奶粉中阪崎肠杆菌分离株表型特征分类(一)

奶粉中阪崎肠杆菌分离株表型特征分类(一)
阪崎肠杆菌(Enterobactersakazakii)属于肠杆菌属的1个新种〔1〕。

本文采用目前应用最广、在微生物鉴定方面得到公认的肠杆菌科细菌生化鉴定试剂(API20E)分析了阪崎肠杆菌的生化反应特性，并利用阴沟肠杆菌噬菌体进行裂解试验测定了阪崎肠杆菌的易感性，对奶粉中18株阪崎肠杆菌分离株和4株美国典型菌种保藏中心(ATCC)参考菌株进行了表型分类。

旨在对奶粉中阪崎肠杆菌分离株的表型特征进行分类，以便准确地对其鉴别。

现报告如下。

1材料与方法
材料(1)标准菌株：阪崎肠杆菌ATCC29544，ATCC29004，ATCC51329，ATCC12868。

(2)阪崎肠杆菌分离株：分离自国内市场奶粉抽查样品，共18株。

经AP120E和英国荧光快速微生物鉴定／药敏分析仪，2种系统对阪崎肠杆菌的鉴定概率(％)。

检验检疫菌种保藏中心(IQCC)10403-，；10403-2(98，；10403-3(，；10403-，；10403-5(98，；10403-6(98，
；10403-，；10403-，；10403-9(98，
；10403-，；10403-11(98，；10403-，；10403-13(98，；10403-14(98，100)；10403-，；10403-17(98，98；10403-18(98，；10403-23(98，。

(3)试剂与培养基：脑心浸液肉汤(BHI)(美国Difico 公司)；胰酪胨大豆胨琼脂(TSA)、营养琼脂(北京陆桥公司)；API20E(法
国生物梅里埃公司)；阴沟肠杆菌噬菌体(广州虎克生物技术有限公司)。

方法
菌株培养将每株参考菌株和分离菌株分别接种于灭菌BHI肉汤，36℃培养24h，再接种于TSA斜面，36℃培养24h，作为储备菌株，试验时从储备菌株用接种环接种于营养琼脂，划线分离37℃培养24h形成单菌落。

阪崎肠杆菌的生化特征及噬菌体裂解实验API20E实验：将试验菌株，按照API20E使用说明进行操作，36℃培养22～24h后，按照说明书滴加相关试剂，观察和记录结果。

噬菌体裂解实验：接种针轻点生长于营养琼脂上的单个纯菌落，通过管壁研磨使其均匀分散在2ml 普通肉汤中，约100CFU／ml，取1接种环(约100μl)菌悬液涂布于经过预处理(90mm，20ml，放42～44℃恒温箱30min使表面干燥)的营养琼脂表面，干燥(同前)，取100μl阴沟肠杆菌噬菌体滴加于营养琼脂表面，36℃培养22～24h，观察裂解结果，以融合裂解、不完全裂解和不裂解记录实验结果。

阪崎肠杆菌的表型特征分类以ATCC参考菌株在API20E上反应的生化特征为生物1型，对于阪崎肠杆菌分离株，去掉相同的生化反应，保留不一致的生化反应项目进行分析，每1种与参考菌株不同的生化特性为1种新的表型。

2结果
测定结果API20E共有21项生化反应，主要区别在于伏-普
试验(VP)、肌醇和山梨醇方面，4株ATCC参考菌株生化反应一致，鉴定数值为3305373，7株分离株与参考菌株一致％)，将参考菌株的表型特征定义为生物1型，按照伯杰氏细菌手册分类方法〔2〕，VP、肌醇、山梨醇分别为+、+、-，与生物1型相比，肌醇阴性为3株，比例为％，为生物2型；VP阴性9株，比例为50％，为生物3型；山梨醇阳性2株，比例为％，为生物4型；尿素阳性，1株，比例为5％，为生物5型；精氨酸阴性1株，比例为5％，为生物6型。