重组水蛭素

重组水蛭素
一、重组水蛭素的理化性质
1、天然水蛭素的结构
水蛭素是一种单链环肽化合物，由65个氨基酸残基组成，分子量7KD，N端有三个硫键，，分别在6～14位，16～28位和22～39位的半胱氨酸残基，使N端肽链绕迭成密集形核心环肽结构。

N端的5个氨基酸残基为疏水基团，C端则为亲水基团，并游离在分子的表面。

肽链中部还有一个特殊序列，不被蛋白酶所降解。

素存在10种以上变异体，主要有3种变异体，简称为HVl、HV2和HV3。

2、重组水蛭素的结构
重组水蛭素除了63位Tyr残基上脱SO3－外，其他与天然水蛭素一样。

3、重组水蛭素的等电点：为3.9。

4、重组水蛭素的溶解性质
溶于水或吡啶，几乎不溶于醇、乙醚、丙酮或苯
5、重组水蛭素的稳定性
1）、水蛭素干燥状态下稳定；室温下水中可稳定存在6个月；80℃下加热15min不被破坏。

2）、pH值升高则稳定性下降，在0.1mol／L盐酸溶液或0.1m01／L氢氧化钠溶液中可稳定15min。

3）、水蛭素不被胰蛋白酶水解，对α－糜蛋白酶一定的耐受性；但番木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶A则可使之失去活性。

4）、描述了稳定的制剂处方重组水蛭素与二价金属离子(ca2+，zn2+或M矿+)形成性螯合物，在水中可稳定储存，用于静脉或皮下注射。

二、重组水蛭素的提取纯化工艺
1、发酵液经超滤、透析、离子交换层析，分离纯化目的蛋白
1.1 超滤与透析发酵液于5000rpm冷冻离心20min，离心上清液超滤(MWCO=30000)并收集透过液，加入蒸馏水重复超滤，合并透过液。

透过液超滤浓缩（MWCO=3000），加入蒸馏水重复透析除盐，最终浓缩至所需体积，置于4℃冰箱保存备用。

1.2离子交换层析平衡缓冲液为PH3.0和PH5.0的甘氨酸缓冲液（50mmol/L），梯度洗脱缓冲液为1/LNaCL(于50mmol/L的甘氨酸缓冲液中）。

样品SP-Sepherose FF吸附并洗脱后，收集重组水蛭素活性峰，测定蛋白浓度和比活力。