8第八章 病原性球菌检验
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临床微生物学检验技术
二、临床意义
（一）A群链球菌
1.致病物质
侵袭性酶 透明质酸酶、链激酶 、链道酶 毒素 致热外毒素 、链球菌溶素O和S 胞壁成分 M蛋白、脂磷壁酸等
临床微生物学检验技术
二、临床意义
2. 所致疾病
化脓性感染 皮肤、皮下组织感染：痈、淋巴管炎、蜂窝织炎等
其他系统感染：扁桃体炎、咽峡炎、产褥热、中耳炎等
其他分类
临床微生物学检验技术
二、临床意义
1.致病物质
侵袭性酶
凝固酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等
毒素
葡萄球菌溶素、杀白细胞素、肠毒素、表皮剥脱毒素、 毒性休克综合征毒素-1等
临床微生物学检验技术
二、临床意义
2. 所致疾病
侵袭性疾病
皮肤感染：疖、痈等 器官感染：肺炎、中耳炎、骨髓炎等 全身感染：败血症、脓毒血症
• 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡 萄球菌和猪葡萄球菌阳性
临床微生物学检验技术
鉴定试验
4.吡咯烷酮芳基酰胺酶试验
• 将被检菌24h斜面培养物接种在含吡咯烷酮-β萘基酰胺（ PYR）肉汤中，35℃ 2h，加入PYR试剂后2分钟内呈现深紫 红色为阳性
• 溶血葡萄球菌、路登葡萄球菌、施氏葡萄球菌及中间葡萄 球菌阳性
– ELISA：将抗毒素包被在固相载体中，以双抗体夹心 ELISA法检测样本中的肠毒素
临床微生物学检验技术
五、药敏试验的药物选择
根据CLSI 文件M100-S24 推荐：
• 葡萄球菌属药敏试验的首选药物及常规试验报告的药物 是阿奇霉素或克拉霉素或红霉素、克林霉素、苯唑西林、 头孢西丁、青霉素及复方新诺明
光滑湿润的菌落，可产生金黄色、白色、柠檬色等脂溶性 色素
临床微生物学检验技术
金黄色葡萄球菌的透明溶血环（血琼脂平板）
三、生物学特性
3.抗原
• 表面抗原：葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A, SPA）
• 协同凝集试验
临床微生物学检验技术
三、生物学特性
4.抵抗力
• 较强，耐干燥、耐盐 • 对碱性染料敏感 • 易产生耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MRSA
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
（四）分离培养与鉴定
• 血标本先接种肉汤增菌培养基 • 脓液、分泌物等标本接种血琼脂平板 • 粪便等污染标本接种选择培养基，如高盐甘露醇琼脂平板
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
金黄色葡萄球菌
– 血琼脂平板：菌落圆形凸起，金黄色或橙色，菌落周 围出现透明溶血环
– 高盐甘露醇琼脂平板：黄色菌落
临床微生物学检验技术
初步鉴定
葡萄球菌属
涂片染色镜检 菌落形态 触酶试验阳性 氧化酶试验阴性
临床微生物学检验技术
鉴定试验
1.凝固酶试验
（1）玻片法 检测结合型凝固酶 （2）试管法 检测游离型凝固酶 • 金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌阳性
临床微生物学检验技术
鉴定试验
• 其中苯唑西林仅用于MIC试验，纸片扩散法不可靠
临床微生物学检验技术
第二节 链球菌属（ Streptococcus ）
临床微生物学检验技术
一、分类
根据血琼脂平板的溶血现象分类 • 甲型溶血性链球菌 • 乙型溶血性链球菌 • 丙型链球菌
根据溶血现象和抗原结构分类 • β溶血性链球菌（A、C、G群） • B群β溶血性链球菌（无乳链球菌） • 不溶血D群链球菌 • α溶血性链球菌
中毒性பைடு நூலகம்病
猩红热
超敏反应性疾病
急性肾小球肾炎、风湿热等
临床微生物学检验技术
二、临床意义
（二）肺炎链球菌
1.致病物质
荚膜 肺炎链球菌溶素O 脂磷壁酸 神经氨酸酶
2.所致疾病
大叶性肺炎、支气管炎 中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎等
临床微生物学检验技术
二、临床意义
（三）其他链球菌
• B群链球菌：新生儿败血症、脑膜炎等 • 草绿色链球菌：亚急性细菌性心内膜炎、龋齿
（methicillin-resistant S.aureus）
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
（一）检验程序
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
（二）标本采集
• 根据感染部位采集标本 • 避免病灶周围正常菌群的污染
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
（三）标本直接检查
• 显微镜检查：涂片，革兰染色镜检，根据形态特征可初步报告 • 抗原检测：乳胶凝集试验测定SPA及荚膜抗原 • 核酸检测
第八章 病原性球菌检验
临床微生物学检验技术
第一节
葡萄球菌属（Staphylococcus）
临床微生物学检验技术
一、分类
根据色素、生化反应等表型分类
金黄色葡萄球菌（S. aureus） 表皮葡萄球菌（S. epidermidis） 头状葡萄球菌（S. capitis）等
根据凝固酶分类
凝固酶阳性葡萄球菌 凝固酶阴性葡萄球菌
2.耐热核酸酶试验
待检菌肉汤培养物沸水浴15分钟，取数滴，滴加于甲苯胺 蓝核酸琼脂的小孔内，35℃ 1小时后观察结果
小孔周围蓝色琼脂变粉红为阳性，不变色为阴性 金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄
球菌阳性
临床微生物学检验技术
鉴定试验
3.磷酸酶试验
• 将待测菌点种在加有硝基酚磷酸盐的pH5.6～6.8 M-H琼脂 平板上，18～24h，菌落周围出现黄色为阳性
临床微生物学检验技术
三、生物学特性
1.形态结构 （1）链球菌
革兰阳性球菌，链状排列
临床微生物学检验技术
革兰染色
三、生物学特性
（2）肺炎链球菌
革兰阳性，菌体矛头状、成双排列，宽端相对，尖端向 外，在机体内或含血清培养基中可形成荚膜
临床微生物学检验技术
鉴定试验
5.其他鉴定试验
鸟氨酸脱羧酶试验 脲酶试验 β-半乳糖苷酶 3-羟基丁酮试验 新生霉素耐药试验 多粘菌素耐药试验 糖产酸试验
临床微生物学检验技术
肠毒素检测
• 动物试验
– 幼猫
• 琼脂扩散试验或ELISA法
– 琼脂扩散试验：待测标本中的金黄色葡萄球菌肠毒素 与相应抗毒素在琼脂糖中进行双相扩散，观察有无沉 淀线产生
毒素性疾病
食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征
临床微生物学检验技术
三、生物学特性
1.形态结构
• 革兰阳性球菌，葡萄串状排列 • 无鞭毛、无芽胞，一般不形成荚膜
临床微生物学检验技术
革兰染色
三、生物学特性
2. 培养特性
• 营养要求不高 • 普通琼脂平板上18～24h ，形成直径2mm左右，圆形凸起、
二、临床意义
（一）A群链球菌
1.致病物质
侵袭性酶 透明质酸酶、链激酶 、链道酶 毒素 致热外毒素 、链球菌溶素O和S 胞壁成分 M蛋白、脂磷壁酸等
临床微生物学检验技术
二、临床意义
2. 所致疾病
化脓性感染 皮肤、皮下组织感染：痈、淋巴管炎、蜂窝织炎等
其他系统感染：扁桃体炎、咽峡炎、产褥热、中耳炎等
其他分类
临床微生物学检验技术
二、临床意义
1.致病物质
侵袭性酶
凝固酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等
毒素
葡萄球菌溶素、杀白细胞素、肠毒素、表皮剥脱毒素、 毒性休克综合征毒素-1等
临床微生物学检验技术
二、临床意义
2. 所致疾病
侵袭性疾病
皮肤感染：疖、痈等 器官感染：肺炎、中耳炎、骨髓炎等 全身感染：败血症、脓毒血症
• 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡 萄球菌和猪葡萄球菌阳性
临床微生物学检验技术
鉴定试验
4.吡咯烷酮芳基酰胺酶试验
• 将被检菌24h斜面培养物接种在含吡咯烷酮-β萘基酰胺（ PYR）肉汤中，35℃ 2h，加入PYR试剂后2分钟内呈现深紫 红色为阳性
• 溶血葡萄球菌、路登葡萄球菌、施氏葡萄球菌及中间葡萄 球菌阳性
– ELISA：将抗毒素包被在固相载体中，以双抗体夹心 ELISA法检测样本中的肠毒素
临床微生物学检验技术
五、药敏试验的药物选择
根据CLSI 文件M100-S24 推荐：
• 葡萄球菌属药敏试验的首选药物及常规试验报告的药物 是阿奇霉素或克拉霉素或红霉素、克林霉素、苯唑西林、 头孢西丁、青霉素及复方新诺明
光滑湿润的菌落，可产生金黄色、白色、柠檬色等脂溶性 色素
临床微生物学检验技术
金黄色葡萄球菌的透明溶血环（血琼脂平板）
三、生物学特性
3.抗原
• 表面抗原：葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A, SPA）
• 协同凝集试验
临床微生物学检验技术
三、生物学特性
4.抵抗力
• 较强，耐干燥、耐盐 • 对碱性染料敏感 • 易产生耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MRSA
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
（四）分离培养与鉴定
• 血标本先接种肉汤增菌培养基 • 脓液、分泌物等标本接种血琼脂平板 • 粪便等污染标本接种选择培养基，如高盐甘露醇琼脂平板
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
金黄色葡萄球菌
– 血琼脂平板：菌落圆形凸起，金黄色或橙色，菌落周 围出现透明溶血环
– 高盐甘露醇琼脂平板：黄色菌落
临床微生物学检验技术
初步鉴定
葡萄球菌属
涂片染色镜检 菌落形态 触酶试验阳性 氧化酶试验阴性
临床微生物学检验技术
鉴定试验
1.凝固酶试验
（1）玻片法 检测结合型凝固酶 （2）试管法 检测游离型凝固酶 • 金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌阳性
临床微生物学检验技术
鉴定试验
• 其中苯唑西林仅用于MIC试验，纸片扩散法不可靠
临床微生物学检验技术
第二节 链球菌属（ Streptococcus ）
临床微生物学检验技术
一、分类
根据血琼脂平板的溶血现象分类 • 甲型溶血性链球菌 • 乙型溶血性链球菌 • 丙型链球菌
根据溶血现象和抗原结构分类 • β溶血性链球菌（A、C、G群） • B群β溶血性链球菌（无乳链球菌） • 不溶血D群链球菌 • α溶血性链球菌
中毒性பைடு நூலகம்病
猩红热
超敏反应性疾病
急性肾小球肾炎、风湿热等
临床微生物学检验技术
二、临床意义
（二）肺炎链球菌
1.致病物质
荚膜 肺炎链球菌溶素O 脂磷壁酸 神经氨酸酶
2.所致疾病
大叶性肺炎、支气管炎 中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎等
临床微生物学检验技术
二、临床意义
（三）其他链球菌
• B群链球菌：新生儿败血症、脑膜炎等 • 草绿色链球菌：亚急性细菌性心内膜炎、龋齿
（methicillin-resistant S.aureus）
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
（一）检验程序
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
（二）标本采集
• 根据感染部位采集标本 • 避免病灶周围正常菌群的污染
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
（三）标本直接检查
• 显微镜检查：涂片，革兰染色镜检，根据形态特征可初步报告 • 抗原检测：乳胶凝集试验测定SPA及荚膜抗原 • 核酸检测
第八章 病原性球菌检验
临床微生物学检验技术
第一节
葡萄球菌属（Staphylococcus）
临床微生物学检验技术
一、分类
根据色素、生化反应等表型分类
金黄色葡萄球菌（S. aureus） 表皮葡萄球菌（S. epidermidis） 头状葡萄球菌（S. capitis）等
根据凝固酶分类
凝固酶阳性葡萄球菌 凝固酶阴性葡萄球菌
2.耐热核酸酶试验
待检菌肉汤培养物沸水浴15分钟，取数滴，滴加于甲苯胺 蓝核酸琼脂的小孔内，35℃ 1小时后观察结果
小孔周围蓝色琼脂变粉红为阳性，不变色为阴性 金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄
球菌阳性
临床微生物学检验技术
鉴定试验
3.磷酸酶试验
• 将待测菌点种在加有硝基酚磷酸盐的pH5.6～6.8 M-H琼脂 平板上，18～24h，菌落周围出现黄色为阳性
临床微生物学检验技术
三、生物学特性
1.形态结构 （1）链球菌
革兰阳性球菌，链状排列
临床微生物学检验技术
革兰染色
三、生物学特性
（2）肺炎链球菌
革兰阳性，菌体矛头状、成双排列，宽端相对，尖端向 外，在机体内或含血清培养基中可形成荚膜
临床微生物学检验技术
鉴定试验
5.其他鉴定试验
鸟氨酸脱羧酶试验 脲酶试验 β-半乳糖苷酶 3-羟基丁酮试验 新生霉素耐药试验 多粘菌素耐药试验 糖产酸试验
临床微生物学检验技术
肠毒素检测
• 动物试验
– 幼猫
• 琼脂扩散试验或ELISA法
– 琼脂扩散试验：待测标本中的金黄色葡萄球菌肠毒素 与相应抗毒素在琼脂糖中进行双相扩散，观察有无沉 淀线产生
毒素性疾病
食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征
临床微生物学检验技术
三、生物学特性
1.形态结构
• 革兰阳性球菌，葡萄串状排列 • 无鞭毛、无芽胞，一般不形成荚膜
临床微生物学检验技术
革兰染色
三、生物学特性
2. 培养特性
• 营养要求不高 • 普通琼脂平板上18～24h ，形成直径2mm左右，圆形凸起、