外周血染色体核型分析 项目简介
人类外周血染色体标本制备及G带观察及核型分析
实验报告课程名称：分子医学实验 指导老师： 成绩： 实验名称： 人类外周血染色体标本制备G 带观察及核型分析 同组学生姓名：一、实验目的及原理三、实验结果二、操作步骤 四、讨论分析一、 实验目的及原理熟悉人类外周血淋巴细胞的培养方法。
初步掌握人类染色体标本培养和制备的基本方法。
通过实验掌握Ｇ带标本制备的基本方法，学会在显微镜下直接观察G 带分裂相。
在细胞周期的不同阶段，染色体的结构不同，在细胞分裂间期，染色体呈现细长的丝状结构，分散于细胞核中，且交织成网状，难以识别其数目和每个染色体特有的结构；在细胞有丝分裂中期,染色体凝缩形成短的棒状结构，排列在赤道板上，此时染色体的形态、数目最清楚，所以一般选择有丝分裂中期的细胞来观察染色体的形态、数目。
在人类遗传分析中，普遍采用外周血培养的方法制备染色体标本。
但是在正常情况下，外周血中的淋巴细胞，几乎都处在G1期或G0期，因而外周血细胞中是没有分裂相的。
在细胞培养过程中加入植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA) ，可以刺激外周血淋巴细胞转变为淋巴母细胞，进行有丝分裂，再通过秋水仙素处理，将细胞阻断在有丝分离中期。
再通过离心、低渗、固定和滴片，就可以获得大量有丝分裂相。
最后通过染色就可以观察染色体的结构和数目。
本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面广泛应用。
有许多显示Ｇ带的方法，最常用的是将已经过老化的染色体制片放到37℃胰酶中进行处理，然后用Giemsa 染色。
胰酶可以从染色体上抽取蛋白特定的组成部分。
通过胰酶处理使Ｇ带区的疏水蛋白被除去或使它们构型变为更疏水状态。
由此可见在Ｇ带区中抽取的蛋白往往是疏水蛋白。
关于显带机理有多种论点，总的来说，还不能完全解释显带的机理问题。
二、操作步骤人类外周血染色体标本制备１、采血２、培养RPMI1640培养液，37℃ 0.5℃恒温中培养72小时。
3、秋水仙素(colchicine)处理在终止培养前２-３小时，加入秋水仙素。
染色体核型分析实验报告
染色体核型分析实验报告染色体核型分析实验报告染色体核型分析是一项重要的实验技术，它能够帮助我们了解个体的遗传特征以及染色体异常与疾病之间的关系。
本次实验旨在通过染色体核型分析，观察和分析不同个体的染色体组成，并探讨染色体异常与遗传疾病之间的关联。
实验过程中，我们选择了一组健康的个体作为研究对象，采集了其外周血样本。
通过细胞培养和染色体制备技术，我们成功地制备出了染色体悬液。
接下来，我们使用高倍显微镜观察了染色体的形态和数量。
在观察过程中，我们发现了不同个体之间染色体的差异。
正常情况下，人类细胞核中的染色体应该为23对，其中包括22对常染色体和一对性染色体。
常染色体是指除性染色体以外的其他染色体，它们负责携带遗传信息，决定了个体的大部分遗传特征。
性染色体则决定了个体的性别。
通过观察，我们发现了某些个体的染色体数量存在异常。
这种异常可能是由于染色体缺失、重复或结构异常等原因引起的。
染色体缺失是指染色体上的一部分或整个染色体丢失，而染色体重复则是指染色体上的一部分或整个染色体重复出现。
染色体结构异常则是指染色体上的片段发生断裂、倒位、交换等变化。
染色体异常与许多遗传疾病之间存在着密切的关系。
例如，唐氏综合征是由于21号染色体上的三个染色体引起的，患者通常具有智力发育迟缓、面部特征异常等症状。
另外，爱德华氏综合征是由于18号染色体异常引起的，患者通常出现心脏和肾脏畸形等问题。
通过染色体核型分析，我们可以准确地检测出这些染色体异常，为遗传疾病的诊断和治疗提供有力的依据。
除了遗传疾病，染色体核型分析还可以应用于其他领域。
例如，它可以用于法医学领域的亲子鉴定，通过比对父母与子女的染色体核型，确定亲子关系。
此外，染色体核型分析还可以用于评估环境因素对染色体的影响，例如辐射和化学物质对染色体的损伤程度。
总结起来，染色体核型分析是一项重要的实验技术，它可以帮助我们了解个体的遗传特征以及染色体异常与疾病之间的关系。
通过观察染色体的形态和数量，我们可以准确地检测染色体缺失、重复和结构异常等问题，并为遗传疾病的诊断和治疗提供依据。
外周血培养及核型分析
染色体标本制备过程中有两个重要环节，
原理如下：
(1)低渗处理：目的是使水分通过细胞膜向细胞 内渗入，导致转化的淋巴细胞，染色体进一步 分散而利于分析。同时，低渗处理还可使红细 胞质膜破裂，经后血影浮于上清中被去除，后 续的固定过程主要针对淋巴细胞，改善了淋巴 细固定质量及标本的状态，以便作进一步处理，若不固定 则可因细胞内蛋白质分解而导致结构变化。染 色体研究中常用固定液为甲醇一冰醋酸 (3 ： 1) 固定液。冰醋酸渗透力强，固定迅速，但易使 组织膨胀而甲醇则可使组织收缩，两者混合使 用能抵消各自的缺点，得到较好的固定效果。
外周血淋巴细胞是不能增殖的分化 细胞群，在体外无菌培养条件下，若于 培养基中植物凝集素(PHA)则可刺激处于 G。期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，重 新有丝分裂的能力，经一段时间的培养 即可获得大量分裂期细胞以供染色体分 析。秋水仙素 ( 或秋水酰胺 ) 可通过干扰 微管组装而抑制纺锤丝形成，使细胞分 裂顺利进入后期而停滞于中期，从而可 在短期内积累大量最适于进行染色体分 中期分裂相。此外，秋水仙素还能使染 色单体缩短、分开，使染色体呈现明显 形状而利于辨认。
(5) 离心速度太高，细胞团块不易打散，速 度太低，则会丢失细胞。 (6) 细胞太多或太少亦能影响分裂相的多少， 及标本质量。 （ 7 ）机械打散细胞团时，用力要适度，若 用力过猛，细胞易破碎，染色体不完整。 ( （ 8) ．固定液纯度要高，临用时新鲜配制， 应沿管壁慢慢加入后打匀，如果固定液加入 太快，会使固定作用过强，染色体扭转；固 定液作用不足，染色体出现毛刷状。 （ 9 ）实验结果要求交一张清晰的显微照片 和用相关软件分析的核型图。
一、实验目的和要求
1、 掌握无菌操作的原理和方法；
2、 掌握外周血培养的原理和方法；
外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析
外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析一、实验目的（1）、熟悉淋巴细胞体外培养原理。
（2）、掌握人体微量血液体外培养技术。
（3）、通过本次实验掌握制备染色体标本的方法。
（4）、观察人类染色体的形态，并计数、配对、分类和绘图。
（5）、培养学生的自主能力，锻炼学生的动手操作能力。
二、实验原理外周血液中的小淋巴细胞几乎都处在G1期（或Go期）一般情况下是不再分裂的在培养液中加入植物凝血素 (PAH) 时这种小淋巴细胞受刺激转化成为淋巴母细胞随后进入有丝分裂。
这样经过短期培养秋水仙素的处理低渗和固定就可获得大量的有丝分裂细胞。
本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面广泛应用。
细胞培养是在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。
要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度和渗透压的调节。
二是严格控制无菌条件。
染色体是组成细胞核的基本物质, 是基因的载体。
人类细胞遗传学研究的主要对象是染色体。
本实验采用了微量全血培养技术，既方便又节省人力物力。
在正常情况下, 人外周血中是没有分裂相的, 只有在异常情况下才能发现。
植物血细胞凝集素(PHA) 是人类淋巴细胞有丝分裂的刺激剂,在 PHA 作用下, 原处于 G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞, 进而进行有丝分裂。
利用 PHA 这一特性, 淋巴细胞经过含有 PHA 培养液培养, 在体外便可获得丰富的含有丝分裂的生长活跃的细胞群体, 终止分裂中期的淋巴细胞, 经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可获得大量的中期有丝分裂细胞。
最后经空气干燥法制片，便可得到质量较好的染色体标本。
即可得到所需的人体染色体图形。
染色体组型，又称核型，是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群（亚种、种、属等）的体细胞内的整套染色体，按它们相对恒定的特征排列起来的图像。
出生缺陷儿的染色体核型分析内容是什么
出生缺陷儿的染色体核型分析内容是什么为探讨出生缺陷与染色体核型异常之间的关系，我们对154例出生缺陷患儿进行外周血淋巴细胞染色体G显带核型分析，发现其中31例为染色体异常，染色体畸变率为20.13%，其结果报告如下。
1对象与方法1.1对象在重庆市2002年8月～2003年11月期间鉴定的独生子女病残儿中选出154例出生缺陷儿。
其中，年龄最小的2岁，最大的16岁，平均年龄7.6岁;男112例，占72.7%，女42例，占27.3%。
1.2方法采取患儿静脉血0.8ml，置RPMI1640培养基培养72h，常规制片、G显带分析，每例镜下计数30个分裂相，核型分析5个，发现核型异常那么增加计数分析。
2结果在154例出生缺陷儿中，发现染色体异常31例(检出率20.13%)涉及异常核型6种，其中典型的21-三体综合征10例，klinefelter综合征4例，Y染色体异常12例，Turner综合征2例(均为嵌合型)，超雄1例，性反转2例(见表1)。
表131例染色体异常核型(略)3讨论出生缺陷是指出生时发生的遗传疾病和不具遗传倾向的先天性畸形。
目前我国出生缺陷的发生率约为13.7，其中原因大致可分为3种:遗传因素、环境因素、不明因素。
本文154例出生缺陷儿发现31例为染色体异常，染色体异常发生率为20.13%。
因此，在出生缺陷儿中染色体畸变率的发生较高。
在出生缺陷儿中，智力低下的病因复杂，有遗传因素、胚胎期因素及后天因素。
本文154例出生缺陷儿均有不同程度的智力(MR)低下、发育缓慢、生殖器发育异常。
其中先天愚型(21-三体)发生率占首位，10例为32.2%(男女之比8:2)。
可见智力低下最常见的异常核型为21-三体。
典型的21-三体几乎都是新发生的。
与父母核型无关(它主要是母方生殖细胞在减数分裂时不别离的结果)。
本文中涉及的病残儿的父母生育患儿时年龄均未超过30岁，染色体核型分析为正常，因此排除平衡易位携带者遗传和生殖细胞老化等因素。
核型分析实验报告
核型分析实验报告核型分析实验报告引言：核型分析是一种常用的生物学实验方法，通过观察和研究细胞的染色体形态和数量，可以了解生物个体的遗传特征和进化关系。
本实验旨在通过核型分析，研究不同生物个体的染色体组成，为进一步研究生物的遗传机制提供基础数据。
实验方法：本实验选取了人类、小麦和果蝇作为研究对象，采用了不同的核型分析方法。
首先，我们从参与者的外周血中提取白细胞，并进行细胞培养。
接着，使用染色体抗体标记技术，对细胞进行染色体着色。
对于小麦，我们采用了根尖细胞的处理方法，通过醋酸铁染色技术，观察和记录染色体的形态和数量。
对于果蝇，我们使用了显微镜观察和计数的方法，通过观察幼虫的唾液腺染色体，来确定其核型。
实验结果：在人类的核型分析中，我们观察到了46条染色体，其中包括22对常染色体和1对性染色体。
这与人类的常染色体数目为46，性染色体数目为2的正常核型相符。
小麦的核型分析结果显示，其染色体数目为42条，均为常染色体，这与小麦的正常核型相符。
果蝇的核型分析结果显示，其染色体数目为8条，其中包括6条常染色体和2条性染色体。
这与果蝇的正常核型相符。
讨论与分析：通过核型分析，我们可以了解不同生物个体的染色体组成和数量，从而揭示其遗传特征和进化关系。
人类的染色体数目为46条，其中包括22对常染色体和1对性染色体。
这与人类的正常核型相符，说明本实验中的参与者是一个正常个体。
小麦的染色体数目为42条，均为常染色体，这与小麦的正常核型相符，说明小麦样本也是一个正常个体。
果蝇的染色体数目为8条，其中包括6条常染色体和2条性染色体。
这与果蝇的正常核型相符，说明果蝇样本也是一个正常个体。
核型分析的结果还可以为进一步研究生物的遗传机制提供基础数据。
例如，在人类的核型分析中，如果发现染色体数目异常或存在结构异常，可能与染色体畸变相关的遗传疾病有关。
通过进一步研究这些异常染色体，可以揭示这些疾病的发生机制和治疗方法。
此外，在农业领域，对作物的核型分析可以了解不同品种的染色体组成和数量，为选育优良品种和改良作物提供依据。
染色体核型分析
染色体核型分析染色体核型分析介绍：染色体核型分析是分析生物体细胞内染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体大小等特征，其分析以体细胞分裂中期染色体为研究对象。
染色体核型分析正常值：正常人的体细胞染色体数目为46条，且形态和结构正常。
染色体核型分析临床意义：异常结果：经行核型分析后，可以根据染色体结构和数目的变异来判断生物的病因，比如是由于缺少了什么样的基因才导致的这种疾病。
需要检查的人群：怀疑有染色体异常疾病的患者。
染色体核型分析注意事项：不合宜人群：暂时未明。
检查前禁忌：1、在早晨空腹采血，应禁食咖啡、浓茶、高糖及可乐类饮料;2、月经后才可做此检查。
检查时要求：1、周血染色体检测发报告时间一般为20天~1个月。
应用羊水培养进行产前染色体检查发报告时间为20天，应用脐血培养进行产前染色体检查发报告时间为10天;2、平静状态抽血，避免情绪激动。
染色体核型分析检查过程：染色体检查是用外周血在细胞生长刺激因子―植物凝集素(PHA)作用下经37℃，72小时培养，获得大量分裂细胞，然后加入秋水仙素使进行分裂的细胞停止于分裂中期，以便染色体的观察;再经低渗膨胀细胞，减少染色体间的相互缠绕和重叠，最后用甲醇和冰醋酸将细胞固定于载玻片上，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
正常男性的染色体核型为44条常染色体加2条性染色体X和Y，检查报告中常用46，X Y来表示。
正常女性的常染色体与男性相同，性染色体为2条XX，常用46，XX表示。
46表示染色体的总数目，大于或小于46都属于染色体的数目异常。
缺失的性染色体常用O来表示。
【注意事项】大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。
人类外周血染色体标本制备及G带观察及核型分析
实验报告课程名称：分子医学实验 指导老师： 成绩： 实验名称： 人类外周血染色体标本制备G 带观察及核型分析 同组学生姓名：一、实验目的及原理三、实验结果二、操作步骤 四、讨论分析一、 实验目的及原理熟悉人类外周血淋巴细胞的培养方法。
初步掌握人类染色体标本培养和制备的基本方法。
通过实验掌握Ｇ带标本制备的基本方法，学会在显微镜下直接观察G 带分裂相。
在细胞周期的不同阶段，染色体的结构不同，在细胞分裂间期，染色体呈现细长的丝状结构，分散于细胞核中，且交织成网状，难以识别其数目和每个染色体特有的结构；在细胞有丝分裂中期,染色体凝缩形成短的棒状结构，排列在赤道板上，此时染色体的形态、数目最清楚，所以一般选择有丝分裂中期的细胞来观察染色体的形态、数目。
在人类遗传分析中，普遍采用外周血培养的方法制备染色体标本。
但是在正常情况下，外周血中的淋巴细胞，几乎都处在G1期或G0期，因而外周血细胞中是没有分裂相的。
在细胞培养过程中加入植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA) ，可以刺激外周血淋巴细胞转变为淋巴母细胞，进行有丝分裂，再通过秋水仙素处理，将细胞阻断在有丝分离中期。
再通过离心、低渗、固定和滴片，就可以获得大量有丝分裂相。
最后通过染色就可以观察染色体的结构和数目。
本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面广泛应用。
有许多显示Ｇ带的方法，最常用的是将已经过老化的染色体制片放到37℃胰酶中进行处理，然后用Giemsa 染色。
胰酶可以从染色体上抽取蛋白特定的组成部分。
通过胰酶处理使Ｇ带区的疏水蛋白被除去或使它们构型变为更疏水状态。
由此可见在Ｇ带区中抽取的蛋白往往是疏水蛋白。
关于显带机理有多种论点，总的来说，还不能完全解释显带的机理问题。
二、操作步骤人类外周血染色体标本制备１、采血２、培养RPMI1640培养液，37℃ 0.5℃恒温中培养72小时。
3、秋水仙素(colchicine)处理在终止培养前２-３小时，加入秋水仙素。
5blood实验5 人外周血淋巴细胞培养及染色体核型分析
实验5 人外周血淋巴细胞培养及染色体核型分析5.1 相关基础知识人外周血液中的小淋巴细胞，几乎都处在G1期（G0期），一般情况下是不再分裂的。
在培养液中加入植物凝血素（PAH）时，小淋巴细胞受刺激转化为淋巴母细胞，随后进入有丝分裂。
这样经过短期培养、秋水仙素的处理、低渗和固定，就可获得大量的有丝分裂细胞。
目前本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等领域广泛采用。
人类每个体细胞有46条染色体，22对常染色体和一对性染色体，男子是46，XY；女子是46，XX。
根据各组染色体的特征予以分组：A组：（N01～03）是最大的一组染色体，它们的着丝粒在中部或几乎在中部；B组（N04～05）为两对大的亚中着丝粒染色体，它们有显的长臂和短臂；C组（N06～12+X）为中等大小的亚中着丝粒染色体，它们大小相差不多，X染色体大小介于期间，一般难以区分；D组（N013～15）为中等大小的端着丝粒染色体，它们的一个重要形态特征是随体，随体是一对着色很深的小球，处于短臂的末断，随体与短臂之间的区域很少着色；E组（N016～18）包括一对中着丝粒染色体，亚中着丝粒染色体和一对近端着丝粒染色体；F组（N019～20）为两对小的中着丝粒；G组（N021～22+Y）为最小的一组端着丝粒染色体，在N021～22的短臂上可见随体，Y常呈现异固缩状态，着色更深，可以识别。
5.2 实验目的和要求(1)掌握人体微量血液体外培养技术和制备染色体标本的方法；(2)观察人类染色体的形态，并计数、配对、分类和绘图。
5.3 实验材料和仪器5.3.1 实验材料和试剂(1)人的外周血淋巴细胞；(2)Giemsa母液：量取33ml甘油，先在研钵内加入少量甘油与0.5g Giemsa粉混合，研磨至无颗粒为止，再将剩余甘油倒入，搅拌后于56o C水浴保温2小时，再加入33ml甲醇，搅拌均匀后储存于棕色瓶中；(3)Giemsa染色液：将Giemsa母液用0.1M pH7.4磷酸缓冲液稀释至10倍。
5667例外周血淋巴细胞染色体核型分析_马金元
类别
染色体核型
47，XX（Y），+21[ 含伴 inv（9）5 例 ]
所占比例 例数
（%） 719 87.05
类别
染色体核型
46，XY，t（11 ；22）（q25 ；q13）
46，XX（Y）/47，XX（Y），+21
17 2.06
45，XY，t（13 ；14）（p11 ；q11）
46，XX（Y），-13，+t（13 ；21）
女性），8 例为 46,XX（社会性别男性）。另有 16 例性染 色体为嵌合型，该 16 例中 15 例核型为 45,X/46,XX，其中 社会性别男性 12 例 ；社会性别女性 3 例。余 1 例染色体 核型为 46,XX/46,XY，社会性别为男性。以上各项所占百 分比见表 2。本文根据已有病人的病理报告查实，在社会 性别与染色体不符的病人之中有 3 例为真两性畸形。关于 46,XY 性反转的发病机制目前仍无确切的解释。归纳出来 的假说有 4 种 [8]，（1）Y 染色体上 SRY 基因突变或缺失，（2） SOX 基因突变，（3）其它性别决定相关基因突变，（4）患 者内的 XX/XY 嵌合体未能被检出。有关 46,XX 男性综合 征的发病机制也有 4 种假说 [9]。（1）易位说，在减数分裂 时，Y 和 X 染色体或常染色体之间有染色体片段的交换，（2） 丢失和失活说，即 X 染色体短臂上有片段丢失或失活，而 丢失或失活的片段恰好能抑制睾丸不发育，（3）嵌合体说 ： 没能检出嵌合体现象，（4）基因突变说，指常染色体基因 突变。以上观点说明，性反转及两性畸形的发病机制十分 复杂，到目前为止，有些问题仍未搞清楚，但随着科学技 术的发展，相信人们对其发病机制会有更深刻的认识。 3.6 染色体多态性与临床的关系
〖医学〗人类外周血培养和染色体核型分析
人类外周血培养和染色体核型分析
主要仪器： （1） 超净工作台 （2） 大容量低速离心机 （3） 二氧化碳培养箱和电热恒温培养箱 （4） 电热恒温干燥箱 （5） 水浴锅 （6） 天平 （7） 显微镜
人类外周血培养和染色体核型分析
试剂：
培养基（含80% RPMI-1640营养液，20% 胎牛血清，每5mL中加1-2%植物血球凝 集素和各500单位的青、链霉素）
2 染色体臂率（比）＝q/p 3 着丝粒指数＝p/单条染色体总长 根据上述三个重要参数，将染色体分成7个组，即A－G
组，X染色体长短在C组内，Y染色体长短归于G组内。
思考题：
人类染色体畸变的类型 制片质量的关键步骤 人类染色体组型分析的标准
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根据第五次人类遗传学国际会议讨论通过的内容， 1978 年 发 表 了 ISCN （ An International System for Human Cytogenetic Nomenelature）根据规定的内容， 非显带方法的人类染色体的核型分析依据如下：
1 染色体相对长度＝单条染色体长度/正常单套常染色 体＋X染色体的总长度
* Giemsa工作液（10%）需要新鲜配制（以蒸馏水或 1/15M 磷酸缓冲溶液配制）
人类外周血培养和染色体核型分析
0.0125%胰蛋白酶（效价1:250，以生理盐 水配制）
0.2M HCL 2.5% Ba(OH)2：新鲜配制并经65oC热过滤 2×SSC（0.3M NaCL + 0.03M 柠檬酸钠）
编辑本段明清时期（df肺25s血液f369血小板t5172红 血球gdf55m白 血球fd2）
是中医学理论综合汇编、深化发展，临 床各科 辨证体 系丰富 、提高 阶段。 如明代 楼英的 《医学 纲目》 和王肯 堂的《 证治准 绳》， 清代吴 谦等编 著的《 医宗金 鉴》和 陈梦雷 主编的 《古今 图书集 成·医部 全录》 等。王 清任著 《医林 改错》 ，注重 实证研 究，（ df高血 压958心脏病983u6糖 尿病87fr）纠 正了古 医籍中 关于解 剖知识 的某些 错误， 肯定了 “脑主 思维” ，发展 了瘀血 理论。 温病学 说的形 成和发 展，标 志着中 医理论 的创新 与突破 ，吴有 性著《 温疫论 》，叶 天士著 《温热 病篇》 ，吴鞠 通著《 温病条 辨》等 ，在药 物学研 究方面 ，（45传染病q566丙 肝964jo乙肝28jgs x甲 肝gh）李时珍 著的《 本草纲 目》， 总结了16世纪 以前我 国药物 学研究 的成就 。医的 诊察疾 病能参 考现代 医学的 微观分 析，将 辨证与 辨病相 结合， 实现宏 观与微 观的统 一，使 中医诊 断客观 化，即 把分析 与综合 相结合 的方法 引入中 医理、 法、方 、药的 研究， 使二
人类外周血培养及染色体核型分析
人类外周血培养及染色体核型分析一、实验目的：1.学习外周血淋巴细胞悬浮培养的原理和方法；2.利用培养后进行分裂的细胞制备人类染色体标本；3.利用人类染色体核型分析软件进行核型分析。
二、实验原理：1、植物血凝素的作用外周血中的淋巴细胞几乎都是处在G0或G1期，一般情况下是不分裂的。
当在培养基中加入植物血凝素(PHA)时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，进而开始进行有丝分裂。
2、秋水仙素的作用：秋水仙素(colchicines)可以抑制细胞纺锤体的形成，使处在分裂的细胞停留在中期。
因此利用秋水仙素处理可以获得许多同步的中期分裂细胞。
使用秋水仙素处理会引起染色体在一定程度上的收缩，因此在处理时间和浓度上要合适。
3、低渗的原理：徐道觉(T.C.Hsu)等于1952年发现在固定细胞之前使用低渗液进行处理，可以使细胞的核膜吸水膨胀，滴片后细胞破裂，染色体分散开来，在显微镜下易于观察和统计，染色效果也明显提高。
这种技术被广泛采用后，使人类染色体分析技术得到了发展。
4、核型和带型：核型(karyotype)：是指染色体组在有丝分裂中期的表型, 是染色体数目、大小、形态特征的总和。
在对染色体进行测量计算的基础上, 进行分组、排队、配对, 并进行形态分析的过程叫核型分析。
将一个染色体组的全部染色体逐条按其特征画下来，再按长短、形态等特征排列起来的图称为核型模式图，它代表一个物种的核型模式。
带型（banding pattern）即染色体带型。
借助细胞学的特殊处理程序，使染色体显现出深浅不同的染色带。
染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。
常用的显带技术所显示的带有Q带、G带、C带、R带、T带等。
就每一种分带技术而言，每一染色体的带型是高度专一和恒定的。
三、实验用具及试剂：1.实验仪器及用具：恒温培养箱、离心机、恒温水浴箱、冰箱、显微镜、显微数码摄像系统、染色体分析仪；培养瓶、注射器、微量移液器、枪头、吸管、离心管(10ml)、载玻片、烧杯、量筒。
外周血染色体制备及分析
外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。
外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，便能制备供显微镜分析的染色体标本。
由于整个培养过程操作比较繁琐，许多操作步骤对结果都有非常重要的影响，比如接种的血量，培养基的质量，培养的时间和温度，秋水仙素加入的时间和浓度、低渗的时间，预固定、固定的时间以至制片时的温度和湿度等.本实验室经过长期的实践和总结，对培养的每个步骤都实行严格的标准化操作，取得良好的效果，具体方法如下：一、试剂准备1、0.2%的肝素溶液2、0.0005%秋水酰胺溶液（黑色纸包裹避光置4℃冰箱保存）3、0.075mol/Ll氯化钾溶液4、3：1甲醇冰醋酸溶液（固定液，临用前配制）5、10%Giemsa染色液（将Giemsa原液临用前用PH7.4的磷酸缓冲液即PBS新鲜配制）二、采血与培养取外周血淋巴细胞培养基(RPMI1640)室温复融，并标记姓名、编号，每例标本接种2瓶，肝素湿润的无菌注射器采取静脉血1-2ml，于每瓶接种0.3-0.5ml。
置37℃培养箱内培养72小时。
每日早晚定时摇匀培养物1次。
收获细胞前2小时，用5号针头加入10ug/ml秋水仙素2-3滴，（培养基中秋水仙素的最终浓度为0.1ug/ml左右）。
摇匀后继续培养 2小时。
三、收获细胞培养箱中取出培养瓶：将培养的细胞移入10ml刻度离心管中，标记姓名、编号，以1000转/分钟，离心10分钟后弃上清。
1低渗处理：向离心管中加入6-8ml事先预温（37℃）的0.075mol/L Kcl低渗液，用吸管轻轻吹打,使细胞均匀悬浮于低渗液中,放回37℃恒温水浴箱（或培养箱）中，静置15-20min，使白细胞膨胀，染色体分散、红细胞解体。
2、预固定：向离心管中加入固定液（甲醇：冰乙酸3：1）1ml，轻轻混匀。
染色体核型检查报告分析
染色体核型检查报告分析染色体核型检查是一种常见的遗传学检查方法，通过观察和分析染色体的核型结构，可以了解个体的遗传信息和可能存在的染色体异常。
本报告将对染色体核型检查结果进行详细分析和解读。
1. 样本信息本次染色体核型检查样本为一名患者的外周血液样本。
通过之前的临床询问和初步筛查，怀疑患者可能存在染色体异常。
为了准确分析问题，我们进行了染色体核型检查。
2. 检查方法染色体核型检查采用了传统的细胞遗传学分析方法。
首先，将外周血液样本中的淋巴细胞或骨髓细胞培养，并在细胞分裂的特定阶段进行采样。
然后，利用染色体着色剂对染色体进行标记，最后通过显微镜观察和摄影记录。
3. 检查结果经过仔细观察和分析，我们得出了以下结论：染色体核型为46，XX/XY，即正常女性/男性核型。
在我们的检查中未发现染色体数目异常或结构异常的情况。
这意味着该患者的染色体组成符合正常人类性别特征，并且不具备明显的染色体异常。
4. 结果分析该患者的染色体核型正常，排除了染色体数目异常或结构异常所引起的一些遗传性疾病的可能性，例如唐氏综合征、爱德华氏综合征等。
然而，染色体核型检查并不能排除一些微小基因变异或变异型染色体，这些变异可能对某些疾病的发生和发展产生影响。
因此，在染色体核型正常的情况下，患者仍需要结合临床症状和其他检查结果进行综合评估。
5. 建议和注意事项染色体核型检查作为一种常规遗传学检查方法，能够帮助医生了解个体的遗传状况。
然而，染色体核型检查并非适用于所有疾病的筛查方法。
对于特定的遗传性疾病，可能需要进行更加精细和深入的检查，例如单基因突变检测、FISH技术等。
总结：染色体核型检查结果显示该患者的染色体核型正常，未发现明显的染色体异常。
这对于了解患者的遗传状态和排除染色体异常性疾病非常重要。
然而，遗传疾病的发生是一个复杂的过程，染色体核型检查并不能完全排除遗传风险。
因此，在临床上，医生仍需根据患者的临床症状和其他检查结果进行全面评估和判断。
人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析
西南大学《细胞生物学自主实验》课程论文论文题目：人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析学院：生命科学学院专业：生物科学年级班级：2010级5班校区编码：北区姓名：陈建坤二零一二年十二月四日人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析【摘要】：染色体是遗传物质的载体，它具有贮存和传递DNA、控制基因活动和调整基因重组的作用。
本文着重介绍通过对人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析，初步了解到对人体外周血淋巴细胞培养方法与人类体细胞染色体核型分析的方法。
该实验采用人工离体培养的方法，采集人体外周血淋巴细胞，在加有植物血球凝集素（PHA，刺激小淋巴细胞转化为淋巴母细胞而进行有丝分裂）的培养基中培养。
经过（72±2）恒温培养，秋水仙素处理、低渗和固定，获得大量有丝分裂中期细胞。
最后经过空气干燥法制片，对人体外周血淋巴细胞进行染色体核型分析。
【关键字】：人体外周血淋巴细胞染色体核型人工离体培养一．引言:染色体是遗传物质的载体，它具有贮存和传递DNA、控制基因活动和调整基因重组的作用。
人类染色体核型分析是将人的一个体细胞有丝分裂中期的染色体，在技术的基础上，按照染色体的大小和形态特征（主要根据着丝点位置），对染色体进行分组、排队和配对。
这对于探索人类遗传病的发病机理，探讨动物和植物的起源，以及物种间的亲缘关系等都具有重要意义。
直到上世纪50年代，科学家对染色体本身的细致深入研究才成为可能。
染色体组型分析是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、形态与功能之间，人类G显带核型图谱关系所不可缺少的重要手段。
1952年徐道觉用低渗法使细胞膨胀，使染色体充分分散开来。
1956年，Tjio等用秋水仙素使细胞分裂固定在分裂中期，增加了细胞分裂相。
之后，有科学家建立了人体外周血培养法，使得染色体取材变得更加容易，大大推动了人类对染色体的研究。
二．人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析1.实验依据：.细胞培养是在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。
外周血核型分析实验步骤及原理
带，而那些组蛋白和DNA结合牢固 的区段可被染成深带。
胰酶消化20~30s 生理盐水漂洗
氯化钾 (0.075M) 30分钟
3、低渗处理 氯化钾等低渗液使粘附在染色体上的
核仁物质散开，并且使细胞膨胀，染色体 铺展。
4、固定
加固定液
通过核蛋白凝结沉淀，使染色体的折
2、加秋水仙素 秋水仙素抑制细胞分裂，使
细胞分裂停止在中期以获得足够 量的分裂期细胞。
滴片、分散
离心 调悬浮液
离心 留0.5ml 加固定液
6ml
离心 留0.5ml 加固定液
6ml
5、分散
甲醇迅速挥发，乙酸吸收空 烤片
染色
气中水分，促使染色体破膜铺展。 80℃，3h
6、G显带 Lee等(1973)认为染色体上与
2019-9-19
04 外 周 血 核 型 分 析 实 验 步 骤 及 原 理
1、细胞培养 正常情况下，人体外周血淋
巴细胞不再分裂，但植物血凝素 (PHA)可刺激血中的淋巴细胞转化 成淋巴母细胞，使其恢复增值能 力
外周血淋 巴细胞
秋水仙素
(10μg/ml)
1小时 离心
PHA
(1500rpm,
10分钟)
弃上清 留0.5ml
(甲醇：冰醋酸 射系数发生很大变化。
。
1ml，混匀
瞬间杀死细胞，使分裂停留在所需的
时期。
防止因细胞死亡而导致的蛋白质自溶。
吉姆萨染色 3-5分钟
7、染色 吉姆萨染液由天青，伊红组成嗜酸性
颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合， 染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白 和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝 或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质； 中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结 合，染淡紫色，称为中性物质。。
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外周血染色体核型分析项目简介
临床应用：用于染色体遗传病的诊断、不孕不育、先天畸形、智障诊断、胚胎植前筛选等。
检测结果的临床意义
我国，人口中有20-25%的人患有各种遗传病，其中由染色体病导致的有近1400多万人。
染色体病主要表现为不孕、不育、反复性或自发流产、死胎、生育异常儿、闭经、智力发育不全或智力低下、多发畸形等。
然而，染色体病至今没有特殊、有效的疗法，主要在于预防和早期干预，所以做染色体检查，对于遗传咨询、降低出生缺陷、正确的生育指导及提高人口素质均具有重要意义。
适检人群
1.不明原因的生长、发育迟缓，异常面容，多发畸形，身材矮小，两性畸形和智力发育迟缓的病人。
2.不明原因死产和新生儿死亡。
10%是由于染色体异常导致。
3.具有原发性闭经或不明原因的继发性闭经的女性。
4.原发性不育或习惯性流产的夫妇。
约3%～6%的原发性不育或习惯性流产的夫妇，其中一方存在染色体异常。
5.一级亲属中携带已知的或者可疑的染色体异常。
6.肿瘤。
几乎所有的肿瘤都与一条或多条染色体异常相关，肿瘤组织的染色体检查有助于临床诊断和预后评估。
7.高龄妊娠。
孕妇年龄大于30～35岁时，其胎儿染色体异常的风险明显增加，因此应对高龄孕妇的胎儿常规进行染色体分析。
标本采集要求
1.采集要求：无菌采静脉血3ml，使抗凝剂与静脉血充分混匀,防止凝固，等待本中心配送人员收取，应在室温4～25℃保存。
采样和送检过程要严格无菌操作，严防溶血、凝血。
2.化疗期间病人和大剂量或长期使用抗生素病人需停药半个月后采血。
3所有样本应在保质期内及时送检（保存24小时）。
过了保质期样本不能保证培养效果。
或通知临床重新抽血送检。
4.如有大量饮酒或有酗酒习惯，采血期间尽量避免。
临床项目收费标准。