临床检验中心PCR实验室标准操作程序

临床检验中心PCR实验室标准操作程序

临床基因扩增实验室的设置

1目的：依照实验室设置规范实现核酸扩增荧光检测实验室配置合理，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性

2 范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确各项规章制度

3 操作人：** **

4 实验室设置规章：

4.1 依据：

本实验室按《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）中临床基因扩增检验实验室基本设置标准结合本实验室的条件进行设置，并严格按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字2002第8号）的要求开展临床基因扩增工作(拟开展基因扩增检验项目见附表1) 4.2 实验室设置:

4.2.1实验室主要由试剂储存和准备区（PCR-Ⅰ）、标本制备区（PCR-Ⅱ）、PCR

扩增及产物分析区(PCR-Ⅲ）三个工作室组成。这三区各自独立，每个区设有缓冲间。其布局见实验室平面图（见附图1）。

4.2.2设立各区的门牌，分别是：“试剂储存和准备区（PCR-Ⅰ）”、“标本制备区

（PCR-Ⅱ）”、“PCR扩增及产物分析区(PCR-Ⅲ）”，并在各区门上贴有“非本室工作人员不得进入”标记。

4.2.3建立实验室内务管理，并放在进入实验室的明显位置（如置于缓冲区的墙

上；内务管理应有进入实验的工作流程、进入实验室的要求、实验前的准备及清洁等）。

4.2.4三个工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识：试剂准备区—蓝色，标本制备区

—紫色，PCR扩增及产物分析区—黑色。各区的实验物品不得混用（实验室主要设备一览表见表3）。

4.2.5进入各区的工作流程为：试剂储存和准备区→标本制备区→PCR扩增及产物分析区。

4.2.6进入实验室必须更换有本室标识的工作服及清洁鞋套，工作人员离开某一工作区时，该区物品不得带出本区（包括工作服等）。

4.3各区实验设备及用品配置：

4.3.1试剂储存和准备区：

冰箱（2～8℃和-15℃）、可调式移液器（覆盖0.5～1000ul）、紫外消毒车、固定紫外线灯，混匀器，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离心管），专用实验记录本及记号笔等。

4.3.2 标本制备区：

冰箱（2～8℃和-15℃）、台式高速离心机、水浴锅、净化工作台、混匀器、可调式移液器（覆盖1～1000ul）、紫外消毒车、固定紫外线灯，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离心管），专用实验记录本及记号笔等。

4.3.3 PCR扩增及产物分析区：

Line-Gene全自动荧光定量PCR核酸扩增仪、紫外消毒车、固定紫外线灯，专用工作服，一次性用品（手套、鞋套、吸水纸等），专用实验记录本及记号笔等。

4.4实验室人员设置：

实验室人员配置：我院PCR实验室配备有3名工作人员，其中1人具检验师职称，2人具主管检验师职称。已全部经过安徽省临床检验中心培训，并取得培训合格证（实验室工作人员一览表见表2）。

附表1 拟开展临床基因扩增检验项目一览表

表2 临床基因扩增检验实验室工作人员一览表

表3 临床基因扩增检验实验室仪器设备一览表

图1 基因扩增实验室平面图****医院临床基因扩增实验室

临床基因扩增实验室内部管理规章

1目的：依照实验室管理规范实现全面质量管理，实现核酸扩增荧光检测实验室有专人负责，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性

2 范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确了各项规章制度

3 操作人：**

4 规章：

4.1实验室内务管理规章：

4.1.1标本的接收设在三个区以外的区域（与生化专用标本接收区合用），在标本接收时同时进行以下记录：在标本与化验单上同时进行标本的唯一性编号，在标本接收登记本上记录患者的姓名、年龄，标本接收日期，标本的特性、状态，接收者签名。经验收合格后接收的标本直接运送至标本制备区。

4.1.2实验过程中须严格遵守实验的工作流程：试剂准备区→标本制备区→扩增及产物分析区的唯一流向制度。

4.1.3开启实验区前逐一打开设在缓冲区外墙上的紫外线灯开关（控制实验区的固定紫外灯），照射30分钟。

4.1.4工作开始前，在缓冲区换好本实验区工作衣，戴上一次性口罩、帽子，套上一次鞋套，关闭紫外灯。打开缓冲的排风装置，开启实验区门锁，工作时反锁隔离门。

4.1.5进行测定前的准备和工作记录（实验前的准备和工作记录见表4）：

a)记录冰箱温度、紫外线消毒时间；

b)消毒液、清洁液、75%酒精配制；

c)查看加样器、扩增仪、离心机、灭菌的吸头等是否在有效期限内；

d)校正水浴锅温度；

e)试剂准备：试剂是否在有效期范围内，根据标本量确定准备模板的数量及

阴阳性对照数量；

4.1.6实验过程的记录（见SOP文件）。

4.1.7检测结果的记录（见SOP文件）。

4.1.8实验完成后实验室清洁消毒处理及记录：实验台面、加样器、离心机、超

净工作台、振荡器、扩增仪、实验室空间、实验室地面等（详见实验室清洁制度）。

4.1.9工作结束，内务整理完毕，关闭排风装置及实验区，加锁。

4.1.10唯一流向制度同样运用于实验室物流管理及内务管理。

4.2质量控制规章：

4.2.1制定各种SOP文件并严格执行。

4.2.2参加室间质评。

4.2.3开展室内质控工作。

4.3人员行为规章：

4.3.1要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。

4.3.2实验室人员须保持仪表整洁。

4.3.3严格遵守实验操作规范，不得随意更改操作步骤。

4.3.4实验室技术人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，包括实验室擦洗、台面消毒，离心管、吸头的无菌灭活准备，仪器使用和废弃物的处理等。

4.3.5进入实验室工作人员必须遵守实验室唯一流向制度，无必要尽量减少进入

实验室的次数。

4.3.6 实验室内严禁饮食、吸烟。

4.3.7非本室工作人员未经允许不得进入实验室。

4.3.8语言有礼貌、举止讲文明，对待来访病人或电话应和蔼礼貌，解释明确耐心，不得推脱或生硬回绝。

4.3.9晚上下班要关门、窗，检查空调和仪器的电源是否关闭。

4.4仪器管理规章：

4.4.1实验人员必须熟悉仪器性能方允许操作，严格遵守操作规程。

4.4.2所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，有使用维修记录。

4.4.3仪器使用前必须检查是否完好，一旦发现问题，及时向负责人反映，不得