临床生物化学检验试剂盒的性能评价

第三节㊀临床生物化学检验试剂盒的性能评价

临床生化检验试剂盒是用化学和生物化学反应的原理㊁用于完成一个特定体外诊断检验,而包装在一起的一组组分㊂试剂盒组分可包括抗体㊁酶㊁缓冲液㊁稀释液㊁校准物㊁控制物或其他物品和材料,用于体外测定人体体液中的化学和生物化学组分来获取临床诊断信息㊂它是体外诊断试剂(i nv i t r od i a g n o s i s r e g e n g t s)中的一大类,根据我国国家食品药品监督管理局(S F D A)的‘医疗器械分类目录“,归为临床检验分析仪器类,按医疗器械管理㊂体外诊断试剂按风险级别进

行分类分级管理,Ⅲ㊁Ⅱ㊁Ⅰ类产品分别由国家㊁省级㊁市级药品监管部门审批,临床生化检验试剂盒多属Ⅱ类产品㊂

一㊁临床生物化学试剂盒的质量标准

2006年制订了‘临床化学体外诊断试剂(盒)通用技术要求“,规定了临床化学体外诊断试剂(盒)质量检验的通用技术要求,包括术语和定义㊁分类和命名㊁要求㊁试验方法㊁标签和使用说明㊁包装㊁运输和贮存㊂适用于医学实验室进行临床化学项目定量检验所使用的体外诊断试剂(盒)㊂该标准是目前临床化学体外诊断试剂(盒)注册审批的标准㊂

二㊁临床生物化学检验试剂盒的分类

根据其物理性状,可以分为干试剂和液体(湿)试剂,干试剂根据制备工艺不同分为干粉㊁冻干㊁片剂㊁干试剂条等㊂干试剂的优点是运输方便㊁保存期长,其缺点是组分均一性较差,瓶间差较大,分装过程中的称量误差和复溶时加入水量的误差,都导致瓶间的不均一性,水质的优劣对试剂的稳定性和测定结果的可靠性有相当大的影响㊂除干试剂条应用于干式生化仪外,其他干试剂已经逐渐被淘汰㊂液体试剂因组分高度均一㊁瓶间差小㊁测定重复性好㊁不需复溶直接使用等优点,是目前使用最广泛的剂型㊂液体试剂主要分为单液体型和双液体型㊂

(一)单液体型

单液体型特别适用于半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪㊂半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪因缺试剂瓶位置或试剂瓶位置少,而适用单试剂㊂从技术角度讲,要保证足够的试剂盒稳定性,在所有剂型中,单液体型试剂盒对稳定技术的要求最高,尤其是酶法分析试剂盒,将酶㊁辅酶㊁色原等组合为单一试剂,稳定技术更高㊂但抗干扰能力无法与双液体试剂比拟㊂

(二)双试剂液体型

大多数中㊁大型生化分析仪有两根试剂针,使用双试剂不会影响分析效率㊂有时为了稳定性的需要,试剂盒内含有三个试剂,临用前将某两个试剂混合,再按双试剂使用㊂因具备优点多,是目前主流剂型㊂

1.稳定性能好㊀与单一液体试剂相比,可以分拆为两个试剂,可采用不同的缓冲体系(离子强度和p H都不同),混合后为最适p H;其稳定技术容易得多,比如,可以将酶和辅酶与色原分开,也可把辅助酶与指示酶分开㊂

2.可消除样品自身空白㊀可设计成第一试剂与样品不发生化学和生物化学反应,两者混合后读取第一个吸光度,在两点平衡法中可扣除该吸光度,相当于做了一个空白对照㊂所以,原来

传统用单一试剂的方法,如双缩脲法测定总蛋白㊁溴甲酚绿法测定清蛋白等,都特地分拆成两个试剂,第一试剂的作用等同于蒸馏水,第二试剂经过浓缩,混合后各组分含量同传统的单一试剂,起到消除样品空白的作用㊂

3.提高抗干扰能力㊀①消除内源性和外源性干扰:首先让试剂Ⅰ与样品中的干扰物质反应,一定时间后再用试剂Ⅱ启动真正的测试反应,最大程度地消除内源性和外源性干扰㊂如消除甘油对T G㊁丙酮酸对A L T/A S T㊁N H4+对尿素的干扰等㊂②消除杂酶的干扰:如G L D H对待测脱氢酶的干扰㊂③消除T r i n d e r s反应负干扰,在试剂Ⅰ中的氧化剂与样品中胆红素㊁维生素C 氧化酶与样品中的维生素C进行预反应㊂

4.预反应㊀试剂Ⅰ与样品预反应,有足够的时间让辅基或辅酶对酶进行复活,免疫抑制法中使抗体对某一抗原的抑制更彻底㊂

(三)其他剂型

多项同测组合试剂是指两个相似的项目在同一反应杯中进行先后测定,其最大的优点可以减少试剂仓位㊂如直接胆红素和总胆红素㊁胆固醇和T G的组合试剂等㊂浓缩试剂则在测定之前,自动生化分析仪先稀释,优点是在工作量繁重时可以减少添加试剂的次数㊂

三、临床生物化学试剂盒的性能指标及评价

临床生化试剂盒的性能指标包含了所有方法学的性能指标,并增加了稳定性能的指标㊂一般来讲,采用化学反应原理的试剂盒稳定性较好,而酶㊁辅酶㊁底物㊁抗体等多不稳定,增加了对试剂盒稳定性的难度㊂根据‘临床化学体外诊断试剂(盒)通用技术要求“,参考‘临床化学体外诊断试剂(盒)产品技术审评规范“(2011版),试剂盒的性能指标及评价方法如下:

(一)试剂空白吸光度

用蒸馏水做空白,用指定的空白液加入试剂作为样品测试,是判定试剂质量的一个有效指标㊂对以N A D H做底物的负反应试剂盒,因N A D H在中性缓冲体系不够稳定,规定其空白吸光度需>1.0,目的是保证足够量的底物N A D H,保证足够的线性范围,避免底物耗尽㊂以色素原底物的试剂盒,其不稳定因素主要来自于底物㊂因色素原底物容易自身水解,因此也需要规定其空白吸光度不能超出一定范围,以防止底物不足㊂对以T r i n d e r s反应原理的试剂盒,防止发色基团的氧化,规定空白吸光度需<0.05;因较高的空白吸光度会导致线性范围变窄,重复性变差㊂

(二)试剂空白吸光度变化速率

对于速率法试剂盒,用指定的空白液加入试剂作为样品测试时,测定试剂空白吸光度变化(ΔA/m i n),用来检查试剂在工作状态下的稳定性㊂但事实上,试剂空白吸光度变化速率无法反映试剂盒的稳定性,因为试剂盒的稳定期一般要求一年以上㊂若每分钟有明显的吸光度变化,按0.001/m i n计算,37ħ孵育一天,其总的吸光度变化达到1.44,说明试剂早已失效㊂

试剂空白吸光度变化速率主要反映干扰程度和仪器的稳定性,如反应杯的洁净程度及分析仪的交叉污染严重程度㊂但若某个试剂中有杂酶,若两个试剂混合后会造成试剂空白吸光度变化速率过高,所以也是评价试剂盒质量性能的指标㊂

(三)分析灵敏度

用吸光度差值(ΔA)或吸光度变化(ΔA/m i n)来表示单位浓度的被测物反应所引起的信号变