RGD靶向溶栓药物的研究进展
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ｇｌｅ ｃｈａｉｎ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ
响因素
组抑制血小板的聚集一Ｊ。有功能的ＲＧＤ序列都位于 暴露、伸展的分子表面，并且ＲＧＤ序列本身的空间构 象以及其附近的氨基酸基团对ＲＧＤ序列和ＧＰ
１１ ｂ／
Ⅲａ受体识别过程和识别能力极为重要。研究¨驯提 示ＲＧＤ的三维构象更有利于ＲＧＤ序列突出在药物分 子的表面，从而发挥更好的靶向作用，构象越稳定，与 受体的结合活性越低。ＲＧＤ序列羧端相连的氨基酸 残基通过调节肽链的构象，进而影响肽链与ＧＰ Ⅱｂ／Ⅲａ受体的结合水平。ｓｕ等¨ｕ通过电脑模拟的 方法得到了两种有合理空间位象的嵌合体ＳＡＫ模型， 其中一种含ＲＧＤ序列，一种含ＤＧＲ序列，即ＲＧＤ的
ＪＩＮＧ Ｌｉ—ｌｉ，
ＺＨＯＵ Ｊｉａｎ—ｚｈｏｎｇ， ＺＨＡＮＧ Ｈａｎｇ—ｋｅ
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ
２．Ｓｃｈｏｏｌ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
酸）序列。内源性ＲＧＤ序列存在于多种黏附蛋白（如
万方数据
・２ｌＯ・
！垒鱼篮痘堂选星！！！Ｑ生箜！！鲞筮！翅丛生鱼型ｉ婴！旦查：些丝！！！Ｑ。坠！：！！：丛：！
融合在ＳＡＫ的Ｃ末端，但此突变造成了ＳＡＫ溶栓活 性的降低。此后Ｓｚｅｍｒａｊ等¨４１成功地在ｒ－ＳＡＫ的Ｃ末 端加入组织型纤溶酶原激活剂（ｔｉｓｓｕｅ
ａｔ
ｓｐｅｃｉａｌ
ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ｐｌａｔｅｌｅｔ
ｂｂｅｔａ３（ＧＰⅡｂ／Ⅲａ），Ｃａｌｌ
ａｎｄ
ａｌｅ
ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｓｉｔｅｓ．Ｔｈｕｓ－ＲＧＤ—ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｈａｖｅ
ｃｕｒｒｅｎｔ
ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ
ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ ｂｅｉｎｇ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｉｓ
４．１．１
ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ＳＣＵ・ＰＡ），
也就是前尿激酶的ｋｒｉｎｇｌｅ区１１８位Ｇｌｙ与１１９位Ｌｅｕ 之间插入ＰＲＧＤＷＲ序列，突变体与野生型ＳＣＵ—ＰＡ相 比具有明显的抗血小板聚集活性，是一种双功能的溶 栓分子。孙迎庆等Ⅲ１在尿激酶原Ｋ区ｃ端的发夹区 插入了ＲＧＤＳ片段，得到了嵌合体型尿激酶原，嵌合体
纤维蛋白原、ｖＷＦ、纤维粘连蛋白）中，发挥了血小板聚 集和血栓形成等多种生物功能。其中纤维蛋白原上的 ＲＧＤ序列和ＧＰ １Ｉ ｂ／ｎｌａ受体的特异性结合是各种因 素致血小板聚集和血栓形成的共同最终通路Ｍ Ｊ。在 正常条件下，ＧＰｌＩ ｂ／１１１ａ受体的空间构象稳定，血小板 没有活性。当血浆中的血小板诱导剂［如凝血酶、胶 原蛋白、二磷酸腺苷（ＡＤＰ）、血栓素Ａ：等］与血小板
２
ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ
ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔ—ＰＡ）的环饼状结构Ｋ２、ＲＧＤ序列和水蛭素 （ｈｉｒｕｄｉｎ），得到了ＳＡＫ—ＲＧＤ．Ｋ２．Ｈｉｒ，体外试验显示该 融合蛋白不仅保留了良好的抗凝和激活纤维蛋白原活 性，而且与ｒ—ＳＡＫ相比，有着更好的抗血小板聚集和纤 维蛋白粘连活性。此后，Ｓｚｅｍｒａｊ等。１纠又在大鼠静脉 血栓模型上证明了ＳＡＫ－ＲＧＤ—Ｋ２一Ｈｉｒ比ｒ・ＳＡＫ有着更
！垒堡簦速芏连屋；！！Ｑ堡筮ｉ！登筮２翅丛生垡型ｉ！坚竖墨生：！鱼坐！Ｑ！Ｑ：堑型：！！：丛：！
・２０９・
ＲＧＤ靶向溶栓药物的研究进展
景丽丽１ 综述周建中１ 张良珂２ 审校 重庆４０００１６；２．重庆医科大学药学院， 重庆４０００１６） （１．重庆医科大学附属第一医院心血管内科，
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＲＧＤ－ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ
中图分类号：Ｒ９６２；Ｒ５４１．４
摘要：溶栓药物的靶向运榆系统可提高溶栓药物的特异性和靶向性，减少溶栓药物全身用药所致的各种不良反应和临床并 发症。血小板膜糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体的活化是血小板聚集的最终共同通道，在血栓形成中起到重要作用。ＲＧＤ序列作为活化血小 板膜糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体的特异性配体，具有抗血小板聚集作用和血栓靶向性。因此国内外学者运用ＲＧＤ序列制备靶向溶栓药 物，并对比类药物进行靶向溶栓研宄。现就ＲＧＤ靶向溶栓药物的研究进展做一综述。 关键词： ＲＧＤ序列；靶向运输系统；溶栓药物
ｂ／１１１
膜上相应受体结合，并且经不同的细胞内信号机制使
ＧＰｌＩ ｂ／ｍａ受体立体构象发生改变并暴露活化后，纤
维蛋白原中的ＲＧＤ序列即与暴露活化的ＧＰ １１ ｂ／Ⅲａ 受体结合瞪］。纤维蛋白原可同时与２个血小板上激活 的ＧＰｌＩ ｂ／ｌｌＩａ受体结合，在相邻的血小板之问形成横 桥，引起血小板交联，该过程犹如链条，把相邻的血小 板连在一起，形成血栓。综上所述，ＲＧＤ序列只能与 血栓部位活化的血小板结合，而对循环血小板没有影 响。这也正是ＲＧＤ序列发挥血栓靶向性作用的基础。
ＲＧＤ序列配体与ＧＰ ＩＩ ｂ／ｍａ受体相互作用的影 ＲＧＤ序列通过作用于ＧＰ ＩＩ ｂ／１１ ａ受体的ＩＩ ｂ亚
强的溶栓活性。在此基础上，Ｋｏｗａｌｓｋｉ等¨钊用与
Ｓｚｅｍｒａｊ等同样的方法得到了融合蛋白ＳＡＫ．ＲＧＤ—Ｋ２． Ｈｉｒｕｌ，体外试验表明：与ｒ．ＳＡＫ和ＳＡＫ—ＲＧＤ—Ｋ２．Ｈｉｒ相 比，ＳＡＫ。ＲＧＤ．Ｋ２．Ｈｉｒｕｌ有着更好的溶栓、抗凝和抗血 小板聚集功能。 研究者利用ＲＧＤ序列对野生型葡激酶的Ｎ端氨 基酸序列进行了修饰，体外试验表明突变体有高度的 纤溶活性和显著的抗血小板聚集活性Ⅲ＇１８ Ｊ。Ｎｉｎｇ 等¨引在构建的低免疫原性葡激酶突变体ｍＳＡＫ （Ｋ１３０Ｔ、Ｋ１３５Ｒ）的基础上，通过位点特异突变，将葡 激酶的３５、３６、３７位氨基酸分别替换为Ｒ、Ｇ、Ｄ，得到 了ＲＧＤ一葡激酶突变体ｍＳＡＫ（Ｋ１３０Ｔ、Ｋ１３５Ｒ），活性分 析结果表明，ＲＧＤ．ｍＳＡＫ蛋白的溶栓活性不仅不低于 野生型葡激酶，而且还具有良好的抗血小板聚集效应 和低免疫原性。２００４年Ｓｕ等¨¨同样研制了集溶栓 活性、抗血小板聚集活性、低免疫原性为一体的多重功 能分子ＲＧＤ．ＳＡＫ和ＤＧＲ．ＳＡＫ。２００７年，Ｃｈｅｎ等Ⅲ］ 的体外试验显示ＲＧＤ．ＳＡＫ抑制ＡＤＰ诱导的血小板聚 集呈剂量依赖性，并且在猪冠脉血栓模型上证实各种 浓度的ＲＧＤ—ＳＡＫ溶解５０％血块的时间显著缩短。 Ｋｏｃｈａｎｏｗｓｋｉ等旧ｕ利用基因技术将两个ＲＧＤ序列引 入到ＳＡＫ内部，得到融合蛋白ＳａｋＳＴＡＲ，该蛋白有着 良好的溶栓作用，并且它的抗血小板聚集率达２７％。 ４．１．２以前尿激酶或尿激酶原为基础的含ＲＧＤ序列 的嵌合体溶栓药物：Ｌｉｎ等心２１将含有甘氨酰．脯氨酰一 精氨酰一脯氨酸（Ｇｌｙ—Ｐｒｏ—Ａｒｇ－Ｐｒｏ，ＧＰＲＰ）序列和ＲＧＤ 序列的ＧＺ５连接到前尿激酶的丝氨酸（ｓＰＡ）的Ｎ端， 制得了重组尿激酶的突变体ＧＺ５一ｓＰＡ，它保留了野生 型前尿激酶的抗原决定部位，溶栓活性是尿激酶的３ 倍。党听等旧列在单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｓｉｎ．
４
ＲＧＤ靶向溶栓药物溶栓作用的研究进展 目前，此类药物均采用基因工程技术合成，且主要
４．１含ＲＧＤ序列的嵌合体溶栓药物 在重组葡激酶（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｓｔａｐｈｙｌｏｋｉｎａｓｅ，ｒ－ＳＡＫ）、葡 激酶（ｓｔａｐｈｙｌｏｋｉｎａｓｅ，ＳＡＫ）、尿激酶原（ｐｒｏｕｒｏｋｉｎａｓｅ）、 前尿激酶（ｐｒｏ—ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）等基础上进行。
ＧＰＩＩ ｂ／１１Ｉ
ａ受体
的特异性配体，具有抗血小板聚集作用和血栓靶向性。
基于此，国内外研究者将ＲＧＤ序列用于制备靶向溶栓 药物¨圳。现将ＲＧＤ靶向溶栓药物的研究进展综述如
下。
１
ａ受体特异性地识别ＲＧＤ序列。研
ＲＧＤ序列的结构和功能 ＲＧＤ序列即Ａｒｇ－Ｇｌｙ—Ａｓｐ（精氨酰列的结构物均可通 过其内部的ＲＧＤ序列抑制纤维蛋白原与ＧＰⅡｂ／ＩＩＩａ 受体两者的结合，阻断血小板的聚集，抑制血栓形成。
相反序列，体外抗血小板试验显示两种嵌合体ＳＡＫ有
类似的抗血小板活性，提示ＧＰ ＩＩ
ｂ／１１１
ａ可能仅识别
ＲＧＤ的空间构象，而与氨基酸顺序无关。ＲＧＤ肽有线 状和环状两种结构，环状ＲＧＤ肽比相应线性肽有着更 强的受体结合力和受体特异性。对ＲＧＤ一脂质体的研 究［１引发现环状ＲＧＤ．脂质体与活化血小板的结合力明
以ｒ—ＳＡＫ或ＳＡＫ为基础的含ＲＧＤ序列的嵌
合体溶栓药物：１９９７年，Ｗａｌｄａ等成功地将ＲＧＤ序列
万方数据
坐照暨丛堂进壁垫！Ｑ生筮！！鲞筮２盟丛生鱼型丝！坚竖旦垫：！垒竺！垫！！：丝！：！！：丛：兰
・２１１・
型尿激酶原保留了全部野生型尿激酶原的纤溶酶原激 活活性，并具有很强的抗血小板聚集活性。 ４．１．３其它含ＲＧＤ序列嵌合体溶栓药物：溶栓寡肽 Ｐ６Ａ及其类似物已被证实有溶栓作用，将ＲＧＤ序列引 入它们的ｃ端和Ｎ端，构成了杂交寡肽序列，动物溶 栓模型上，杂交寡肽因其良好的血小板靶向性，溶栓活 性较母体寡肽明显增强。 抗栓肽（Ｄｅｃｏｒｓｉｎ）是从北美水蛭中提取的抗凝血 多肽，其Ｃ端含ＲＧＤ序列。Ｄｅｃｏｒｓｉｎ可以很好地和 ＧＰＩＩｂ／１１Ｉａ受体相互作用，有望成为新的ＧＰ １Ｉ ｂ／Ｉｎａ 受体拮抗剂∞］。张磊亮等‘驯成功得到了Ｄｅｃｏｒｓｉｎ和 尿激酶原的重组蛋白ｄｓｃｕＰＡ，ｄｓｃｕＰＡ有较强的溶栓、 抗栓和抗血小板聚集功能。
ｔｙｐｅ
目前，以ＲＧＤ序列为基础的ＧＰＩＩ ｂ／１１１ａ受体拮抗剂， 如替罗非班、拉米非班等，被广泛应用于临床急性冠状 动脉综合征，其抗血小板、抑制血栓的疗效得到充分肯 定［８］。利用ＲＧＤ序列对血栓部位活化血小板的靶向 作用，制备ＲＧＤ靶向溶栓药物，减少系统纤溶和出血 并发症，同时也抑制血栓部位血小板聚集，减少溶栓过 程中继发于血栓溶解、血流再灌注的再栓塞的发生，真 正意义上提高了溶栓药物的靶向性和特异性，减少了 不良反应和临床并发症。
４０００１６，Ｃｈｉｎａ；
ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
４０００１６，Ｃｈｉｎａ） 文献标识码：Ａ
文章编号：１００４－３９３４（２０１０）０２－０２０９－０４ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－３９３４．２０１０．０２．０１９
ａｎ
１Ｉ ｂ／Ｕｌ
ａ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ∞ｌ＇ｖｅｓ够ａ ｃｏｍｍｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ
ｓｅｒｖｅｓ ａｓ ａ
ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｔｈｅ ＲＧＤ ｍｏｔｉｆ。ｗｈｉｃｈ ｔａｒｇｅｔ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｒｅｖｉｅｗ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ
ｃａｎ
ｉｍｐｍｖｅ
ｔｈｅｉｒ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｒｅｄｕｃｅ ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ－ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｏｍｐｌｉｃａ－
ｔｉｏｎｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｄｒｕｇ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｇｌｙｅｏｐｒｏｔｅｉｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ。ａｎｄ ｐｌａｙｓ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｌｐｈａ ＩＩ ｂｅｅｎ
多等缺点，导致临床并发症的发生，主要是出血倾向和
继发于再灌注的再栓塞。提高溶栓药物的特异性和血 栓靶向性，使药物选择性地作用于血栓部位，减少药物 的不良反应和临床并发症，成为当前溶栓药物一个亟 待解决的问题。 近年国内外学者进行了新型靶向溶栓药物的探 索。血小板膜糖蛋白（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＰ）Ｕ ｂ／１１ａ受体 的活化是血小板聚集的最终共同通道，在血栓形成中 起到重要作用。ＲＧＤ序列作为活化ＧＰ ＩＩ
显高于线状ＲＧＤ．脂质体。
３
ＲＧＤ靶向溶栓药物 目前，ＲＧＤ靶向溶栓药物的制备方式主要
有ｎＪ ３１：（１）利用基因工程技术，使溶栓药物和ＲＧＤ序 列蛋白在细胞株或菌株中共同表达得到含ＲＧＤ序列 的嵌合体溶栓药物。（２）以ＲＧＤ序列为导向，脂质体 为载体的ＲＧＤ导向溶栓药物。目前ＲＧＤ靶向溶栓药 物正在实验研究阶段ｇ
ｄｅｓｃｒｉｂｅｓ
ｍｓｅａｒｃｈ ｉｎ ＲＧＤ—ｔａｒｇｅｔｅｄ
ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ
ａｇｅｎｔｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：
ＲＧＤ ｍｏｔｉｆ；ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ；ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ
ａｇｅｎｔｓ
血栓的形成在冠状动脉粥样硬化、急性冠脉综合 征中起了至关重要的作用。抑制血栓形成和溶栓治疗 被广泛应用于血栓性疾病。临床上应用的溶栓药物都 在不同程度上存在组织特异性差、需用量大、不良反应
响因素
组抑制血小板的聚集一Ｊ。有功能的ＲＧＤ序列都位于 暴露、伸展的分子表面，并且ＲＧＤ序列本身的空间构 象以及其附近的氨基酸基团对ＲＧＤ序列和ＧＰ
１１ ｂ／
Ⅲａ受体识别过程和识别能力极为重要。研究¨驯提 示ＲＧＤ的三维构象更有利于ＲＧＤ序列突出在药物分 子的表面，从而发挥更好的靶向作用，构象越稳定，与 受体的结合活性越低。ＲＧＤ序列羧端相连的氨基酸 残基通过调节肽链的构象，进而影响肽链与ＧＰ Ⅱｂ／Ⅲａ受体的结合水平。ｓｕ等¨ｕ通过电脑模拟的 方法得到了两种有合理空间位象的嵌合体ＳＡＫ模型， 其中一种含ＲＧＤ序列，一种含ＤＧＲ序列，即ＲＧＤ的
ＪＩＮＧ Ｌｉ—ｌｉ，
ＺＨＯＵ Ｊｉａｎ—ｚｈｏｎｇ， ＺＨＡＮＧ Ｈａｎｇ—ｋｅ
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ
２．Ｓｃｈｏｏｌ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
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Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
酸）序列。内源性ＲＧＤ序列存在于多种黏附蛋白（如
万方数据
・２ｌＯ・
！垒鱼篮痘堂选星！！！Ｑ生箜！！鲞筮！翅丛生鱼型ｉ婴！旦查：些丝！！！Ｑ。坠！：！！：丛：！
融合在ＳＡＫ的Ｃ末端，但此突变造成了ＳＡＫ溶栓活 性的降低。此后Ｓｚｅｍｒａｊ等¨４１成功地在ｒ－ＳＡＫ的Ｃ末 端加入组织型纤溶酶原激活剂（ｔｉｓｓｕｅ
ａｔ
ｓｐｅｃｉａｌ
ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ｐｌａｔｅｌｅｔ
ｂｂｅｔａ３（ＧＰⅡｂ／Ⅲａ），Ｃａｌｌ
ａｎｄ
ａｌｅ
ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｓｉｔｅｓ．Ｔｈｕｓ－ＲＧＤ—ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｈａｖｅ
ｃｕｒｒｅｎｔ
ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ
ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ ｂｅｉｎｇ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｉｓ
４．１．１
ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ＳＣＵ・ＰＡ），
也就是前尿激酶的ｋｒｉｎｇｌｅ区１１８位Ｇｌｙ与１１９位Ｌｅｕ 之间插入ＰＲＧＤＷＲ序列，突变体与野生型ＳＣＵ—ＰＡ相 比具有明显的抗血小板聚集活性，是一种双功能的溶 栓分子。孙迎庆等Ⅲ１在尿激酶原Ｋ区ｃ端的发夹区 插入了ＲＧＤＳ片段，得到了嵌合体型尿激酶原，嵌合体
纤维蛋白原、ｖＷＦ、纤维粘连蛋白）中，发挥了血小板聚 集和血栓形成等多种生物功能。其中纤维蛋白原上的 ＲＧＤ序列和ＧＰ １Ｉ ｂ／ｎｌａ受体的特异性结合是各种因 素致血小板聚集和血栓形成的共同最终通路Ｍ Ｊ。在 正常条件下，ＧＰｌＩ ｂ／１１１ａ受体的空间构象稳定，血小板 没有活性。当血浆中的血小板诱导剂［如凝血酶、胶 原蛋白、二磷酸腺苷（ＡＤＰ）、血栓素Ａ：等］与血小板
２
ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ
ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔ—ＰＡ）的环饼状结构Ｋ２、ＲＧＤ序列和水蛭素 （ｈｉｒｕｄｉｎ），得到了ＳＡＫ—ＲＧＤ．Ｋ２．Ｈｉｒ，体外试验显示该 融合蛋白不仅保留了良好的抗凝和激活纤维蛋白原活 性，而且与ｒ—ＳＡＫ相比，有着更好的抗血小板聚集和纤 维蛋白粘连活性。此后，Ｓｚｅｍｒａｊ等。１纠又在大鼠静脉 血栓模型上证明了ＳＡＫ－ＲＧＤ—Ｋ２一Ｈｉｒ比ｒ・ＳＡＫ有着更
！垒堡簦速芏连屋；！！Ｑ堡筮ｉ！登筮２翅丛生垡型ｉ！坚竖墨生：！鱼坐！Ｑ！Ｑ：堑型：！！：丛：！
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ＲＧＤ靶向溶栓药物的研究进展
景丽丽１ 综述周建中１ 张良珂２ 审校 重庆４０００１６；２．重庆医科大学药学院， 重庆４０００１６） （１．重庆医科大学附属第一医院心血管内科，
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＲＧＤ－ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ
中图分类号：Ｒ９６２；Ｒ５４１．４
摘要：溶栓药物的靶向运榆系统可提高溶栓药物的特异性和靶向性，减少溶栓药物全身用药所致的各种不良反应和临床并 发症。血小板膜糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体的活化是血小板聚集的最终共同通道，在血栓形成中起到重要作用。ＲＧＤ序列作为活化血小 板膜糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体的特异性配体，具有抗血小板聚集作用和血栓靶向性。因此国内外学者运用ＲＧＤ序列制备靶向溶栓药 物，并对比类药物进行靶向溶栓研宄。现就ＲＧＤ靶向溶栓药物的研究进展做一综述。 关键词： ＲＧＤ序列；靶向运输系统；溶栓药物
ｂ／１１１
膜上相应受体结合，并且经不同的细胞内信号机制使
ＧＰｌＩ ｂ／ｍａ受体立体构象发生改变并暴露活化后，纤
维蛋白原中的ＲＧＤ序列即与暴露活化的ＧＰ １１ ｂ／Ⅲａ 受体结合瞪］。纤维蛋白原可同时与２个血小板上激活 的ＧＰｌＩ ｂ／ｌｌＩａ受体结合，在相邻的血小板之问形成横 桥，引起血小板交联，该过程犹如链条，把相邻的血小 板连在一起，形成血栓。综上所述，ＲＧＤ序列只能与 血栓部位活化的血小板结合，而对循环血小板没有影 响。这也正是ＲＧＤ序列发挥血栓靶向性作用的基础。
ＲＧＤ序列配体与ＧＰ ＩＩ ｂ／ｍａ受体相互作用的影 ＲＧＤ序列通过作用于ＧＰ ＩＩ ｂ／１１ ａ受体的ＩＩ ｂ亚
强的溶栓活性。在此基础上，Ｋｏｗａｌｓｋｉ等¨钊用与
Ｓｚｅｍｒａｊ等同样的方法得到了融合蛋白ＳＡＫ．ＲＧＤ—Ｋ２． Ｈｉｒｕｌ，体外试验表明：与ｒ．ＳＡＫ和ＳＡＫ—ＲＧＤ—Ｋ２．Ｈｉｒ相 比，ＳＡＫ。ＲＧＤ．Ｋ２．Ｈｉｒｕｌ有着更好的溶栓、抗凝和抗血 小板聚集功能。 研究者利用ＲＧＤ序列对野生型葡激酶的Ｎ端氨 基酸序列进行了修饰，体外试验表明突变体有高度的 纤溶活性和显著的抗血小板聚集活性Ⅲ＇１８ Ｊ。Ｎｉｎｇ 等¨引在构建的低免疫原性葡激酶突变体ｍＳＡＫ （Ｋ１３０Ｔ、Ｋ１３５Ｒ）的基础上，通过位点特异突变，将葡 激酶的３５、３６、３７位氨基酸分别替换为Ｒ、Ｇ、Ｄ，得到 了ＲＧＤ一葡激酶突变体ｍＳＡＫ（Ｋ１３０Ｔ、Ｋ１３５Ｒ），活性分 析结果表明，ＲＧＤ．ｍＳＡＫ蛋白的溶栓活性不仅不低于 野生型葡激酶，而且还具有良好的抗血小板聚集效应 和低免疫原性。２００４年Ｓｕ等¨¨同样研制了集溶栓 活性、抗血小板聚集活性、低免疫原性为一体的多重功 能分子ＲＧＤ．ＳＡＫ和ＤＧＲ．ＳＡＫ。２００７年，Ｃｈｅｎ等Ⅲ］ 的体外试验显示ＲＧＤ．ＳＡＫ抑制ＡＤＰ诱导的血小板聚 集呈剂量依赖性，并且在猪冠脉血栓模型上证实各种 浓度的ＲＧＤ—ＳＡＫ溶解５０％血块的时间显著缩短。 Ｋｏｃｈａｎｏｗｓｋｉ等旧ｕ利用基因技术将两个ＲＧＤ序列引 入到ＳＡＫ内部，得到融合蛋白ＳａｋＳＴＡＲ，该蛋白有着 良好的溶栓作用，并且它的抗血小板聚集率达２７％。 ４．１．２以前尿激酶或尿激酶原为基础的含ＲＧＤ序列 的嵌合体溶栓药物：Ｌｉｎ等心２１将含有甘氨酰．脯氨酰一 精氨酰一脯氨酸（Ｇｌｙ—Ｐｒｏ—Ａｒｇ－Ｐｒｏ，ＧＰＲＰ）序列和ＲＧＤ 序列的ＧＺ５连接到前尿激酶的丝氨酸（ｓＰＡ）的Ｎ端， 制得了重组尿激酶的突变体ＧＺ５一ｓＰＡ，它保留了野生 型前尿激酶的抗原决定部位，溶栓活性是尿激酶的３ 倍。党听等旧列在单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｓｉｎ．
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ＲＧＤ靶向溶栓药物溶栓作用的研究进展 目前，此类药物均采用基因工程技术合成，且主要
４．１含ＲＧＤ序列的嵌合体溶栓药物 在重组葡激酶（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｓｔａｐｈｙｌｏｋｉｎａｓｅ，ｒ－ＳＡＫ）、葡 激酶（ｓｔａｐｈｙｌｏｋｉｎａｓｅ，ＳＡＫ）、尿激酶原（ｐｒｏｕｒｏｋｉｎａｓｅ）、 前尿激酶（ｐｒｏ—ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）等基础上进行。
ＧＰＩＩ ｂ／１１Ｉ
ａ受体
的特异性配体，具有抗血小板聚集作用和血栓靶向性。
基于此，国内外研究者将ＲＧＤ序列用于制备靶向溶栓 药物¨圳。现将ＲＧＤ靶向溶栓药物的研究进展综述如
下。
１
ａ受体特异性地识别ＲＧＤ序列。研
ＲＧＤ序列的结构和功能 ＲＧＤ序列即Ａｒｇ－Ｇｌｙ—Ａｓｐ（精氨酰列的结构物均可通 过其内部的ＲＧＤ序列抑制纤维蛋白原与ＧＰⅡｂ／ＩＩＩａ 受体两者的结合，阻断血小板的聚集，抑制血栓形成。
相反序列，体外抗血小板试验显示两种嵌合体ＳＡＫ有
类似的抗血小板活性，提示ＧＰ ＩＩ
ｂ／１１１
ａ可能仅识别
ＲＧＤ的空间构象，而与氨基酸顺序无关。ＲＧＤ肽有线 状和环状两种结构，环状ＲＧＤ肽比相应线性肽有着更 强的受体结合力和受体特异性。对ＲＧＤ一脂质体的研 究［１引发现环状ＲＧＤ．脂质体与活化血小板的结合力明
以ｒ—ＳＡＫ或ＳＡＫ为基础的含ＲＧＤ序列的嵌
合体溶栓药物：１９９７年，Ｗａｌｄａ等成功地将ＲＧＤ序列
万方数据
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型尿激酶原保留了全部野生型尿激酶原的纤溶酶原激 活活性，并具有很强的抗血小板聚集活性。 ４．１．３其它含ＲＧＤ序列嵌合体溶栓药物：溶栓寡肽 Ｐ６Ａ及其类似物已被证实有溶栓作用，将ＲＧＤ序列引 入它们的ｃ端和Ｎ端，构成了杂交寡肽序列，动物溶 栓模型上，杂交寡肽因其良好的血小板靶向性，溶栓活 性较母体寡肽明显增强。 抗栓肽（Ｄｅｃｏｒｓｉｎ）是从北美水蛭中提取的抗凝血 多肽，其Ｃ端含ＲＧＤ序列。Ｄｅｃｏｒｓｉｎ可以很好地和 ＧＰＩＩｂ／１１Ｉａ受体相互作用，有望成为新的ＧＰ １Ｉ ｂ／Ｉｎａ 受体拮抗剂∞］。张磊亮等‘驯成功得到了Ｄｅｃｏｒｓｉｎ和 尿激酶原的重组蛋白ｄｓｃｕＰＡ，ｄｓｃｕＰＡ有较强的溶栓、 抗栓和抗血小板聚集功能。
ｔｙｐｅ
目前，以ＲＧＤ序列为基础的ＧＰＩＩ ｂ／１１１ａ受体拮抗剂， 如替罗非班、拉米非班等，被广泛应用于临床急性冠状 动脉综合征，其抗血小板、抑制血栓的疗效得到充分肯 定［８］。利用ＲＧＤ序列对血栓部位活化血小板的靶向 作用，制备ＲＧＤ靶向溶栓药物，减少系统纤溶和出血 并发症，同时也抑制血栓部位血小板聚集，减少溶栓过 程中继发于血栓溶解、血流再灌注的再栓塞的发生，真 正意义上提高了溶栓药物的靶向性和特异性，减少了 不良反应和临床并发症。
４０００１６，Ｃｈｉｎａ；
ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
４０００１６，Ｃｈｉｎａ） 文献标识码：Ａ
文章编号：１００４－３９３４（２０１０）０２－０２０９－０４ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－３９３４．２０１０．０２．０１９
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ｒｅｃｅｐｔｏｒ∞ｌ＇ｖｅｓ够ａ ｃｏｍｍｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ
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ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｔｈｅ ＲＧＤ ｍｏｔｉｆ。ｗｈｉｃｈ ｔａｒｇｅｔ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｒｅｖｉｅｗ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ
ｃａｎ
ｉｍｐｍｖｅ
ｔｈｅｉｒ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｒｅｄｕｃｅ ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ－ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｏｍｐｌｉｃａ－
ｔｉｏｎｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｄｒｕｇ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｇｌｙｅｏｐｒｏｔｅｉｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ。ａｎｄ ｐｌａｙｓ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｌｐｈａ ＩＩ ｂｅｅｎ
多等缺点，导致临床并发症的发生，主要是出血倾向和
继发于再灌注的再栓塞。提高溶栓药物的特异性和血 栓靶向性，使药物选择性地作用于血栓部位，减少药物 的不良反应和临床并发症，成为当前溶栓药物一个亟 待解决的问题。 近年国内外学者进行了新型靶向溶栓药物的探 索。血小板膜糖蛋白（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＰ）Ｕ ｂ／１１ａ受体 的活化是血小板聚集的最终共同通道，在血栓形成中 起到重要作用。ＲＧＤ序列作为活化ＧＰ ＩＩ
显高于线状ＲＧＤ．脂质体。
３
ＲＧＤ靶向溶栓药物 目前，ＲＧＤ靶向溶栓药物的制备方式主要
有ｎＪ ３１：（１）利用基因工程技术，使溶栓药物和ＲＧＤ序 列蛋白在细胞株或菌株中共同表达得到含ＲＧＤ序列 的嵌合体溶栓药物。（２）以ＲＧＤ序列为导向，脂质体 为载体的ＲＧＤ导向溶栓药物。目前ＲＧＤ靶向溶栓药 物正在实验研究阶段ｇ
ｄｅｓｃｒｉｂｅｓ
ｍｓｅａｒｃｈ ｉｎ ＲＧＤ—ｔａｒｇｅｔｅｄ
ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ
ａｇｅｎｔｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：
ＲＧＤ ｍｏｔｉｆ；ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ；ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ
ａｇｅｎｔｓ
血栓的形成在冠状动脉粥样硬化、急性冠脉综合 征中起了至关重要的作用。抑制血栓形成和溶栓治疗 被广泛应用于血栓性疾病。临床上应用的溶栓药物都 在不同程度上存在组织特异性差、需用量大、不良反应