的标准品均购自Sigma-Aldrich公司(中国上海)；N-丙基乙二胺（PSA）和二甲基亚砜（DMSO）购自阿拉丁试剂公司(中国上海)；甲醇和乙腈（色谱纯）购自北京百灵威化学技术有限公司；无水硫酸镁(分析纯)；实验用水均为Milli-Q（美国Millipore公司）。

2.2溶液的配制

分别精密称取多菌灵、麦穗宁、硫菌灵和甲基硫菌灵标准品10.0 g，溶解在10 mL DMSO溶液中，制成1.0 mg/mL的标准储备液。标准工作溶液用甲醇/水（45/55，v/v）稀释。溶液放于4℃的冰箱中保存备用。

2.3色谱条件

Waters C18色谱柱（250 mm × 4.6 mm，5 m），每一次实验结束，色谱柱要用100%有机相彻底冲洗；流动相为乙腈/水（45/55，v/v），流速为1.0 mL/min；

紫外检测波长为230 nm ；进样量为20 μL ；实验采用外标法定量。所有试剂在使用前都要过0.45 μm 的滤膜。

2.4 样品前处理[13,14]

2.4.1 试样的制备

分别取黄瓜、西红柿和苹果样品，取可食用部分，将样品用打浆机粉碎匀浆，制成试样备用，剩余试样于-18℃下保存。 2.4.2 样品的提取

分别称取2.5 g 三种果蔬试样于10 mL 具塞离心管中，加入2.5 mL 乙腈，振荡使其混合均匀，然后加入1.5 g 无水硫酸镁，剧烈振荡2 min ，静置30 min ，然后离心，在2500 r/min 的转速下离心5 min ，使乙腈相和水相分离。 2.4.3 样品的净化

移取1.0 mL 上层乙腈溶液，加入200 mg 无水硫酸镁和50 mg PSA 吸附剂，在2500 r/min 的转速下离心5 min ，吸取上层乙腈溶液，过0.2 μm 的有机滤膜，进高效液相色谱仪检测。

N

N

H

NH O

O

O

N H N NH

N H O

S O H N H N S O

O

NH

N H

O

S O H N H N S

O

O

Carbendazim

Fuberidazole

Thiophanate-methyl

Thiophanate

图 1 分析物的结构式 多菌灵（Carbendazim)；麦穗宁（Fuberidazole ）；甲基硫菌灵（Thiophanate-methyl ）和硫菌灵（Thiophanate ） Fig. 1 Structure of analytes

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择

高效液相色谱进行分离检测主要的影响因素有流动相的选择及其比例和检