【生理学实验】血液学实验

实验报告

实验名称

血液学实验

实验目的

1、掌握实验用兔颈动脉采血的方法

2、了解红细胞比容及其测定方法

3、血液凝固的基本过程及影响血凝的一些因素

实验原理

1、红细胞比容测定原理

将抗凝血放在特制有刻度的玻璃管(温氏分血管)中，经过离心沉淀，使血细胞与血浆分离。红细胞下沉，彼此压紧而又不改变每个血细胞的正常形态。根据玻璃管刻度的读数，可以计算出红细胞在全血中所占的容积百分比——即红细胞比容。 2、血液凝固原理

血液凝固可分为三个主要步骤。第Ⅰ阶段是凝血因子FX 激活成FXa 并形成凝血酶原复合物（凝血酶原激活物）第Ⅱ阶段是凝血酶原（Prothrombin ，F Ⅱ）激活成为凝血酶（thrombin ，F Ⅱa ）第Ⅲ阶段是纤维蛋白原（FI ）转变成纤维蛋白（filbrin ，FIa ）。在这三个主要步骤中都需要Ca 离子的参与。

实验材料及设备

材料：大兔一只，兔手术保定台， 设备：烧杯（500ml ，50ml ），常用手术器械（手术刀、毛剪、手术剪、止血钳），线动脉套管，动脉夹 温氏分血管，长颈滴管，5毫升试管，离心机，天平，5ml 注射器试管，试管架，吸管，2％戊巴比妥钠，3.8％柠檬酸钠，肝素，1％氯化钙，5％草酸钾，液体石蜡，带有开叉橡皮管的玻棒等。

试验方法及步骤

(一)手术操作

1、2％戊巴比妥钠按1ml/kg 的剂量从耳缘静脉注入实验用兔

2、麻醉后仰卧固定于手术台上（同时准备实验用试管等）

3、剪去颈部术野的被毛，切开皮肤，找出两侧颈动脉

4、将颈动脉剥离2厘米左右，然后在颈动脉下面穿两条线。将一侧颈动脉在远心端用线结扎，再于近心端用动脉夹夹住。结扎处与动脉夹之间最好不少于1.5厘米

5、用眼科剪刀在这段动脉上靠近结扎处1／4的地方，斜向近心方向剪一小口，将动脉套管插入，用线扎好，以免滑脱，待用（需采集血样时打开动脉夹即可）

专业： 动物科学 姓名： 张思佳

学号： 3090100252 日期： 2011/ 5/5 地点： 生物实验楼

装

订

线

（二）比容的测定

1、用配有长注射针的注射器吸取含肝素的抗凝血，然后将注射针插入温氏分血管的底部，缓缓地将滴管内的血液注入分血管内(不得有气泡)，使血液正确地装到刻度10处。

2、离心：将温氏分血管放入离心机中，以每分钟3000转的速度离心30分钟。取出分血管，观察红细胞所占的容积并记录其数值(不包括白细胞和血小板沉积所形成的灰白色薄层)。然后再以3000转速度离心5分钟，如红细胞的容积与上次记录相同，表明红细胞已被压紧，读数即为红细胞的比容(如读数为4.0，即表示100毫升血液中，红细胞容积占40毫升)。 （三）影响血凝的因素测定： 影响血凝的物理因素

1、取试管3支，一支管内加少量棉花，一支管内壁涂少许液体石蜡，一支不作任何处理，为对照。

2、 将以上三支试管分别加入新鲜血液2毫升，每30秒轻轻地倾斜试管一次，分别记录三支试管的凝血时间。

温度对血凝的影响

取试管两支，分别加入新鲜血液2毫升。一管置于常温或37℃水浴中，一管放在低温或冰箱内，记录两支试管的凝血时间。 钙离子对血凝的影响

1．取试管3支，一支放入3.8％柠檬酸钠3滴，一支加入5％草酸钾3滴，一支不作任何处理，为对照(与1共用)。然后，再向各管分别加入1毫升新鲜血液，混合后观察并记录血凝情况。 2．将加入柠檬酸钠管和草酸钾管分别再加1％CaCl2 1—2滴后，观察并记录血凝情况。 肝素的作用

取一支试管放肝素8单位，再加入新鲜血液1毫升，摇匀后，观察其结果。

取新鲜血液50毫升，放入烧杯中用带有开叉橡皮管的玻棒搅动，以除去其中的纤维蛋白；将除去纤维蛋白的血液静置之，观察其能否凝固。

图 兔颈局部解剖图

1喉及气管 2颈总动脉 3迷走神经 4交感神经 5减压神经 6节状神经 7颈前神经节 8喉区神经9主动脉弓 10迷走心神经

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订

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实验结果

分析讨论

通过与空白对照组的对比，可以发现加棉花，适宜的温度以及足量浓度的钙离子均会加速血液的凝固。而低温、血液中加入肝素、加入液体石蜡以及加入柠檬酸钠和草酸钾均能减缓血液凝固速度。其中，又以加肝素减缓血液凝固的效果最佳。通过查阅资料，可以了解这些因素或加速或减速血液凝固的原理。棉花：棉花形成了纤维粗糙面导致血小板在该处沉积、凝集，形成串珠装单行排列，从而促进了血凝的发生。

液体石蜡：液体石蜡形成了光滑表面。光滑的表面，也称不湿表面，可减少血小板的聚集和解体，减弱对凝血过程的触发。

温度：凝血酶发挥作用需要适宜的温度。温度适宜时，凝血酶活性高，血凝速度快。温度较低时凝血酶活性低，血凝速度慢。

肝素：增强抗凝血酶Ⅲ的作用，抑制凝血酶原的激活过程，阻止血小板的黏附、聚集与释放反应，促使血管内皮细胞释放凝血抑制物和纤溶酶原激活物。

钙离子：血液凝固的多个环节中都需要钙离子的参加，足量浓度的钙离子加速血液的凝固

柠檬酸钠和草酸钾：柠檬酸钠和草酸钾能与钙结合形成不易解离但可溶解的络合物，从而减少了血浆中的钙离子，防止了血液凝固。

纤维蛋白：在凝血过程中，血浆中的纤维蛋白转变为不溶的血纤维。除去血浆中的纤维蛋白，血液就不会凝固。