外周血染色体核型分析PPT演示幻灯片

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外周血
淋巴 细胞
PHA 细胞增殖
秋水仙素
离心 5mins
弃上清液
弃上清液
3x甲醇 1x冰乙酸
吸管吸取
滴入载玻片
烘烤
75摄氏度，3hours
离心 7mins
染色
固定
胰酶消化25s 生理盐水漂洗
KCL氯化钾 溶液 0.075 离心 7mins
吉姆萨溶液 染色1-2mins
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项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析 (Cont.)
➢明显体态异常，智力低下，发育障 碍，多发畸形或皮纹明显异常，性情 异常
➢第二性征异常或外生殖器两性畸形。
➢女性原发性闭经、继发性闭经或男 子无精
➢长期接触X线、电离辐射、有毒物 质的人员
➢恶性血液病患者
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简介 (Cont.)
染色体核型技术检测 （产前婚前孕 前诊断）：
Eg. 猫叫综合症 （5P综合症), 特 纳综合症， 先天性睾丸发育不良综 合症，超雄综合症 (XYY综合症)， 超雌综合症(XXY综合症)。
实验原理： Test Principal
➢ 外周血中淋巴细胞在含有植物血 凝素(PHA)的培养基中培养68-72 小时，进入生长旺盛的有丝分裂 期；
➢ 之后加入秋水仙素抑制纺锤体形 成，使其停留在细胞分裂中期；
➢ 再经过氯化钾溶液低渗、固定、 滴片制片、胰酶消化、姬姆萨染 色，在油镜下可观察到每个分裂 期的染色体形态及数量。
3.细胞的收获：
1）用离心机以2200转/分钟离心5分钟后弃 上清液。
2）加入0.075M的KCl溶液10ml，充分混匀 ，低渗时间为15-18分钟 。
3）预固定：低渗后加入固定液1ml充分混 匀（固定液是甲醇与冰乙酸按3：1混匀）， 以2200转/分钟离心7分钟。
4） 吸弃上清液，加入10ml的固定液，混 匀。
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项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析 (Cont.)
实验操作： Test Procedure
5）用离心机以2200转/分钟离心7分钟，吸弃 上清，加入10ml 固定液轻轻混匀（两管合一） ，2200转/分钟离心7分钟。
6）弃上清，加入适量的固定液轻轻混匀使成 细胞悬液。
7）取出在4℃冰水中预冷的清洁玻片，对玻片 进行标识，每标记完一块滴片板上的玻片,就回 顾一下是否编号准确。
➢ 外周血染色体核型分析可直接在染色体上显 示带型，不仅可以检测染色体数目上的变化， 而且可以观察到缺失、重复、倒位、异位等 结构上的异常，因而其检测可用在遗传病以 及产前婚前孕前的诊断上。
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简介 (Cont.)
染色体核型技术检测 （遗传病诊 断）：
Eg. 唐氏综合症 (21-3体)，Patau 综合症(18-3体)， Edwards综合症 (13-3体)。
一定条件刺激下 （Eg. 药物、射线、 病毒或母亲年龄），染色体会发生数 目或结构畸变。
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背景知识 (Cont.)
染色体畸变 – 数目改变： Quantity changes
染色体畸变 – 结构异常： Unusual structure
➢多倍性：体细胞染色体数目成倍增 加。 原因： 双雄受精，双雌受精， 核内复制。 ➢非整倍性： 体细胞染色体数目增加 或少一条或数条。原因： 减数分裂 染色体不分离或丢失。
➢多发性流产，死胎和不孕不孕的夫 妇
➢35岁以上高龄孕妇
➢已生育过染色体异常患儿的夫妇， 或双方或一方具有遗传病家族史
➢夫妇双方或一方为可疑或已知的染 色体数目或结构异常的患者
➢婚前孕前检查希望进行优生优育检 查的人群
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临床应用： Application
检测方法： Method 样本量： Sample
项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析
➢染色体异常是导致自然流产、胚胎停止 发育，不良孕产史和不孕不育及发育异常 的重要原因，对优生优育门诊就诊的患者 进行染色体分析，在临床诊断和优生优育 方面有重要意义。 ➢培养法G显带
➢肝素抗凝全血2.0ml
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项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析 (Cont.)
900bphs水平看到，一致视为双方同源。 12
G显带评判标准： Evaluation Score
目的： 对不同级别条带 水平进行评判， 便于染色体的操 作分析
➢ 0： 无条带 ➢ 1： 鉴定同一条染色体的形态和主要标志 ➢ 2： 低 (小于300条) ➢ 3： 300条带 ➢ 4： 适中 (400条带) ➢ 5： 500条带 ➢ 6： 好 (600条带) ➢ 7： 700条带 ➢ 8： 优良 (850条带) ➢ 9： 900条带 ➢ 10： 条带决定高于9级的额外带能在
➢缺失：染色体臂中段或末端丢失。 ➢倒位：某一染色体中间片段发生两 个断裂，断片倒转180°后重接。 ➢易位： 转位，平衡易位，罗伯逊易 位
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简介 (Introduction)
概念：源自文库Concept
目的： Purpose
➢ 染色体核型分析是分析生物体细胞内染色体 的长度、着丝点位置、臂比、随体大小等特 征，其分析以体细胞分裂中期染色体为研究 对象。
8）用吸管吸取细胞悬液在适当的高度滴于预 冷的清洁玻片上，玻片的头体尾各一滴即可。
9）每滴完一张片后，用纸轻轻将底面擦干， 放至滴片柜中，10分钟后拿出贴上细胞遗传小 标签。
4.烤片：置于75摄氏度烤箱烤3小时。
5.染片：在胰酶中消化20-25s，在生理盐水中 漂洗，在吉姆萨溶液中染色1-2分钟即可。
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项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析 (Cont.)
实验操作： Test Procedure
1.接种：先在每瓶含有PHA的5ml培养基的 培养瓶中接种0.5ml的外周血，接种2瓶。
2.培养：37℃全封闭式培养68-72h。在细胞 收获前加入0.1ml浓度为20ug/ml秋水仙素培 养1-1.5h。
外周血染色体核型分析
D区，合作共建团队，大客户团队
2018.06.23
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背景知识（Background information)
染色体与遗传病： Genetic Disease
染色体的多变性： Variability
染色体的畸变： Aberration
多达300多种因染色体异常而导致的 遗传疾病
46条染色体在不同的人体内存在恒定 的微小变异 （无表型效应or病理学意 义）