化妆品中10种α-羟基酸检测方法征求意见稿

化妆品中10种α-羟基酸检测方法

（征求意见稿）

高效液相色谱法

1范围

本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中α-羟基酸的含量。

表1

2-羟基丁酸0.040.1280240

扁桃酸0.0010.00326

二苯乙醇酸0.0010.00313

羟基辛酸0.020.0640120

3试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1磷酸氢二铵，分析纯。

3.2磷酸，优级纯。

3.3甲醇，色谱纯。

3.4混合标准储备溶液：分别精密称取（精确到0.0001g）葡糖醛酸400mg、酒石酸200 mg、羟基乙酸400mg、苹果酸400mg、乳酸500mg、柠檬酸400mg、2-羟基丁酸500mg、扁桃酸10mg、二苯乙醇酸10mg和羟基辛酸400mg于同一50mL容量瓶中，加水40mL，60℃

混合标准系列溶液，

mg/L 20010020020025020025055200 4002004004005004005001010400 800400800800100080010002020800 200010002000200025002000250050502000 40002000400040005000400050001001004000

5.2样品处理

称取样品1g（精确到0.001g）于10mL具塞比色管中，置于90℃水浴中30min以去除挥发性有机溶剂，加水至10mL，充分涡旋混合30s，60℃超声提取30min，取适量样品在10000rpm

下高速离心15min，取上清液过0.45μm的滤膜后作为待测溶液。

5.3参考色谱条件

色谱柱：CAPCELL PAK ADME C18柱（250mm×4.6mm×5μm），或等效色谱柱；当样品基质对待测α-羟基酸有干扰时，可采用CAPCELL PAK ADME C18柱（250mm×4.6mm

×3μm）按表3流动相相同梯度洗脱程序进行分离；

流动相：A：0.1mol/L的磷酸氢二铵溶液，用磷酸调pH值为3.0；B：甲醇；

式中：ω——样品中α-羟基酸组分的质量分数，μg/g；

ρ——从标准曲线得到待测组分的质量浓度，μg/mL；

V——样品定容体积，mL；

m——样品取样量，g。

7图谱

图1标准液相色谱图CAPCELL PAK ADME C18柱（250mm×4.6mm×5μm）

1:葡糖醛酸（4.268min）；2:酒石酸（4.733min）；3:羟基乙酸（5.223min）；4:苹果酸（6.279min）；5:乳酸（7.636min）；6:柠檬酸（8.346min）；7:2-羟基丁酸（13.104min）；8:扁桃酸（17.157min）；9:二苯乙醇酸（20.677min）10:羟基辛酸（21.264min）。

图2标准液相色谱图CAPCELL PAK ADME C18柱（250mm×4.6mm×3μm）

1:葡糖醛酸（4.176min）；2:酒石酸（4.710min）；3:羟基乙酸（5.285min）；4:苹果酸（6.611min）；5:乳酸（8.260min）；6:柠檬酸（9.187min）；7:2-羟基丁酸（13.921min）；8:扁桃酸（17.636min）；9:二苯乙醇酸（21.613min）10:羟基辛酸（22.480min）。

附录A

羟基乙酸等10种α-羟基酸结果的确证

因α-羟基酸紫外吸收光谱图不特征，必要时可采用液相色谱－质谱法确证结果，以检查化妆品中是否有其他组分干扰α-羟基酸的测定。葡糖酸会干扰酒石酸的测定，乳糖酸会干扰

220100

流速：0.3mL/min；

柱温：40℃；

进样量：5μL；

A.1.2质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI源）；

监测模式：负离子多反应监测模式；监测离子对及相关电压参数设定见表3；雾化气流速：3L/min；

干燥气流速：15L/min；

脱溶剂管温度：300℃；

离子源加热温度：500℃；

碰撞气：Ar，230kPa；

A.2图谱

图1混合标准溶液LC-MS色谱图

1:葡糖醛酸（2.072min）；2:酒石酸（2.443min）；3:羟基乙酸（2.570min）；4:苹果酸（3.241min）；5:乳酸（3.956min）；6:柠檬酸（5.135min）；7:2-羟基丁酸（9.231min）；8:扁桃酸（2.570min）；9:二苯乙醇酸（13.594min）10:羟基辛酸（12.736min）。

化妆品中10种α-羟基酸检测方法

起草说明

为加强化妆品中限用物质的监督管理，进一步提高化妆品产品安全性，国家食品药品监督管理总局化妆品标准专家委员会秘书处组织开展了化妆品中10种α-羟基酸含量测定方

法的起草工作。现就起草工作有关情况说明如下：

一、起草的必要性

α-羟基酸在化妆品中已有较长的使用历史，已成为护肤化妆品中较有效的、能促进皮肤再生的活性添加剂，可作为温和的剥离剂，也可用作pH调节剂和皮肤调理剂。α-羟基酸广泛用于洁肤、护肤和面膜产品上，有化妆水、乳液、膏霜和凝胶等多种剂型。α-羟基酸是生理学方面的胶粘剂，可使表皮细胞内聚力增加而呈光滑，短时间内皮肤组织有明显改善。由于α-羟基酸在抗皮肤老化方面的显著功效，它已成为“抗皮肤老化用品中最有效、最热门也是最为简单的成分”。但长期使用可能会减弱皮肤对紫外线的抵抗力，导致皮肤老化，加速细胞的破坏或死亡，导致皮肤发红、起泡及灼伤，可能给皮肤造成永久性的伤害，其长期的安全性无法得到保障。最近由化妆品、卫生品和香料协会发起的一项报告说，α羟基酸会增加对紫外线的敏感性。我国《化妆品安全技术规范》规定化妆品配方中其含量不得大于6%。因此，对α-羟基酸的检测是化妆品卫生管理的一项重要指标。

二、起草依据及主要参考文献

《化妆品安全技术规范》（2015年版）对5种α-羟基酸的测定选用液相色谱法（一法）、离子色谱法（二法）、气相色谱法（三法）共三种分析方法。此外，α-羟基酸的测定还有比色法、毛细管电泳法、化学发光法、核磁共振等分析方法。比色法虽操作简便、快速，但重复性较差，专一性不强，不适合多种α-羟基酸的同时分析测定。离子色谱法（IC）的前处理简单，检测限低，检测速度快，准确性高，干扰小，但需要专门的仪器配合使用，如分离柱、电导检测器等。IC法中五种物质保留时间比较接近，分离度差，容易引起相互干扰，是其方法的一大不足。由于α-羟基酸的热不稳定性和化学活泼性，α-羟基酸不能直接进行气相色谱分析，须经过硅烷化衍生后再进行分析，但是衍生化处理会使分析结果的重现性较差，而且比较费时，简便性方面要逊于其他方法。优点是抗干扰能力强，当样品中存在基体干扰时优于HPLC、IC法。液相色谱法检出限低，线性范围宽，准确度好，HPLC法通过保留时