植酸酶活性的测定方法

计算机在生命科学中的运用

植酸酶的活性测定方案

生132-2

201370502239

熊雨洁

一、基本原理

随着植酸酶的大规模应用，饲料企业如何选择和鉴别植酸酶产品，已成为使用者的当务之急。在众多影响使用效果的因素中，产品本身的因素主要包括酶的种源、含量、温度稳定性、容重、pH 值曲线特性及体内水解效率等，其中酶活含量是最重要的质量指标。

饲用植酸酶酶活性的定量分析至今没有普遍公认的检测方法,

在参考了AOAC 方法的基础上采用分光光度法测定饲用植酸酶活性。

酶活性对反应条件十分敏感，测定条件和测定程序的不同对结果有极大的影响。

一个植酸酶活性单位U定义“在温度为37 ℃、pH 值5.5 的条件下，每分钟从植酸钠浓度为5.0 mmol/l 植酸钠溶液中释放1 μmol 无机磷，

二、仪器试剂

植酸酶（Sigma公司）、钼酸铵、钒酸铵、稀硝酸、植酸钠、乙酸钠均为分析纯。

三、主要设备

超净工作台，721型分光光度计，PHS-3TC型精密数显酸度计，80-2型离心沉淀器。

四、实验步骤

无机磷测定方法：

准确称取0.6804g在105℃烘至恒重的基准磷酸二氢钾于100mL容量瓶中，用乙酸缓冲液溶解，并定容至100mL，浓度为50.0mmol/L，加显色液显色，以无机磷浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，在波长415nm处测定吸光度值。

植酸酶活性测定方法：

发酵液经3000r/min离心去除菌体，上清液利用截留分子量为10000U的透析袋在去离子水中透析2h得到去除无机磷的酶液，将酶液用pH5.5的乙酸钠缓冲液稀释至合适浓度，取1mL于37℃预热5 min。然后加入2倍体积的5mmol/L植酸钠溶液，37℃恒温反应15min后立即加入2mL颜色终止液。室温条件下静置10min后于3000r/min离心10min。空白对照是将酶液和终止液37℃温浴15min后再加入底物植酸钠。

五、结果与讨论

1. 同一底物的不同酸碱度对植酸酶活性影响的试验方法

在37 ℃的试验条件下，改变底物植酸钠（P8810）pH ，测定酶促反应的初速度。以pH为横坐标，A为纵坐标作图

表 1 同一底物的不同酸碱度对植酸酶活性的影响

图1 同一底物的不同酸碱度对植酸酶活性的影响

从图表可以看出，酶活性与pH有关。不同的pH溶液中酶活性不同。

其中过酸或过碱抑制酶活，最适PH在6左右。

2. 不同离子对植酸酶活性影响的试验方法

在37 ℃、pH 5.5 的试验条件下，改变溶液中离子的种类，测定反应液的吸光度A。以离子I为横坐标，A为纵坐标作图。

表 2 不同离子对植酸酶活性影响

图2 不同离子对植酸酶活性影响

从图表可以看出，酶活性与离子的浓度有关。不同的离子溶液中酶活性不同。

其中锌和铜抑制酶活，钙和镁促进酶活。

3. 不同温度对植酸酶活性影响的试验方法

在pH 5.5 的试验条件下，改变反应温度，测定反应液的吸光度A。

以温度T为横坐标，A为纵坐标作图。

表 3 不同温度对植酸酶活性影响

图3 不同温度对植酸酶活性影响

从图表可以看出，酶反应活性与温度有关。低温和高温都会抑制酶活性。酶的最适

反应温度在45度左右。

4 同一底物浓度对植酸酶活性影响的试验方法

在37 ℃、pH 5.5 的试验条件下，改变底物植酸钠（P8810）浓度，测定酶促反应的初速度。取两者的倒数分别为横纵坐标作图

表 4 同一底物对不同酶活水平植酸酶酶活检测的影响

图4 同一底物对不同酶活水平植酸酶酶活检测的影响

从图表可以看出，底物浓度的倒数与酶反应初速度成正相关。较低的底物浓度不能使植酸酶完全催化，但较高的底物浓度对植酸酶的催化活性也有抑制作用。

5.不同37°Chr对植酸酶活性影响的试验方法

在37 ℃、pH 5.5 的试验条件下，改变Chr，测定酶促反应的初速度。以37°Chr 为横坐标，A为纵坐标作图。

表5同一底物不同37°Chr对植酸酶酶活检测的影响

图5同一底物不同37°Chr同对植酸酶酶活检测的影响

从图表可以看出，底Chr与酶活成正相关。当Chr接近无穷大时，酶活有最大值。

6.离子浓度对酶活性影响的试验方法

在37 ℃、pH 5.5 的试验条件下，改变Cu和Zn的浓度，测定酶促反应的Con。

表6离子浓度对酶活性影响

图6离子浓度对酶活性影响

从图表可以看出，不同的离子浓度对酶活性的影响程度不同。

7.不同温度和pH下酶比活性变化

在37 ℃的试验条件下，改变温度，测定酶促反应的比活。

表7 同不同温度和pH下酶比活性变化

图7 不同温度和pH下酶比活性变化

从图表得，不同温度和pH下酶比活性不同。