布鲁氏菌病多种检测方法的对比

布鲁氏杆菌病多种检测方法的对比

贾泽颖刘邓郭安娜孙玉芳王金秀

（北京三元集团畜牧兽医总站北京市德胜门外清河南镇100192）布鲁氏杆菌病是由布鲁氏杆菌引起的一种人畜共患传染病，属于我国的二类传染病。奶牛是布鲁氏杆菌最易感的动物，一旦在牛群中发生，将导致巨大的经济损失和严重的公共卫生问题。近年来随着奶牛业在全国各地的迅猛发展以及奶牛流通的增加，原在牧区流行的布鲁氏杆菌病在内地也悄然上升。为了有效遏制布鲁氏菌病对奶牛业的影响，确保公共卫生安全，加强对奶牛布鲁氏菌病的综合防治和净化的工作就显得极为重要。定期检疫是奶牛场进行布鲁氏杆菌病的防治和净化的重要措施。而布鲁氏菌病的检测方法是影响布鲁氏菌病检疫效果的重要因素。目前国内普遍采用的方法是：虎红平板凝集试验初次筛选，然后利用试管凝集试验进行最终定性，而国际上采用的初次筛选的方法主要有：间接酶联免疫吸附试验（I-ELISA）和荧光偏振试验，为了对比这四种方法在布鲁氏杆菌病的检疫结果方面的差异性，进行了本次试验。

1 材料和方法

1.1 试验血样

收集88份奶牛血清样本，分别进行4种检测方法的对比试验。

1.2 试验试剂

布鲁氏杆菌虎红平板凝集抗原中国兽药监察所提供；

布鲁氏杆菌试管凝集抗原中国兽药监察所提供；

布鲁氏杆菌荧光偏振测定法抗体检测试剂盒由哈尔滨平和生物技术有限公司提供；

布鲁氏杆菌病间接酶联免疫吸附试验（I-ELISA）抗体检测试剂盒由哈尔滨平和生物技术有限公司提供。

1.3试验方法

按照国家以及国际上通用的标准，用虎红平板凝集试验、荧光偏振测定法、I-ELISA及试管凝集试验四种方法分别对血清样品进行检测。

2 结果

2.1 琥红平板凝集试验结果：其中阳性33份，阴性55份，阳性率为37.5%；

2.2 荧光偏振试验结果：其中阳性26份（包含在虎红平板凝集试验33份阳性样品中，具体

结果见表1），阴性60份，可疑2份，阳性率为29.5%；

2.3 I-ELISA试验结果：其中阳性31份（包含在虎红平板凝集试验33份阳性样品中，具体结果见表1），阴性57份，阳性率为35%；

2.4 试管凝集试验结果：其中阳性25份（包含在虎红平板凝集试验33份阳性样品中，具体结果见表1），阴性58份，可疑5份，阳性率为28%。

表1虎红平板凝集试验33份阳性结果同另外三种方法的对比试验数据编号6361 7373 6280 5228 5049 6061 5472 7388 5184 平板阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性试管可疑强阳阴性强阳强阳强阳阴性强阳强阳荧光偏振可疑阳性阴性阳性阳性阳性阴性阳性阳性I-ELISA 阳性阳性阴性阳性阳性阳性阳性阳性阳性编号5381 7148 5392 5984 6254 2072 4964 7361 5981 平板阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性试管强阳强阳强阳可疑强阳强阳强阳阳性阳性荧光偏振阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阴性I-ELISA 阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性编号5217 5915 5303 6370 6266 7613 6234 5035 5034 平板阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性试管强阳可疑强阳强阳强阳强阳强阳强阳强阳荧光偏振阳性阴性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性I-ELISA 阳性阴性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性编号5961 4881 5746 7384 7451 5994

平板阳性阳性阳性阳性阳性阳性

试管阴性可疑可疑强阳强阳强阳

荧光偏振阴性可疑阳性阳性阳性阳性

I-ELISA 阳性阳性阳性阳性阳性阳性

3 分析与讨论

目前国内外主要采取的布鲁氏菌病血清学检测方法有虎红平板凝集试验、试管凝集试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光偏振等方法。我国国标采用虎红平板凝集试验初筛，试管凝集试验定性的检测方法。布鲁氏杆菌诱导动物产生最多的抗体是IgG1，其次为IgM 抗体，虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测的主要是IgM抗体，容易受到动物体内其它IgM抗体的干扰。虎红平板凝集试验特异性不高，受试验温度、凝集时间相对较短和人为主

观因素的影响，不易准确判定结果，只能作为初筛；而试管凝集试验是我国布鲁氏菌病的法定检测判定方法，但是该方法操作繁琐、费时，不适于现场采用，也受人为主观因素的影响。OIE标准规定采用ELISA和荧光偏振作为布氏杆菌病的国际贸易初步诊断方法。ELISA和荧光偏振方法检测监测的敏感性和特异性好，反应时间短，避免了人为因素的干扰，易标准化和质量控制，但这两种方法也只能用于初筛。

本试验通过四种不同的方法对同一批样品进行布鲁氏杆菌病的检疫，经过统计可知本次试验检测的88份样品中：I-ELISA试验与虎红平板凝集试验有87份相符合，不符合的1份样品I-ELISA试验阴性而虎红平板凝集试验阳性，在另外两种检测方法中同样为阴性，因此可以从侧面反映出I-ELISA试验与虎红平板凝集试验相比具有较好的敏感性和特异性好，反应时间短，避免了虎红平板凝集试验人为因素的干扰，对牛群布鲁氏杆菌病的初筛可以用I-ELISA试验代替虎红平板凝集试验；荧光偏振试验与试管凝集试验有85份相符合，2份试管凝集试验可疑而荧光偏振试验为阳性，1份试管凝集试验可疑而荧光偏振试验为阴性，因此荧光偏振试验同I-ELISA试验和虎红平板凝集试验相比特异性更为显著；。

奶牛布鲁氏菌病危害着奶牛生产，危害着牛奶的卫生安全，更危害着养殖人员的身体健康，因此能快速而高效的对其进行诊断成了当前的迫切需要，而从本试验分析知：荧光偏振试验由于其更为突出的特异性、敏感性和高效性，更适合对奶牛布鲁氏菌病进行初次筛检。